(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210271774.2 (22)申请日 2022.03.18 (71)申请人 华中农业大 学 地址 430070 湖北省武汉市洪山区狮子山 街1号 (72)发明人 张椿雨　王燕燕　向贤裕　甘龙财　 陈鹏　 (74)专利代理 机构 北京盛询知识产权代理有限 公司 11901 专利代理师 袁善民 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12Q 1/686(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种与大白菜DW抗根肿病位点CRA8.1连锁 的分子标记及其应用 (57)摘要 本发明公开了一种与大白菜DW抗根肿病位 点CRA8.1连锁的分子标记及其应用， 涉及分子遗 传育种领域。 所述分子标记的核苷酸序列如SEQ   ID NO： 1所示。 本发明通过有性杂交的常规育种 途径成功将大白菜DW的抗根肿病位点CRA8.1导 入到不抗病甘蓝型油菜品种ZS11和不抗病白菜 型油菜品种黄籽沙逊中， 并利用BSA测序结合生 物信息学技术定位控制根肿病抗性的位点 CRA8.1开发出与该位点紧密连锁的分子标记 A08‑DW1， 可以为培育抗根肿病的十字花科云薹 属作物提供新抗源以及为抗根肿病基因选育提 供有效的分子标记， 并显著提高抗性育种的效 率。 权利要求书1页 说明书5页 序列表1页 附图3页 CN 114774569 A 2022.07.22 CN 114774569 A 1.一种与大 白菜DW抗根肿病位点CRA8.1连锁的分子标记， 其特征在于， 所述分子标记 的核苷酸序列如SEQ  ID NO： 1所示。 2.根据权利 要求1所述的分子标记， 其特征在于， 所述分子标记的引物对序列如SEQ  ID  NO： 2和SEQ  ID NO： 3所示。 3.一种利用权利要求1或2所述的分子标记筛选抗根肿病植株的方法， 其特征在于， 包 括以下步骤： (1)提取待测植株的基因 组DNA； (2)利用权利要求2所述的引物对进行PCR扩增； (3)对步骤(2)得到的扩增产物进行PAGE电泳检测， 若出现134bp 大小的特征条带， 则该 植株为抗根肿病植株。 4.根据权利要求3所述的方法， 其特征在于， 所述PCR的扩增体系为： 总反应体系20μL， 其中DNA模板2 μL， 正向反向引物各0.8 μL， 2 ×Taq Master Mix(Dye Plus)10 μL， ddH2O 6.4 μ L。 5.根据权利要求3所述的方法， 其特征在于， 所述PCR的扩增程序为： 预变性95℃5min； 95℃30s； 54℃3 0s； 72℃3 0mins； 35个循环后； 72℃延伸5mi n。 6.根据权利要求1或2所述的分子标记在云薹属植物根肿菌抗性改良分子标记辅助育 种中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114774569 A 2一种与大白菜DW抗根肿病位点 CRA8.1连锁的分子标记及其 应用 技术领域 [0001]本发明涉及分子遗传育种领域， 特别是涉及一种与大白菜D W抗根肿病位点C RA8.1 连锁的分子标记及其应用。 背景技术 [0002]根肿病是一种高度传染性的土壤传播疾病， 专门危害芸苔属植物， 它是由芸苔属 根肿菌(Plasmodiophora  brassicae)引起的。 大多数芸薹属植物， 包括甘蓝型油菜 (Brassica  napus)、 甘 蓝(Brassica  olerace)和白菜(Brassica  rapa)等， 都能被根肿菌侵 染， 敏感植物在侵染后表现出根系肿胀 症状， 导致根系水分和养 分输送功能障碍。 最 终枯萎 和死亡。 近年来， 该疾病在世界范围内迅速蔓延， 造成十 字花科作物和蔬菜严重减产。 [0003]目前为止培育和应用抗根肿病品种是抵抗根肿病在世界范围内的快速传播的最 有效、 最环保的方法。 大多数根肿病抗性位点已在白菜(B.rapa， genome  AA,2n＝20)中发 现， 并已将抗病位点引入不抗病十字花科作物中， 明显改善其对根肿菌的抗性表型。 事实 上， 对根肿病的抗性是一个相对的术语， 因为宿主可以对从一个地区分离出来的病原体产 生抗性， 但同时又容易受到来自另一个地区的病原菌的影响， 因为根肿病病原菌的遗传背 景和毒力水平各不相同。 另外， 目前农业中使用的一些主要抗性位点提供了有效且高度特 异性的抗性， 但病原菌的效应蛋白基因会积累突变， 从而导致抗性的丧失。 例如， 在加拿大 的阿尔伯塔省， 在第一个CR品种商业化发布后仅四年， 就发现了一种 能够克服抗性的 “新 的”芸苔属根肿菌病原菌类型。 抗根肿病油菜新品种华双5R和华油杂62R在中国被广泛利 用， 它们对PbZj， PbCd具有抗性， 但对PbTc和PbXm没有抗性。 过去， 人们根据一系 列芸薹属植 物寄主对特定病原菌的反应建立了不同的分类体系。 最广泛使用的芸苔属根肿菌 (Plasmodiophora  brassicaea)分类系统是Williams系统(Williams  1966)。 根据Williams 系统， 4型是中国最常见的根肿菌类型。 由于， Williams系统对于鉴定中国的根肿菌类型存 在一定具有局限性， 因此最近研究者又提出了一种新的根肿菌鉴别系统SCD(sininitic   clubroot  differential  system)将中国的4号生理小种 进一步划分为11个亚型(Pang  et  al 2020)， 这说明Williams系统确定的中国4号生理小种实际上是由类型丰富的根肿菌组 成， 因此加速筛选针对抗不同根肿病病区的抗性资源， 鉴定新的抗性基因， 对中 国根肿病抗 病育种具有极其重要的意 义。 发明内容 [0004]本发明的目的是提供一种与大白菜DW抗根肿病位点CRA8.1连锁的分子标记及其 应用， 以解决上述现有技术存在的问题， 本发明通过有性杂交的常规育种途径成功将大白 菜DW的抗根肿病位点CRA8.1导入到不抗病甘蓝型油菜品种ZS11和不抗病白菜型油菜品种 黄籽沙逊中， 并利用BSA测序结合生物信息学技术定位控制根肿病抗性的位点CRA8.1开发 出与该位点紧密连锁的分子标记A08 ‑DW1， 可以为培育抗根肿病的十字花科云薹属作物提说　明　书 1/5 页 3 CN 114774569 A 3