(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210074264.6 (22)申请日 2022.01.21 (71)申请人 生物岛实验室 地址 510320 广东省广州市海珠区广州国 际生物岛螺 旋三路6号 申请人 广东默迪优 谱生物科技有限公司 (72)发明人 翟志向　周晓光　宋合兴　李晨　 李运涛　 (74)专利代理 机构 北京智信四方知识产权代理 有限公司 1 1519 专利代理师 葛啟宏 (51)Int.Cl. C12Q 1/70(2006.01) C12Q 1/686(2018.01) C12N 15/11(2006.01)C12R 1/93(2006.01) (54)发明名称 新型冠状病毒多种变异株核酸质谱检测的 引物组合、 试剂盒及检测方法 (57)摘要 本发明公开了新型冠状病毒多种变异株核 酸质谱检测的引物组合、 试剂盒及检测方法， 涉 及分子生物学检测技术领域。 其中， 包括16条扩 增引物和9条质量探针延伸引物， 通过多重PCR技 术与MALDI ‑TOF技术联用， 能够实现在对新型冠 状病毒进行检测的同时， 还能进一步对多种变异 株进行分型鉴定。 检测通量高， 更适合于大规模 的新冠病毒病例筛查。 权利要求书1页 说明书8页 序列表5页 附图4页 CN 114686620 A 2022.07.01 CN 114686620 A 1.一种用于新型冠状病毒多种变异株核酸质谱检测的引物组合， 其特征在于， 包括16 条扩增引物和9条质量探针延伸引物， 其中， 扩增引物的核苷酸序列如SEQ  ID No.1‑16所 示； 质量探针延伸引物的核苷酸序列如SEQ  ID No.17‑25所示。 2.权利要求1所述的引物组合在制备新型冠状病 毒多种变异株核酸质谱检测产品中的 应用。 3.一种新型冠状病 毒多种变异株核酸质谱检测试剂 盒， 其特征在于， 包括权利要求1所 述的引物组合。 4.根据权利要求3所述的试剂盒， 其特征在于， 还包括RT ‑PCR反应试剂、 去磷酸化反应 试剂及质量探针延伸反应试剂。 5.一种新型冠状病毒多种变异株核酸质谱检测方法， 其特征在于， 所述方法使用如权 利要求3或4所述的试剂盒， 包括： (1)利用16条扩增引物对待测样本进行RT ‑PCR扩增反应； (2)对步骤(1)得到的扩增产物利用碱性磷酸酶进行去磷酸 化处理； (3)利用9条质量探针延伸引物对步骤(2)得到去磷酸 化产物进行 单碱基延伸； (4)对步骤(3)得到的延伸产物进行树脂脱盐纯化； (5)质谱检测， 确定变异株分型。 6.根据权利要求5所述的方法， 其特征在于， 所述新型冠状病毒多种变异株为Alpha变 异株、 Beta变异株、 Delta变异株或Lambda变异株。 7.根据权利要求5所述的方法， 其特征在于， 所述质谱检测采用的是基质辅助激光解吸 电离飞行时间质谱MALDI ‑TOF MS。 8.根据权利要求5所述的方法， 其特 征在于， 所述碱性磷酸酶为虾碱性磷酸酶。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114686620 A 2新型冠状病毒多种变异株 核酸质谱检测的引物组合、 试剂盒 及检测方 法 技术领域 [0001]本发明涉及分子生物学检测技术领域。 更具体地， 涉及一种新型冠状病毒多种变 异株 核酸质谱检测的引物组合、 试剂盒及检测方法。 背景技术 [0002]对于新冠病毒的核酸检测， 目前的主要方法是荧光定量RT ‑PCR方法。 由于荧光通 道的 限制， 一次只能对新冠病毒进行N， ORF1ab的两个靶标进行检测， 不能进行有效分型， 尤 其在低病毒载量条件 下， 容易出现单阳性， 假阴性的情况。 NGS高通量测序也是对新冠病   毒检测的一种重要技术， 通过全测序可以实现病毒及亚型 的准确鉴定， 但是整体流程时间   长， 不能快速给出病毒检测结果； 而且实验操作复杂， 样本检测成本高。 而在疫情大面积爆   发时， 能够对感染者或携带者快速准确检测诊断对于疫情防控具有至关重要的作用及意 义， 因此， 迫切需要一种特异 性高、 灵敏度高、 高通量且操作相对简单的低成本的检测方法 来对 新冠病毒变异株进行检测鉴定与进一 步分型。 [0003] 发明内容 [0004]本发明的一个目的在于提供一种用于新型冠状病毒多种变异株核酸质谱检测的 引物 组合及包 含这些引物组合的检测试剂盒， 提高对新型 冠状病毒的筛查诊断能力。 [0005]本发明的另一个目的在于提供一种利用上述试剂盒进行新型冠状病毒多种变异 株核 酸质谱检测的方法。 该 方法使得新型 冠状病毒检测特异性强， 灵敏度高。 [0006]为达到上述目的， 本发明采用下述 技术方案： [0007]第一方面， 本发明提供一种用于新型冠状病毒多种变异株核酸质谱检测的引物组 合， 包括16条扩增引物和9条质量探针延伸引物， 其中， 扩增引物的核苷酸序列如SEQ  ID No.1‑16所示， 具体见表1； 质量探针延伸引物的核苷酸序列如SEQ  ID No.17‑25所示， 具  体 见表2。 [0008]表1扩增引物序列 [0009] 说　明　书 1/8 页 3 CN 114686620 A 3