(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210058020.9 (22)申请日 2022.01.19 (71)申请人 山东省农业科 学院 地址 250131 山东省济南市历城区工业北 路202号 (72)发明人 房文文　郭涛　姜艳芳　王海凤　 张士永　薛芳　张焕霞　 (74)专利代理 机构 北京高沃 律师事务所 1 1569 代理人 张梦泽 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种检测稻瘟病抗瘟基因PigmR的引物对、 试剂盒及其应用和检测方法 (57)摘要 本发明属于分子生物学检测技术领域， 具体 涉及一种检测稻瘟病抗瘟基因PigmR的引物对、 试剂盒及其应用和检测方法。 本发 明提供了一种 检测稻瘟病抗瘟基因PigmR的引物对， 所述引物 对包括PigmR ‑F和PigmR ‑R； 所述PigmR ‑F的核苷 酸序列如SEQ  ID NO.1所示； 所述PigmR ‑R的核苷 酸序列如SEQ  ID NO.2所示。 本发明提供的引 物 对具有结果准确稳定、 操作简便、 检测周期短、 易 于实现高通量检测的优势， 对于促进PigmR基因 改良稻瘟病抗 性具有重要意 义。 权利要求书1页 说明书6页 序列表1页 附图3页 CN 114395641 A 2022.04.26 CN 114395641 A 1.一种检测稻瘟病抗瘟基因PigmR的引 物对， 其特征在于， 所述引物对包括PigmR ‑F和 PigmR‑R； 所述PigmR ‑F的核苷酸序列如SEQ  ID NO.1所示； 所述PigmR ‑R的核苷酸序列如SEQ   ID NO.2所示。 2.一种检测稻瘟病抗瘟基因PigmR的试剂盒， 其特征在于， 所述试剂盒包括权利要求1 所述的引物对。 3.根据权利要求2所述的试剂盒， 其特 征在于， 所述试剂盒为 荧光PCR‑HRM检测试剂盒。 4.权利要求1所述引物对或权利要求2或3所述试剂盒在检测稻瘟病抗瘟基因PigmR中 的应用。 5.一种检测稻瘟病抗瘟基因PigmR的方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： 以待测样品的DNA为模板DNA， 与权利要求1所述引物对或权利要求2或3所述试剂盒中 的引物对混合后进行荧光PCR扩增； 将PCR扩增产物进行熔解曲线分析， 得到待测样品熔解 温度； 当所述待测样品的熔解温度＜82.0℃时， 则所述待测样品为含有Pi gmR基因的样品； 当 所述待测样品熔解温度为≥82.0℃时， 则所述待测样品为 不含有PigmR基因的样品。 6.根据权利 要求5所述的方法， 其特征在于， 所述PCR扩增的反应程序包括： 94℃预变性 2min； 94℃变性10s， 6 0℃退火3 0s， 40个循环。 7.根据权利 要求5所述的方法， 其特征在于， 所述PCR扩增反应的反应体系以10 μL计， 包 括以下组分： 模板DNA  3 μL、 10×Taqbuffer 1μL、 dNTP  0.2 μL、 20 ×Evagreen  0.125 μL、 Taq   DNAPolymerase 0.1 μL、 所述引物对中的PigmR ‑F、 PigmR‑R各0.2 μL和余 量的ddH2O。 8.根权利要求7所述的方法， 其特征在于， 所述模板DNA的浓度为10～50ng/μL； 所述10 ×buffer含有Mg2+， 所述10×buffer中Mg2+的浓度为20mM； 所述dNTP的浓度为2.5mM； 所述 Taq DNAPolymerase的活力为0.5U； 所述引物对中的PigmR ‑F和PigmR ‑F的浓度分别为 0.1mM。 9.根据权利要求5所述的方法， 其特征在于， 所述熔解曲线分析的程序为： 95℃， 变性 15s； 60℃退火15s； 以0.07℃/s的速率升温， 10次/℃采集荧光信号， 至90℃ 保持1s， 进行熔 解曲线分析。 10.权利要求1所述引物对或权利要求2或3所述试剂盒在抗稻瘟病基因PigmR育种或辅 助育种中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114395641 A 2一种检测稻瘟病抗瘟 基因PigmR的引物对、 试剂盒及其应用和 检测方法 技术领域 [0001]本发明属于分子生物学检测技术领域， 具体涉及一种检测稻瘟病抗瘟基因PigmR 的引物对、 试剂盒及其应用和检测方法。 背景技术 [0002]稻瘟病是世界各水稻生产区内广泛发生、 且危害极大的一种真菌性病害。 培育和 选种抗病品种是防控稻瘟病最经济有效的措施。 分子标记辅助选择是加速育种进程的有效 办法。 [0003]水稻中鉴定了100多个稻瘟病抗性基因， 成功克隆了35个抗性基因或等位基因。 Pigm是广谱抗瘟基因， 与叶瘟抗性相关， 来源于谷梅4号。 其中PigmR和PigmS是2个功能蛋 白， 通过竞争形成异源二聚体， 减缓了病原菌对PigmR的致病力进化， 达到持久抗病。 该基因 位于Pi2/Pi9位点， 与 Pi2、 Pi9、 Piz、 Pizt、 Pi50为复等位基因。 目前检测PigmR基因的方法存 在周期长、 检测结果 不准确等缺点， 难以实现批量 化检测。 发明内容 [0004]本发明的目的在于提供一种检测稻瘟病抗瘟基因PigmR的引物对、 试剂盒及其应 用和检测方法。 本发明提供 的引物对具有结果准确稳定、 操作简便、 检测周期短、 易于实现 高通量检测的优势， 对于促进PigmR基因改良稻瘟病抗 性具有重要意 义。 [0005]为了实现上述目的， 本发明提供如下技 术方案： [0006]本发明提供了一种检测稻 瘟病抗瘟基因P igmR的引物对， 所述引物对包括PigmR ‑F 和PigmR‑R； 所述PigmR ‑F的核苷酸序列如SEQ  ID NO.1所示； 所述PigmR ‑R的核苷酸序列如 SEQ ID NO.2所示。 [0007]本发明提供了一种检测稻瘟病抗瘟基因PigmR的试剂盒， 所述试剂盒包括上述技 术方案所述的引物对。 [0008]优选的， 所述试剂盒为 荧光PCR‑HRM检测试剂盒。 [0009]本发明提供了上述技术方案所述引物对或上述技术方案所述试剂盒在检测稻瘟 病抗瘟基因PigmR中的应用。 [0010]本发明提供了一种检测稻瘟病抗瘟基因PigmR的方法， 包括以下步骤： [0011]以待测样品的D NA为模板D NA， 与上述技术方案所述引物对或上述技术方案所述试 剂盒中的引物对混合后进行PCR扩增； 将PCR扩增产物进行溶解曲线分析， 得到待测样品熔 解温度； [0012]当所述待测样品的熔解温度为＜82.0℃时， 则所述待测样品为含有PigmR基因的 样品； 当所述待测样品的温度为≥82.0℃时， 则所述待测样品为 不含有PigmR基因的样品。 [0013]优选的， 所述PCR扩增的反应程序包括： 94℃预变性2min； 94℃变性10s， 60℃退火 30s， 40个循环。说　明　书 1/6 页 3 CN 114395641 A 3