(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 20221024641 1.3 (22)申请日 2022.03.14 (71)申请人 广东医科 大学附属医院 地址 524000 广东省湛江市霞山区人民大 道南57号 (72)发明人 崔理立　蔡玉洁　季瑶　张丹丹　 (74)专利代理 机构 成都行之智 信知识产权代理 有限公司 5125 6 专利代理师 马丽青 (51)Int.Cl. C12Q 1/6883(2018.01) C12Q 1/6869(2018.01) C12N 15/113(2010.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 用于重性抑郁障碍诊断的circRNA标志物及 其应用 (57)摘要 本发明公开了用于重性抑郁障碍诊断的 circRNA标志物及其应用， 所述cir cRNA标志物为 circUBE2K， 所述circUBE2K的核苷酸序列如SEQ   ID NO:1所示。 本发明首次揭示了检测MDD的标志 物circUBE2K， 且circUBE2K具有高度稳定性、 特 异性和敏感性； 同时研究发现circUBE2K表达越 高， 症状越重； 且本发明中所表 达的circUBE2K在 MDD患者全血及CUMS小鼠的大脑试样中共同进行 高表达， 因此， circUBE2K可以作为MDD发生的新 的基因靶点。 基于此， MDD的诊断可以通过 circUBE2K的表达水平这一客观指标进行检查、 确诊。 权利要求书1页 说明书10页 序列表1页 附图3页 CN 114480627 A 2022.05.13 CN 114480627 A 1.一种用于重性抑郁障碍诊断的circRNA标志物， 其特征在于， 所述circRNA标志物为 circUBE2K， 所述circUBE2K的核苷酸序列如SEQ  ID NO:1所示。 2.如权利要求1所述的circRNA标志物， 其特征在于， 所述circRNA标志物为患者全血标 志物。 3.一种如权利要求1所述的circRNA标志 物的筛选方法， 其特 征在于， 包括如下步骤： (1)通过对MD D患者和正常对照全血进行全转录组测序， 筛 选出差异 表达的circRNA； (2)扩大样本量进行qRT ‑PCR验证差异circRNA； (3)用ROC曲线和相关性分析判断相关circRNA的对MD D的诊断价 值； (4)在动物和细胞模型 上相关circRNA对 疾病的作用和影响研究。 4.如权利要求1所述的circRNA标志物的引物组合， 其特征在于， 所述引物组合包括上 游引物与下游引物； 所述上游引物为： T TCCGTCACAG GGGCTATTT； 所述下游引物为： T TTTGCTCGTCAT TGATCTTTCA。 5.如权利 要求1所述的circRNA标志物或权利要求3所述的引物 组合在制备重性抑郁障 碍诊断试剂盒中的应用。 6.如权利要求5所述的应用， 其特征在于， 所述试剂盒检测全血中circRNA标志物的含 量。 7.一种诊断试剂盒， 其特 征在于， 包括如权利要求3所述的引物组合。 8.如权利要求7所述的一种诊断试剂盒， 其特征在于， 所述试剂 盒内还包括逆转录、 PCR 反应用的酶和试剂， 以及内参。 9.如权利要求7或8所述的一种诊断试剂盒的制备方法， 其特征在于， 包括： 全血总RNA 提取、 定量RNA逆转录、 实时荧光定量PCR、 用内参基因β ‑actin将circRNAs的表达水平进行 标准化。 10.如权利要求9所述的诊断试剂盒的制备 方法， 其特 征在于， 所述定量RNA逆转录的过程包括： 将提取的总RNA、 5X  gDNA去除缓冲液、 gDNA去除剂、 RNase Free H2O混合， 得混合液； 将得到的混合液置 于PCR仪中进行gDNA去除； 进行反转录； 所述实时荧光定量PCR的过程包 括： 将cDNA、 预混液、 RNase  Free H2O、 上游引物、 下游引 物、 ROX参比染料混合， 将得到的混合液置 于实时荧 光定量PCR仪中进行荧 光定量。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114480627 A 2用于重性抑郁障碍诊断的circRNA标志物及其应用 技术领域 [0001]本发明涉及生物技术领域， 具体涉及一种用于重性抑郁障碍诊断的circRNA标志 物及其应用。 背景技术 [0002]抑郁障碍(Depressive  disorder)以心境低落为主要特征的一组疾病， 全球大约 有2.64亿名抑郁障碍患者。 根据DSM ‑5， 抑郁障碍包括重性抑郁障碍(major  depressive   disorder， MDD)， 持续性抑 郁障碍(persi stent depressive disorder,PDD),经前期烦躁障 碍(premenstrual  dysphoric  disorder)， 破坏性心境失调(disruptive  mood  dysregulation  disorder)， 其他躯体疾病所致的抑 郁障碍(depressive  disorder due to  another medical condition)， 物质/药物所致的抑郁障碍(substance/medication   induced depressive  disorder)等。 其中MDD是最常见的抑郁障碍， 临床上常表现为情绪低 落， 兴趣丧 失， 快感缺 失， 意志活动减退等症状， 具有反复发作的倾向， 严重者可出现自杀念 头和行为。 [0003]目前MDD的诊断主要依据患者对症状的主观叙述以及医生对患者的精神状态检 测， 这受患者表达症状的能力和医生解读与评估能力的影响， 因而缺乏客观性， 准确性不 足。 因此， 深入研究MDD的发病机制， 可以为 发现MDD可靠的生物学标志及新的治疗方法提供 坚实的理论基础。 [0004]circRNAs是一类共价闭合的非编码RNA， 无多聚腺苷酸尾 或5’端帽子结， 具有高稳 定性， 广泛表达和组织/发育阶段特异性表达的特点， 且在血液和大脑中表达丰富。 circRNAs的闭合环结构使其比线性RNA更稳定且半衰期更长， 并能抵抗RNA核酸外切酶R (Rnase R)降解； 与其他非编码RNA分子(如miRNAs和lncRNAs)相比， circRNAs具有更多理想 的疾病诊断生物标志物的特性。 已有研究表明circRNAs与MDD相关， 因此深入探索circRNAs 在MDD的作用将对MD D的诊断和治疗具有重大意 义。 发明内容 [0005]本发明的目的在于一种用于 重性抑郁障碍诊断的circRNA标志 物及其应用。 [0006]本发明通过 下述技术方案实现： [0007]本发明的第一个目的在于提供一种用于重性抑郁障碍诊断的circRNA标志物， 所 述circRNA标志 物为circUBE2K， 所述circUBE2K的核苷酸序列如SEQ  ID NO:1所示。 [0008]可选地， 所述circRNA标志 物为患者全血 标志物。 [0009]本发明的第二个目的在于提供一种上述 的circRNA标志物的筛选方法， 包括如下 步骤： [0010](1)通过对MDD患者和正常对照全血进行全转录组测序， 筛选出差异表达的 circRNA； [0011](2)扩大样本量进行qRT ‑PCR验证差异circRNA；说　明　书 1/10 页 3 CN 114480627 A 3