(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210248740.1 (22)申请日 2022.03.14 (71)申请人 中国农业科 学院作物科 学研究所 地址 100081 北京市海淀区中关村南大街 12号 (72)发明人 胡小娇　张伟　王红武　李坤　 刘小刚　黄长玲　 (74)专利代理 机构 北京纪凯知识产权代理有限 公司 11245 专利代理师 关畅 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12N 15/11(2006.01) C12Q 1/686(2018.01) (54)发明名称 玉米半矮杆基因ZmD13的分子标记及其应用 (57)摘要 本发明公开了玉米 半矮杆基因ZmD13的分子 标记及其应用。 本发明所要保护的一个技术方案 是用于检测玉米基因组 中SNP1477的多态性或基 因型的引物组合物， 所述引物组合物由序列表中 序列2和序列3所示的两条单链DNA组成； 所述 SNP1477是玉米基因组 中的一个SNP位点， 其核苷 酸种类为C或T， 为序列表中序列1的第1477位核 苷酸。 本发明所开发的玉米SNP1477位点dCAPS标 记， 对辅助位点选择具有重要作用， 可 以用于鉴 定玉米是否含有矮秆基因。 该dCAPS标记能够准 确快速高效地鉴定矮杆基因d13的突变位点基因 型， 可以应用于玉米 株高育种和改良。 权利要求书1页 说明书8页 序列表7页 附图4页 CN 114774568 A 2022.07.22 CN 114774568 A 1.用于检测玉米基因组中SNP1477的多态性或基因型的引物组合物， 所述引物组合物 由序列表中序列5和序列6所示的两条单链DNA组成； 所述SNP1477是玉米基因组中的一个 SNP位点， 其核苷酸种类为C或T， 为序列表中序列1的第147 7位核苷酸。 2.根据权利要求1所述的引物组合物， 其特 征在于： 所述两条 单链DNA的摩尔比相同。 3.检测玉米基因组中SNP1477位点的多态性或基因型的产品， 其特征在于： 所述产品含 有权利要求 1所述的引物组合物； 所述SNP1477位点是玉米基因组中的一个SNP位点， 其核苷 酸种类为C或T， 为序列表中序列1的第147 7位核苷酸。 4.根据权利要求3所述的产品， 其特 征在于： 所述产品为试剂或试剂盒。 5.制备权利要求1中所述的引物组合物的方法， 包括将权利要求1中所述的两条单链 DNA分别单独包 装的步骤。 6.检测玉米 基因组中SNP147 7位点的多态性或基因型的 的方法， 包括： 1)以玉米的基因组DNA为模板， 用权利要求1所述的引 物组合物进行PCR扩增， 得到PCR 扩增产物； 2)将1)中得到 的所述PCR扩增产物使用限制性内切酶TaqI进行酶切得到酶切产物， 根 据所述酶切产物的大小确定所述SNP147 7位点的多态性或基因型； 所述SNP1477位点是玉米基因组中的一个SNP位点， 其核苷酸种类为C或T， 为序列表中 序列1的第147 7位核苷酸。 7.权利要求1或2中所述的引物组合物的下述任一种应用： A1)权利要求1或2中所述的引物组合物在检测玉米基因组中SNP1477位点的多态性或 基因型中的应用； A2)权利要求1或2中所述的引物组合物在检测矮 秆玉米中的应用； A3)权利要求1或2中所述的引物组合物在玉米育种和改良中的应用； 所述SNP1477位点是玉米基因组中的一个SNP位点， 其核苷酸种类为C或T， 为序列表中 序列1的第147 7位核苷酸。 8.权利要求3或4中所述的产品的下述任一种应用： B1)权利要求3或4中所述的产品在检测玉米基因组中SNP1477位点的多态性或基因型 中的应用； B2)权利要求3或4中所述的产品在检测矮 秆玉米中的应用； B3)权利要求3或4中所述的产品在玉米育种和改良中的应用； 所述SNP1477位点是玉米基因组中的一个SNP位点， 其核苷酸种类为C或T， 为序列表中 序列1的第147 7位核苷酸。 9.权利要求6所述的方法的下述任一种应用： C1)权利要求6所述的方法在检测玉米基因组中SNP1477位点的多态性或基因型中的应 用； C2)权利要求6所述的方法在检测矮 秆玉米中的应用； C3)权利要求6所述的方法在玉米育种和改良中的应用； 所述SNP1477位点是玉米基因组中的一个SNP位点， 其核苷酸种类为C或T， 为序列表中 序列1的第147 7位核苷酸。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114774568 A 2玉米半矮杆基因ZmD13的分子标记及其应用 技术领域 [0001]本发明涉及生物技 术领域， 特别涉及玉米半矮杆基因ZmD13的分子标记及其应用。 背景技术 [0002]玉米是重要的粮食作物， 也是重要的动 物饲料和工业原料。 在过去的一个世纪中， 玉米单位面积产量的增加 不仅依靠单株产量的提高， 种植密度的增加 也是其重要因素。 玉 米耐密品种应当具备株高适宜、 株型紧凑、 根系发达、 茎 秆坚韧、 抗逆抗病等性状特征。 株高 是影响玉米品种耐密性的关键性状之一。 合理降低品种株高有利于增强玉米抗倒伏 能力， 提高种植密度， 改善群体通透性， 优化光能利用效率， 从而实现提高单位面积产量的目标。 因此挖掘 株高调控基因， 选育优良的矮杆品种进行推广和应用， 是玉米耐密育种的重要方 向。 [0003]上个世纪60年代， 水稻和小麦矮杆基因rht1和sd1的发掘以及相关矮生衍生系品 种的推广应用掀起了一场 “绿色革命 ”， 在全世界范围内极大的提高了小麦和水稻的产量。 在玉米中， 发掘 株高调控基因并开发相关功 能标记， 对于矮杆玉米品种的选育和应用具有 重要意义。 [0004]SNP标记的验证通常使用桑格(Sanger)测序法， 不过价格较高， 通量偏低。 如果将 SNP转化为可以酶切验证的CAPS或dCAPs多态 性共显性标记， 就可以通过简单的PCR扩增、 限 制性内切酶切和产 物凝胶电泳来高效快速的实现SNP位点检测。 由于具有这些优势， CAPS和 dCAPs标记 技术已成为生物学研究中的重要分子标记技术， 在遗传图谱构建、 种质鉴定和辅 助育种等领域得到广泛应用。 发明内容 [0005]本发明所要解决的技 术问题是如何鉴定植物是否含有矮 秆基因。 [0006]为了解决上述技术问题， 本发明首先提供了用于检测玉米基因组中SNP1477的多 态性或基因型的引物组合物。 所述引物组合物由序列表中序列5和序列6所示的两条单链 DNA组成。 [0007]所述SNP1477是玉米基因组中的一个SNP位点， 其核苷酸种类为C或T， 为序列表中 序列1的第147 7位核苷酸。 [0008]上文所述引物组合物中， 所述两条 单链DNA的摩尔比可相同。 [0009]为了解决上述技术问题， 本发明还提供了检测玉米基因组中SNP1477位点的多态 性或基因型的产品。 所述产品含有 上文所述的引物组合物。 所述SNP1477位点是玉米基因组 中的一个SNP位 点， 其核苷酸种类为C或T， 为序列表中序列1的第147 7位核苷酸。 [0010]上文所述产品可为试剂或试剂盒。 [0011]为了解决上述技术问题， 本发明还提供了制 备上文所述的引 物组合物的方法。 所 述方法可包括将上文所述的两条 单链DNA分别单独包 装的步骤。 [0012]为了解决上述技术问题， 本发明还提供了检测玉米基因组中SNP1477位点的多态说　明　书 1/8 页 3 CN 114774568 A 3