(19)国家知识产权局 (12)发明 专利 (10)授权公告 号 (45)授权公告日 (21)申请 号 202210244556.X (22)申请日 2022.03.14 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 114317837 A (43)申请公布日 2022.04.12 (73)专利权人 潮州凯普生物化学有限公司 地址 521000 广东省潮州市经济开发试验 区北片高新区D5 -3-3-4小区 专利权人 广东凯普生物科技股份有限公司 　 广州凯普医药 科技有限公司 (72)发明人 吴钰熙　李烈军　卢晓丹　卢敏　 石琳　 (74)专利代理 机构 广州粤高专利商标代理有限 公司 44102 专利代理师 孙凤侠(51)Int.Cl. C12Q 1/70(2006.01) C12Q 1/686(2018.01) C12Q 1/6837(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (56)对比文件 CN 110468234 A,2019.1 1.19 审查员 李素荣 (54)发明名称 一种用于检测病原体的多重PCR引物和探针 组合及其应用 (57)摘要 本发明公开了一种用于检测病原体的多重 PCR引物和探针组合及其应用。 本发明以甲型流 感病毒、 乙型流感病毒、 呼吸道合胞病毒、 人副流 感病毒 （区分I型， II型， III型） 、 肠道病毒、 登革 病毒、 东部马脑炎病毒、 西部马脑炎病毒、 委内瑞 拉马脑炎病毒、 森林脑炎病毒、 圣路易斯脑炎病 毒、 西尼罗病毒、 黄热病毒、 尼帕病毒和亨德拉病 毒为目标， 研发设计得到了可用于同时检测上述 病原体的多重PCR引物和探针组合， 并在此基础 上开发了相应的基因芯片和检测试剂盒。 本发明 设计获得的引物和探针组合的特异性强、 检测范 围广、 结果准确性好， 不仅有助于传染性病原体 的防控， 还可用于相应病原体的室间质评等。 权利要求书2页 说明书14页 序列表8页 附图5页 CN 114317837 B 2022.07.01 CN 114317837 B 1.一种多重PCR引物和探针组合在制备用于检测病原体的产品中的应用， 其特征在于， 所述病原体为以下病原体： 甲型流感病毒、 乙型流 感病毒、 呼吸道 合胞病毒、 人副流 感病毒I 型、 人副流 感病毒II型、 人副流 感病毒III型、 肠道病毒、 登革病毒、 东部马脑炎病毒、 西部马 脑炎病毒、 委内瑞拉马脑炎病毒、 森林脑炎病毒、 圣路易斯脑炎病毒、 西尼罗病毒、 黄热病 毒、 尼帕病毒和亨德拉病毒， 所述多重PCR引物和探针组合包括如下组分： （1） 用于检测甲型流感病毒的引物和探针， 其引物序列如SEQ  ID NO.1～2所示， 其探针 序列如SEQ  ID NO.29所示； （2） 用于检测乙型流感病毒的引物和探针， 其引物序列如SEQ  ID NO.3～4所示， 其探针 序列如SEQ  ID NO.30所示； （3） 用于检测呼吸道合胞病毒的引物和探针， 其引物序列如SEQ  ID NO.5～6所示， 其探 针序列如SEQ  ID NO.31所示； （4） 用于检测鼻病毒的引物和探针， 其引物序列如SEQ  ID NO.7～8所示， 其探针序列如 SEQ ID NO.32所示； （5） 用于检测人副流感病毒I型的引物和探针， 其引物序列如SEQ  ID NO.9～10所示， 其 探针序列如SEQ  ID NO.33所示； （6） 用于检测人副流感病毒II型的引物和探针， 其引物序列如SEQ  ID NO.11～12所示， 其探针序列如SEQ  ID NO.34所示； （7） 用于检测人副流感病毒III型的引物和探针， 其引物序列如SEQ  ID NO.13～14所 示， 其探针序列如SEQ  ID NO.35所示； （8） 用于检测 肠道病毒的引物和探针， 其引物序列如SEQ  ID NO.15～16所示， 其探针序 列如SEQ ID NO.36所示； （9） 用于检测登革病毒的引物和探针， 其引物序列如SEQ  ID NO.17～18所示， 其探针序 列如SEQ ID NO.37所示； （10） 用于检测东部马脑炎病毒、 西部马脑炎病毒、 委内瑞拉马脑炎病毒的引物和探针， 其引物序列均如SEQ  ID NO.19～20所示， 用于检测东部马脑炎病毒的探针序列如SEQ  ID  NO.38所示， 检测西部马脑炎病毒的探针序列如SEQ  ID NO.39所示， 检测委内瑞拉马脑炎病 毒的探针序列如SEQ  ID NO.40所示； （11） 用于检测森林脑炎病毒、 圣路易斯脑炎病毒的引物和探针， 其引物序列均如SEQ   ID NO.21～22所示， 用于检测森林脑炎病毒的探针序列如SEQ  ID NO.41所示， 检测圣路易 斯脑炎病毒的探针序列如SEQ  ID NO.42所示； （12） 用于检测西尼罗病毒的引物和探针， 其引物序列如SEQ  ID NO.23～24所示， 其探 针序列如SEQ  ID NO.43所示； （13） 用于检测黄热病毒的引物和探针， 其引物序列如SEQ  ID NO.25～26所示， 其探针 序列如SEQ  ID NO.44所示； （14） 用于检测尼帕病毒、 亨德拉病毒的引物和探针， 其引物序列如SEQ  ID NO.27～28 所示， 其中用于检测尼帕病毒的探针序列如SEQ  ID NO.45所示， 检测亨德拉病毒的探针序 列如SEQ ID NO.46所示。 2.根据权利要求1所述的应用， 其特征在于， 所述多重PCR引物和探针组合还包括内标 引物和内标探针， 所述内标引物的序列如SEQ  ID NO.47～48所示， 所述内标探针的序列如权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114317837 B 2SEQ ID NO.49所示。 3.一种利用权利要求2所述的多重PCR引物和探针组合进行的以非疾病诊断为目的检 测病原体的方法， 其特征在于， 所述病原体为以下病原体： 甲型流感病毒、 乙型流感病毒、 呼 吸道合胞病毒、 人副流 感病毒I型、 人副流 感病毒II型、 人副流 感病毒III型、 肠道病毒、 登革 病毒、 东部马 脑炎病毒、 西 部马脑炎病毒、 委内瑞拉马 脑炎病毒、 森林脑炎病毒、 圣路易斯脑 炎病毒、 西尼罗病毒、 黄热病毒、 尼帕病毒和亨德拉病毒； 所述方法包 含以下步骤： S1.释放待测样本的核酸； S2.以S1所得核酸为模板， 使用SEQ  ID NO.1～28所示多重PCR引物和SEQ  ID NO.47～ 48所示内标引物进行RT ‑PCR； S3.利用含有SEQ  ID NO.29～46和SEQ  ID NO.49所示的探针的基 因芯片对RT ‑PCR扩增 产物进行杂交， 所述基因芯片的每个位点每个格子对应一条探针， 通过化学显色对结果进 行判读。 4.根据权利要求3所述方法， 其特 征在于， 步骤S3中所述杂交为 导流杂交。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114317837 B 3