(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210247651.5 (22)申请日 2022.03.14 (71)申请人 黔南布依族苗族自治州检验检测院 地址 558000 贵州省黔 南布依族苗族自治 州都匀市匀东 镇长安路9号 (72)发明人 任永超　宋云　马云龙　赵文军　 付伟　李炎琪　任永奇　黄训才　 余丹敏　 (74)专利代理 机构 北京市中伦律师事务所 11410 专利代理师 信建 (51)Int.Cl. C12N 15/11(2006.01) C12Q 1/6895(2018.01) C12Q 1/686(2018.01) (54)发明名称 鉴定刺梨源性成分的组合产品及方法 (57)摘要 本发明涉及植物的分子生物学鉴定技术领 域， 具体而言， 涉及鉴定刺梨源性成分的组合产 品及方法。 本研究通过分析刺梨植物ITS2基因， 设立刺梨特异性引物， 建立了一种可检测样本中 刺梨源性 成分的检测方法， 以其为样本中刺梨源 性分子生物学鉴伪体系的建立及相关标准发布 奠定基础。 权利要求书1页 说明书12页 序列表2页 附图3页 CN 114561382 A 2022.05.31 CN 114561382 A 1.组合产品， 包括核苷酸序列为SEQ  ID NO： 1～5中至少一种所示的上游引物以及SEQ   ID NO： 6所示的下游引物。 2.根据权利要求1所述的组合产品， 其还包含SEQ  ID NO： 7所示的探针， 所述探针标记 有信号物质。 3.根据权利要求2所述的组合产品， 所述探针为自身淬灭探针。 4.根据权利要求3所述的引物探针组合产品， 所述探针的荧光发射基团独立地选自 AMCA、 Pacific  Blue、 Atto  425、 BODIPY  FL、 FAM、 Alexa  Fluor488、 TET、 JOE、 Yakima   Yellow、 VIC、 HEX、 Quasar  570、 Cy3、 NED、 TAMRA、 ROX、 Aqua  Phluor593、 Texas  Red、 Atto   590、 Cy5、 Quasar  670、 Cy5.5以及Cy5.5中的任一种。 5.含有权利要求1～4任一项所述组合产品的试剂盒。 6.根据权利要求5所述的试剂盒， 其还包含DNA提取试剂、 扩增缓冲液、 dNTP、 Mg2+、 UNG 酶、 DNA聚合酶、 阳性质控品、 阴性质控品、 防腐剂以及水中的至少一种。 7.鉴定刺梨源性成分的方法， 包括： 获取怀疑含有刺梨源性成分的待检测样品中的DNA； 以所述DNA为模板， 使用权利 要求1～4任一项所述组合产品， 或权利要求5或6所述的试 剂盒进行扩增， 若发生特异性扩增， 则表明含有刺梨源性成分。 8.根据权利要求7 所述的方法， 所述待检测样品是 经处理的植物样品。 9.根据权利要求8所述的方法， 所述待检测样品是饮料、 食品、 保健品、 草药、 植物提取 物或植物粉末。 10.根据权利 要求7～9任一项所述的方法， 所述上游引物包含SEQ  ID NO： 1～5， 若所述 待检测样品中含有刺梨源性成分， 所述方法进一步包括根据不同上游引物所对应的扩增产 物有无以判断所述刺梨源性成分在处 理过程中对刺梨果实的损伤程度。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114561382 A 2鉴定刺梨源性成分的组合产品及方 法 技术领域 [0001]本发明涉及植物的分子生物学鉴定技术领域， 具体而言， 涉及鉴定刺梨源性成分 的组合产品及方法。 背景技术 [0002]刺梨(Rosa  roxburghii  Tratt)属于蔷薇科蔷薇属， 又名为送春归、 木梨子、 刺梨 子。 刺梨主要分布在我国西南西区， 在陕南、 桂西北、 鄂西及湘西地区也有分布。 刺梨为多年 生落叶木果树， 维生素C含量高达2054～3541mg/100g， 超过猕猴桃的5倍， 被称为 “维生素C 之王”。 此外， 刺梨也被报道含有 大量的超氧化物歧化 酶、 多糖、 氨基酸、 有机酸、 黄酮类化合 物、 三萜类物质和矿质元素。 因含有如此丰富的营养物质、 食用和药用价值， 刺梨也受到了 众多研究工作者的青睐。 有研究发现刺梨在预防动脉硬化、 提高免疫、 缓解压力、 延缓衰老 和抑制卵巢癌转移和扩散方面发挥了非常重要的作用； 也有报道表明刺梨果实在防辐 射、 抗肿瘤、 抗 诱变和基因保护活性方面效果显著。 [0003]近年来， 刺梨果实及其深加工产品已实现井喷式发展， 刺梨原汁和刺梨饮料产品 因其特殊的口感和营养价值受到了广大人民的追捧。 刺梨原汁(Rosa  roxburghii  Tratt  juice)以刺梨果 实为原料， 采用机械破碎和压榨， 经过滤、 灭菌后取得的清 汁或浊汁等汁液 制品。 随着市场需求的快速提升， 刺梨原 汁价格一路攀升， 但刺梨原 汁和饮料产品受原料价 格、 产品品质和加工工艺等诸多因素制约， 一些不法企业通过廉价果汁冒充刺梨原料， 以次 充好， 以此获得巨额利 润， 严重影响了刺梨原汁及饮料的产品 品质， 损害了消费者的利益。 [0004]随着分子生物学的快速发展， 分子生物分析技术因其灵敏度高、 快速、 准确的优 势， 可在基因水平上对其食品原料进行溯源和追踪， 在食品有效成分分析和 鉴别方面发挥 了重要作用。 梁宇斌等[1]通过对20条不同柑橘属植物的trnL基因序列进行分析比较， 建立 检测柑桔属植物成分的S YB Green实时荧光PCR检测方法。 韩建勋等[2]根据不同植物品种中 类甜蛋白基因内含子的差异性， 并根据其序列设计梨特异性扩增引物， 建立梨成分的实时 荧光PCR检测方法。 杨硕等[3]筛选了更适合扩增椰子植物蛋白饮料DNA的靶基因， 建立了此 类产品中2个种源鉴定的实时荧光P CR方法， 并通过先进的dd  PCR法对可疑结果进 行验证的 完整解决方案。 此外， 中国检验检疫科学研究院等单位运用分子生物学鉴别方法发布了 国 家行业标准SN/T4849.6 ‑2017 《出口食品及饮料中常见小浆果成分的检测方法》 关于蓝莓、 树莓、 黑加仑、 桑葚、 蔓越莓和蓝莓、 猕猴桃系列标准[4]， SN/T 3729.4‑2013 《出口食品及饮 料中常见水果品种的鉴定方法》 关于草莓、 杏、 梨、 芒果、 木瓜、 苹 果、 葡萄、 山楂、 桃和香蕉系 列标准[5]， 然而关于刺梨的国家监管相关标准还没发布。 [0005][1]梁宇斌， 牟靖芳,李晓明,梁德沛.果汁中柑橘属成分实时荧光PCR检测方法 [J].食品研究与开发,2014,3 5(16):84‑90. [0006][2]韩建勋,黄文胜,吴亚君,陈颖,葛毅强.果汁中梨成分分子生物学鉴伪 ‑实时荧 光PCR方法研究[J].中国食品学报,2010,10(01):207 ‑213.DOI:10.16429/j.1009 ‑ 7848.2010.01.017.说　明　书 1/12 页 3 CN 114561382 A 3