(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210278580.5 (22)申请日 2022.03.17 (71)申请人 浙江省农业科 学院 地址 310000 浙江省杭州市石桥路198号 (72)发明人 陆玲鸿　张慧琴　古咸彬　肖金平　 宋根华　张作法　 (74)专利代理 机构 北京深川专利代理事务所 (普通合伙) 16058 专利代理师 覃海芬 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12Q 1/6879(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种检测猕猴桃性别的方法 (57)摘要 本发明公开了一种检测猕猴桃性别的方法。 检测核苷酸序列如SEQ  ID NO:3所示的分子标 记， 雄性猕猴桃含有所述分子标记， 雌性猕猴桃 不含有所述分子标记。 利用该方法对已知性别 186份中华猕猴桃单株进行检测， 测试准确率可 达100％， 且本发明分子标记和方法通用性好、 操 作简单快速、 鉴定准确率高， 具有很大的应用前 景。 权利要求书1页 说明书7页 附图4页 CN 114807411 A 2022.07.29 CN 114807411 A 1.一种检测猕猴桃性别相关的分子标记的试剂， 其特征在于， 所示分子标记的核苷酸 序列如SEQ  ID NO:3所示， 雄性猕猴桃含有所述分子标记， 雌性猕猴桃不含有所述分子标 记。 2.根据权利 要求1所述试剂， 其特征在于， 所述试剂为核苷酸序列如SEQ  ID NO:1～2所 示的引物。 3.权利要求1所述试剂在检测猕猴桃性别或制备检测猕猴桃性别的试剂盒中的应用。 4.根据权利 要求3所述应用， 其特征在于， 所述试剂为核苷酸序列如SEQ  ID NO:1～2所 示的引物。 5.一种检测猕猴桃性别的方法， 其特征在于， 检测核苷酸序列如SEQ  ID NO:3所示的分 子标记， 雄 性猕猴桃含有所述分子标记， 雌性 猕猴桃不含有所述分子标记。 6.根据权利 要求5所述方法， 其特征在于， 所述试剂为核苷酸序列如SEQ  ID NO:1～2所 示的引物。 7.根据权利要求6所述方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： S1、 取样： 中华猕猴桃DNA， 作为模板DNA； S2、 PCR扩增 PCR体系： 模板DNA  1μl、 核苷酸序列如SEQ  ID NO:1～2所示的引物各1μl、 1.1 × T3SUPERPCR  MIX 37 μl， PCR程序： 98℃预变性3min； 98℃变性10s， 58℃退火10s， 66℃延伸15s， 35个循环； 66℃ 延伸10mi n； 4℃保存； S3、 电泳 PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳 。 8.一个检测猕猴桃性别的试剂盒， 其特 征在于， 含有权利要求1所述的试剂。 9.根据权利要求8所述的试剂盒， 其特征在于， 所述试剂为核苷酸序列如SEQ  ID NO:1 ～2所示的引物。 10.根据权利要求9所述的试剂盒， 其特 征在于， 还 含有1.1×T3 SUPER PCR MIX。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114807411 A 2一种检测猕猴桃性别的方 法 技术领域 [0001]本发明涉及猕猴桃的分子遗传育种技术领域， 更具体地， 涉及一种检测猕猴桃性 别的方法。 背景技术 [0002]猕猴桃作为 “水果之王 ”， 其营养丰富， 附加值高， 备受消费者喜爱。 目前， 生产上栽 培的猕猴桃种类主要为中华猕猴桃和美味猕猴桃， 其次是毛花猕猴桃和软枣猕猴桃。 猕猴 桃为功能性雌雄异株植物， 雌株的经济价值明显高于雄株， 雄株在生产上多作为授粉配对 用树而少量配置。 猕猴桃属 植物在实生育种过程中童期较长， 雌雄株早期在形态上差异较 小， 常规手段不能识别， 直到猕猴桃幼 苗种植数年开花后才能鉴别植株的性别。 大量不结果 雄株的种植不仅 浪费大量的人力物力， 也延长了育种周期。 中华猕猴桃是生产中栽培的主 要猕猴桃种类之一， 因此， 开发中华猕猴桃早期性别鉴定的分子标记已经成为亟需解决的 问题。 [0003]近年来， 国内外研究者相继开发出猕猴桃属植物性别鉴定的分子标记。 Gill等通 过集团分离分析法(Bulk  Segregant  Analysis， BSA)开发出雄性特异性标记SmY1， 其对中 华猕猴桃性别的鉴定准确率为88％。 张琼等利用RAD ‑seq技术开发的SSR(simple  sequence   repeats)标记能有效鉴定该研究中所用的山梨和中华猕猴桃杂交群体174个F1代个体的性 别， 但在其他种内通用性较差。 朱立武等研发的申请号为201911407340.5的相关分子标记 能用于中华猕猴桃、 美味猕猴桃、 软枣猕猴桃、 大籽猕猴桃等八个种的雌雄株进行准确鉴 定。 张琼等研发的申请号为202010136148.3的相关分子标记适用于中华猕猴桃、 美味猕猴 桃、 大籽猕猴桃、 软枣猕猴桃、 山梨猕猴桃、 毛花猕猴桃和黑蕊猕猴桃的性别鉴定。 但上述两 种通用性较强的分子标记均未在育种实践中通过大量的群体验证其准确 性。 因此， 开发通 用性好、 操作简单快速、 鉴定准确 率高的针对中华猕猴桃实生苗性别早期鉴定的分子标记 对于中华 猕猴桃育种而言具有重要的意 义。 发明内容 [0004]本发明的目的在于提供一种检测猕猴桃性别的方法， 解决了现有技术中中华猕猴 桃雌雄株早期在形态上差异较小， 常规手段不能识别的问题。 [0005]本发明的第一个目的是提供一种检测猕猴桃性别相关的分子标记的试剂。 [0006]本发明的第二个目的是提供所述试剂在检测猕猴桃性别或制备检测猕猴桃性别 的试剂盒中的应用。 [0007]本发明的第三个目的是提供一种检测猕猴桃性别的方法。 [0008]本发明的第四个目的是提供一个 检测猕猴桃性别的试剂盒。 [0009]本发明的上述目的是通过以下 方案予以实现的： [0010]本发明要求保护一种检测猕猴桃性别相关的分子标记的试剂， 所示分子标记的核 苷酸序列如SEQ  ID NO:3所示， 雄性猕猴桃 含有所述分子标记， 雌性猕猴桃不含有所述分子说　明　书 1/7 页 3 CN 114807411 A 3