(19)国家知识产权局 (12)发明 专利 (10)授权公告 号 (45)授权公告日 (21)申请 号 202210213636.9 (22)申请日 2022.03.07 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 114277182 A (43)申请公布日 2022.04.05 (73)专利权人 北京林业大 学 地址 100083 北京市海淀区清华 东路35号 (72)发明人 刘勇　张劲　江文波　李国雷　 宋协海　常笑超　赵蕊蕊　贺国鑫　 彭玉信　薛敦孟　李世安　张恒月　 邢丽霞　 (74)专利代理 机构 北京高沃 律师事务所 1 1569 专利代理师 苏士莹 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01)C12N 15/11(2006.01) 审查员 宋梦 (54)发明名称 一种雄性毛白杨母株与后代关系的鉴定方 法及应用 (57)摘要 本发明提供了一种雄性毛白杨母株与后代 关系的鉴定方法及应用， 涉及种质创新技术领 域。 本发明通过创建雄性毛白杨古树优良单株的 叶绿体基因组图谱， 与已发表毛白杨叶绿体基因 组序列进行比对， 筛选出特异性差异 基因位点或 片段， 分别运用不同的分子标记技术， 有效确定 不同种源古树的优良单株与其子代的亲缘关系， 实现毛白杨苗木种源可追溯性， 为良种推广提供 技术保障。 权利要求书2页 说明书12页 序列表6页 附图14页 CN 114277182 B 2022.07.05 CN 114277182 B 1.一种雄性毛白杨母株与后代关系的鉴定方法， 其特征在于， 包括以下步骤： 创建雄性 毛白杨古树优良单株的叶绿体基因组图谱， 与已知的毛白杨叶绿体基因组序列进行比对， 筛选特异性差异基因位点或基因片段作为分子标记位点， 确定不同种源古树的优良单株与 其子代的亲缘关系； 所述 雄性毛白杨古树优良单株的树龄超过10 0年； 其中， 针对昌平区沙岭村古树设计的特异性引物包括SL ‑2F和SL‑2R， 所述SL ‑2F的核苷 酸序列如SEQ  ID NO.1所示， 所述SL ‑2R的核苷酸序列如SEQ  ID NO.2所示， 昌平区沙岭村古 树的特异性位点位置对应于MK251149所示叶绿体全长序列的45825  bp位点处， 其他毛白杨 古树该位点为碱基T， 昌平 区沙岭村古树该位点为碱基G， 昌平区沙岭村古树位于昌平 区沙 岭村， 树龄300 ‑500年， 胸径131.8cm， 树高28.0m， 来自昌平区沙岭村古树及其子代的引物 SL‑2F和SL‑2R的扩增产物能被AfeI或HaeII酶切开， 而来自其他毛白杨的扩增产物不能被 AfeI或HaeI I酶切开； 针对房山区沙窝古树设计 的特异性引物包括SW ‑2F和SW‑2R， 所述SW ‑2F的核苷酸序列 如SEQ ID NO.3所示， 所述SW ‑2R的核苷酸序列如SEQ  ID NO.4所示， 房山区沙窝古树的特异 性位点位置对应于MK251149所示叶绿体全长序列的53517bp位点处， 其他毛白杨古树该位 点为碱基A， 房山区沙窝古树该位点为碱基 G， 房山区沙窝古树位于房山区沙窝村， 树龄100 ‑ 300年， 胸径134.7cm， 树高2 9.0m； 针对大兴前安定古树设计 的特异性引物包括AD ‑2F和AD‑2R， 所述AD ‑2F的核苷酸序列 如SEQ ID NO.5所示， 所述AD ‑2R的核苷酸序列如SEQ  ID NO.6所示， 大兴前安定古树的特异 性位点位置对应于MK251149所示叶绿体全长序列的289  bp位点处， 其他毛白杨古树该位点 为碱基T， 大兴前安定古树该位点为空缺， 大兴前安定古树位于大兴前安定村， 树龄100 ‑300 年， 胸径134.0 cm， 树高28.0m； 针对大兴区大狼垡村古树设计 的特异性引物包括LF ‑2F和LF‑2R， 所述LF ‑2F的核苷酸 序列如SEQ  ID NO.7所示， 所述LF ‑2R的核苷酸序列如SEQ  ID NO.8所示， 大兴大狼垡古树的 特异性位点位置对应于MK251149所示叶绿体全长序列的81862 ‑81863 bp位点处， 其他毛白 杨古树为81863bp缺失， 大兴大狼垡古树为81862 ‑81863 bp缺失， 大兴大狼垡古树位于大兴 大狼垡村， 树龄 300‑500年， 胸径142.0 cm， 树高27.0m； 针对大兴辛房古树设计 的特异性引物包括XF ‑2F和XF‑2R， 所述XF ‑2F的核苷酸序列如 SEQ ID NO.9所示， 所述XF ‑2R的核苷酸序列如SEQ  ID NO.10所示， 大兴辛房古树的特异性 位点位置对应于MK251149所示叶绿体全长序列的64848bp处， 其他毛白杨古树该位点为碱 基C， 大兴辛房古树该位点为碱基T， 大兴辛房古树位于大兴前辛房村， 树龄100 ‑300年， 胸径 138.0cm， 树高28.0m， 来自大兴辛房古树及其子代的引物XF ‑2F和XF‑2R的扩增产物能被 PciI或AflIII酶切开， 而来自其 他毛白杨的扩增产物不能被Pci I或AflIII酶切开； 针对海淀东北义园古树设计的特异性引物包括DBYY ‑1F和DBYY ‑1R， 所述DBYY ‑1F的核 苷酸序列如SEQ  ID NO.11所示， 所述DBYY ‑1R的核苷酸序列如SEQ  ID NO.12所示， 海淀东北 义园古树的特异性位点为对应于MK251149所示叶绿体全长序列的7319 ‑7320 bp位点之间 存在碱基ATTTTT的插入， 其他毛白杨古树无上述插入序列， 海淀东北义园古树位于海淀区 东北义园， 树龄 300‑500年， 胸径134.0 cm， 树高20.8m。 2.根据权利要求1所述的鉴定方法， 其特征在于， 所述雄性毛白杨古树优良单株的性状 包括： 长寿雄 性、 不飞絮 、 不早衰、 健康状态良好、 树干通 直。权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114277182 B 23.权利要求1~2任一项所述的鉴定方法在追溯毛白杨苗木种源中的应用。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114277182 B 3