(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210230210.4 (22)申请日 2022.03.10 (71)申请人 安徽师范大学 地址 241005 安徽省芜湖市北京东路1号 申请人 合肥元哉生物科技有限公司 (72)发明人 高轩　李西清　程亚双　徐龙慧　 王丽达　路静　 (74)专利代理 机构 安徽申策知识产权代理事务 所(普通合伙) 34178 专利代理师 许晓璐 (51)Int.Cl. C12Q 1/6876(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种用于多位点可持续使用的基因分型标 准品 (57)摘要 本发明属于基因测序标准品技术领域， 提供 一种用于多位点可持续使用的基因分型标准品， 所述标准品包括PTC ‑HEX、 PTC ‑FAM和PTC ‑H； 其 中， PTC‑HEX的PCR产物包括rs25487(G)、 rs1042522(C)和rs 1048943(A)； PTC ‑FAM的PCR产 物包括rs25487(A)、 rs1042522(G)和rs1048943 (T)， PTC‑H的PCR产物包括PTC ‑HEX。 本标准品经 DNA结构改造， 可用于多位点SNP分型， 可持续使 用的基因分型标准品。 可通过单引物PCR扩增的 方式进行标准品复制， 从而使标准品可持续使 用， 且大大降低了标准品重新制备的成本 。 权利要求书1页 说明书10页 附图1页 CN 115125295 A 2022.09.30 CN 115125295 A 1.一种用于多位点可持续使用的基因分型标准品， 其特征在于： 所述标准品包括PTC ‑ HEX、 PTC ‑FAM和PTC ‑H； 其中， PTC ‑HEX的PCR产物包括rs25487(G)、 rs1042522(C)和 rs1048943(A)； PTC ‑FAM的PCR产物包括rs25487(A)、 rs1042522(G)和rs1048943(T)， PTC ‑H 的PCR产物包括PTC ‑HEX， 其中： 所述rs25487(G)的基因序列为： 5' ‑[HEX]CGGCTGCCCTCCCGGAGGTAAG[BHQ1]； 所述rs104252 2(C)的基因序列为： 5' ‑[HEX]CTGCTC CCCCCGTGGCCCC[BHQ1]； 所述rs1048943(A)的基因序列为： 5' ‑[HEX]CGGTGAGACCATTGCCCGCT[BHQ1]； 所述rs25487(A)的基因序列为： 5' ‑[6FAM]CG GCTGCCCTCCCAGAGGTAAG[BHQ1]； 所述rs104252 2(G)的基因序列为： 5' ‑[6FAM]CTGCTC CCCGCGTGGCCCC[BHQ1]； 所述rs1048943(T)的基因序列为： 5' ‑[6FAM]CG GTGAGACCGTTGCCCGCT[BHQ1]。 2.根据权利要求1所述的用于多位点可持续使用的基因分型标准品， 其特征在于： 所述 rs25487(G)的浓度为52.2～ 65.3ng/ μL， rs1042522(C)的浓度为59.5～74ng/ μL， rs1048943 (A)的浓度为47～82.1ng/ μL， rs2 5487(A)的浓度为48.1～ 53.2ng/ μL， rs1042 522(G)的浓度 为53.2～59.5ng/μL， rs1048943(T)的浓度为42.9～69.6ng/μL， PTC ‑HEX的浓度为52.4～ 73.2ng/ μL， PTC ‑HEX的浓度为 47.7～60ng/ μL。 3.一种权利要求1所述的用于多位点可持续使用的基因分型标准品的应用， 其特征在 于： 所述基因分型标准品用于同时连续检测三个SNP位点， 其名称分别为rs25487(G/A)、 rs104252 2(C/G)、 rs1048943(A/G)。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115125295 A 2一种用于多位点 可持续使用的基因分型标 准品 技术领域 [0001]本发明属于分子生物学技术基 因分型领域， 具体公开了一种适用于多位点基因分 型的标准品。 背景技术 [0002]SNP(Single  nucleotide polymorphism)即单核苷 酸多态性， 是基因组DNA中特定 核苷酸位置的单个碱基的转化、 转位、 插入或缺 失引起的点突变， 导致群体和个体之 间产生 差异。 随着测序技术和生信分析的快速发展， 海量的基因组学数据为SNP分子标记奠定了基 础， 数以万计的SNP多态性位点正在被不断发掘， 并广泛应用于遗传疾病诊断、 致病候选基 因研究、 药物筛选研究、 分子标记辅助育种、 群体遗传研究等。 因此对SNP标记的真实性验 证、 后续开发利用等变得 尤为重要。 [0003]常见的SNP位点一般有两种等位基因， 又称双等位基因。 因此在群体中， 每个个体 的一个SNP位点一般存在3种基因型： 突变前位点的基因型(纯合型1)、 突变后位点的基因型 (纯合型2)、 突变前后位点基因型共存(杂合型)。 通常通过SNP检测技术， 确定每个个体的每 个SNP位点的基因型属于以上三种基因型中的哪一种。 常见的SNP的检测平台有3种： 高通量 测序平台， 中通量基因芯片检测平台， 底通量电泳检测平台、 荧光定量P CR的检测平台、 酶标 检测平台等。 其中低通 量SNP检测平台应用最 为广泛和普及。 发明内容 [0004]低通量SNP检测平台往往需要每个SNP位点 的3种基因型的标准品做参考辅助SNP 检测。 常见的SNP检测标准品有两种： 一种从已知基因型样 本中筛选出3种基因型样本， 做 为 标准品； 另一种是合成已知基因型的基因序列， 作为标准品。 但这两种标准品面对多位点 SNP检测时均存在其弊端： 前者由于每个SNP位点需要3种基因型的标准品， 导致多位点SNP 的标准品， 管数众多， 存在 存储困难， 取用易出错等问题； 且每一批次标准品使用完后， 需重 新采样， 提取DNA制备标准品， 可能存在样本重新获取困难的问题， 且增加了DNA提取成本。 后者基因合成成本高， 尤其是多位点基因合成本更加高昂， 标准品使用完后， 需再次进行高 成本基因合成。 [0005]本发明针对现有S NP标准品的不足， 力求开发一种低成本， 可用于多位点S NP分型， 可持续使用的基因分型 标准品， 且该 标准品一套只有3管， 易于保存。 [0006]一种用于多位点可持续使用的基因分型标准品， 包括PTC ‑HEX、 PTC‑FAM和PTC ‑H； 其中， PTC‑HEX的PCR产物包 括rs25487(G)、 rs1042522(C)和rs1048943(A)； P TC‑FAM的PCR产 物包括rs25487(A)、 rs104252 2(G)和rs1048943(T)， PTC ‑H的PCR产物包括PTC ‑HEX， 其中： [0007]所述rs25487(G)的基因序列为： 5' ‑[HEX]CGGCTGCCCTCCCGGAGGTAAG[BHQ1]； [0008]所述rs104252 2(C)的基因序列为： 5' ‑[HEX]CTGCTC CCCCCGTGGCCCC[BHQ1]； [0009]所述rs1048943(A)的基因序列为： 5' ‑[HEX]CGGTGAGACCATTGCCCGCT[BHQ1]； [0010]所述rs25487(A)的基因序列为： 5' ‑[6FAM]CG GCTGCCCTCCCAGAGGTAAG[BHQ1]；说　明　书 1/10 页 3 CN 115125295 A 3