(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210267317.6 (22)申请日 2022.03.17 (71)申请人 锦州医科 大学 地址 121001 辽宁省锦州市 凌河区松坡路 三段40号 申请人 天津科润农业科技股份有限公司 (72)发明人 罗枫　牛国保　高文政　王丽杰　 (74)专利代理 机构 西安汇恩知识产权代理事务 所(普通合伙) 6124 4 专利代理师 毕波 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 与菜花颜色相关的分子标记的引物及鉴别 菜花颜色的方法 (57)摘要 本发明提供了一种与菜花颜色相关的分子 标记的引物， 包括正向引物FAM、 正向引物HEX和 反向引物 C， 引物FA M的核苷酸序列如SEQ  ID NO: 1所示， 引物HEX的核苷酸序列如SEQ  ID NO:2所 示， 所述反向引物C的核苷酸序列如SEQ  ID NO:3 所示。 还提供了鉴别菜花颜色的方法， 该方法为： 提取菜花叶片基因组DNA， 以菜花叶片基因组DNA 为模板进行PCR扩增， 得到PCR扩增产物， 对PCR扩 增产物进行分析， 在C07号染色体基因组位置区 间50387046bp ～50387048bp存在等位基因AGT插 入的为白菜花， 等位基因AGT 缺失的为黄菜花。 本 发明可实现快速辅助鉴定菜花颜色， 相对传统田 间试验效率高， 结果可靠 。 权利要求书1页 说明书4页 序列表1页 附图1页 CN 114525363 A 2022.05.24 CN 114525363 A 1.一种与菜花颜色相关的分子标记的引物， 其特征在于， 所述分子标记引物包括正向 引物FAM、 正向引物HEX和反向引物C， 所述正向引物FAM的核苷酸序列如SEQ  ID NO:1所示， 所述正向引物HEX的核苷酸序列如SEQ  ID NO:2所示， 所述反向引物C的核苷酸序列如SEQ   ID NO:3所示。 2.一种如权利要求1所述的与菜花颜色相关的分子标记的引物鉴别菜花颜色的方法， 其特征在于， 该 方法为： S1、 提取菜花叶片基因 组DNA； S2、 以S1中所述菜花叶片基因组DNA为模板进行PCR扩增， 得到PCR扩增产物； 所述PCR扩 增的反应体系为： S1中所述菜花叶片基因组DNA  25ng、 KASP  2×Master Mix 2.5 μL、 引物混 合物0.07 μL， 无菌水补至 5 μL； 所述引物混合物的制备方法为： 正向引物FAM  12 μL、 正向引物HEX12 μL和反向引物C12 μ L、 ddH2O 46 μL， 混合后取0.07 μL； 所述PCR扩增的反应程序为： 95℃预变性10min； 95℃变性20s， 61℃退火45s， 每个循环 延伸温度降低0.6℃， 进行10个循环； 95℃变性20s， 55℃退火45s， 进行30次循环； 25℃终延 伸Forever， 反应终止； S3、 对S2中得到的PCR扩增产物进行分析， 在C07号染色体基因组位置区间50387046bp ～50387048bp存在等位基因AGT插入的为白菜花， 在C07号染色体基因组位置区间 50387046bp～5 0387048bp等 位基因AGT缺失的为黄菜花。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114525363 A 2与菜花颜色相关的分子标记的引物及鉴别菜花颜色的方 法 技术领域 [0001]本发明属于分子标记技术领域， 具体涉及 一种与菜花颜色相关的分子标记的引物 及鉴别菜花颜色的方法。 背景技术 [0002]分子标记基于生物大分子的多态性提出的一种遗传标记技术。 随着分子标记技术 的出现， 实现了植物育种的间接选择， 显著提高了育种的有效性和遗传的准确 性。 因此， 分 子标记技术在遗传育种 领域的地位愈发提高。 分子标记技术包括两种类型， 分别是同工酶 标记和分子标记(即DNA标记)。 其中， 由于翻译后修饰作用、 发育阶段性、 组织特异 性和多态 性位点少等特殊性， 使得同工酶标记鉴定技术在遗传分析过程中实现较为困难， 从而兴起 了分子标记技术的研究。 分子标记通过电泳实验结合一定的检测方法反映出目的基因组中 特殊的变异特征DNA片段。 分子标记技术主要包括限制性片段长度多态性技术、 随机扩增多 态性DNA技术、 PCR与酶切结合标记 技术等。 这类经典的分子标记 技术， 存在一些实验步骤复 杂， 重复性低， 且受到探针因素等的 限制， 使得DNA模板要求高且需求量大， 导致最 终的多态 性检出效率低。 [0003]本发明采用的特定引物扩增标记技术避免了上述分子标记的不足， 具有稳定性 高、 高效便捷和取材少等特点， 成功 鉴别菜花颜色。 这一结果为彩色菜花多态 性研究提供了 有效方法和手段。 发明内容 [0004]本发明所要解决的技术问题在于针对上述现有技术的不足， 提供一种与菜花颜色 相关的分子标记的引物及鉴别菜花颜色的方法， 该方法可实现快速辅助鉴定菜花颜色， 相 对传统田间试验效率高， 结果可靠 。 [0005]为解决上述技术问题， 本发明采用的技术方案是： 一种与菜花颜色相关的分子标 记的引物， 所述分子标记引物包括正向引物FAM、 正 向引物HEX和反向引物C， 所述正 向引物 FAM的核苷酸序列如SEQ  ID NO:1所示， 所述正向引物HEX的核苷酸序列如SEQ  ID NO:2所 示， 所述反向引物C的核苷酸序列如SEQ  ID NO:3所示。 [0006]本发明还提供了上述的与菜花颜色相关的分子标记的引物鉴别菜花颜色的方法， 该方法为： [0007]S1、 提取菜花叶片基因 组DNA； [0008]S2、 以S1中所述菜花叶片基因组DNA为模板进行PCR扩增， 得到PCR扩增产物； 所述 PCR扩增的反应体系为： S1中所述菜花叶片基因组DNA  25ng、 KASP  2×Master Mix 2.5 μL、 引物混合物0.07 μL， 无菌水补至 5 μL； [0009]所述引物混合物的制备方法为： 正向引物FAM  12 μL、 正向引物HEX12 μL和反向引物 C12 μL、 ddH2O 46 μL， 混合后取0.07 μL； [0010]所述PCR扩增的反应程序为： 95℃预变性10min； 95℃变性20s， 61℃退火45s， 每个说　明　书 1/4 页 3 CN 114525363 A 3