(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210054982.7 (22)申请日 2022.01.18 (71)申请人 扬州大学 地址 225000 江苏省扬州市邗江区大 学南 路88号 (72)发明人 蔡丛希　杨艳　陈学好　王一芃　 王晏然　鞠昊伦　齐晓花　许学文　 (74)专利代理 机构 北京市诚辉律师事务所 11430 专利代理师 范盈　李玉娜 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 与栽培型黄瓜果实亮度性状紧密连锁的SNP 标记及其应用 (57)摘要 本发明公开了与栽培型黄瓜果实亮度性状 紧密连锁的SNP标记及其应用， 该与黄瓜果实亮 度性状紧密连锁的SNP标记命名为glossy5_01， 位于黄瓜5号染色体25927507处， 为T/G多态。 本 发明的SNP标记具有高稳定性， 根据标记处基因 型即可判断黄瓜果实亮度的差异性， 从而可以在 苗期快速简便鉴定植株表型。 同时， 该标记也为 进一步开展高亮度黄瓜分子标记辅助育种奠定 基础。 权利要求书1页 说明书4页 序列表1页 附图2页 CN 114540528 A 2022.05.27 CN 114540528 A 1.一种与栽培型黄瓜果实亮度性状紧密连锁的SNP标记， 其特征在于， 所述SNP标记命 名为glossy5_01， 其位于参考基因组Gy14  v2 Genome的5号染色体第25927507位核苷酸， 具 有T或G的单核苷酸多态性； 在glossy5_01标记处基因型为T T时， 黄瓜果实为亮果皮； 在glossy5_01标记处基因型为G G或T/G时， 黄瓜果实为暗果皮。 2.一种位于 黄瓜5号染色体上且 包含权利要求1所述SNP标记的核苷酸。 3.根据权利要求2所述的核苷酸， 其特 征在于， 其核苷酸序列如SEQ  ID NO.3所示。 4.一组用于检测权利要求1所述SNP标记的引物对。 5.根据权利要求4所述的引物对， 其特征在于， 所述引物对的核苷酸序列如SEQ  ID  NO.1和SEQ  ID NO.2所示。 6.权利要求1所述的SNP标记、 权利要求2所述的核苷酸或权利要求4或5所述的引物对 在高亮度栽培型黄瓜分子标记辅助育种中的应用。 7.权利要求1所述的SNP标记、 权利要求2所述的核苷酸或权利要求4或5所述的引物对 在栽培型黄瓜果实亮度性状鉴定中的应用。 8.一种栽培型黄瓜果实亮度性状的鉴定方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： 1)提取待检测黄瓜 基因组DNA； 2)以待检测黄瓜 基因组DNA为模板， 利用权利要求 4或5所述引物对， 进行PCR扩增反应； 3)使用限制性内切酶NdeI对PCR扩增产物进行酶切， 酶切反应后， 产物经电泳检测， 根 据条带大小， 判别所述gl ossy5_01标记处的基因型， 从而确定 黄瓜果实亮度性状。 9.根据权利要求8所述的方法， 其特征在于， 步骤3)中， 若条带大小为201bp， 则该黄瓜 植株在glossy5_01标记处的基因型为GG纯合， 黄瓜果实为暗果皮； 若最长条带大小为 112bp， 则该黄瓜植株在glossy5_01标记处的基因型为TT纯合， 黄瓜果实为亮果皮； 若同时 含有201bp和112bp的条带， 则该黄瓜植株在glossy5_01标记处的基因型为T/G杂合， 黄瓜果 实为暗果皮。 10.一种培育高亮度栽培型黄瓜的方法， 其特征在于， 在高亮度黄瓜育种过程中， 采用 权利要求8或9所述黄瓜果实亮度性状的鉴定方法， 鉴定在glossy5_01标记处的基因型， 选 育在glossy5_01标记处基因型为T T纯合的个 体作为高亮度黄瓜新品种。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114540528 A 2与栽培型黄瓜果实亮度性状紧密连锁的SNP标记及其应用 技术领域 [0001]本发明属于基 因工程及分子生物学领域， 涉及与栽培型黄瓜果实亮度性状紧密连 锁的SNP标记及其应用。 背景技术 [0002]黄瓜(Cucumis  sativusL.)是我国栽培的主要大宗蔬菜之一， 且因其风味独特和 口感清脆而深受消费者的青睐。 随着社会经济的不断发展， 人们对黄瓜的品质需求进一步 提高， 果实亮度是黄瓜重要的外观品质， 油亮黄瓜对于消费者有更大 的吸引力。 因此， 培育 高亮度的优良黄瓜品种已经成为黄瓜品质育种的主 要目标之一。 [0003]相比传统育种方法， 分子标记辅助育种具有高效、 快速、 不受环境限制等优点， 可 在苗期进行筛选， 加快育种进程。 常用分子标记主要有3种， 即SSR(Simple  Sequence   Repeat)标记、 InDel(Insertion ‑deletion)标记和SNP(Single  Nucleotide   Polymorphism)标记， 与前两者相比， SNP标记更稳定和准确。 因此， 开发并应用与亮度性状 紧密连锁的SNP标记可以缩短高亮度黄瓜品种的育种周期并提高育种效率。 目前， 黄瓜亮度 相关的研究并不深入， 且尚未有与亮度性状紧密连锁的SNP标记的报道。 发明内容 [0004]为了解决现有技术中的不足， 本发明的目的在于提供与黄瓜果实亮度性状紧密连 锁的SNP标记及其应用。 [0005]本发明第一方面提供一种与栽培型黄瓜果实亮度性状紧密连锁的SNP标记， 命名 为glossy5_01， 其位于黄瓜5号染色体第25927507位核苷酸(参考基因组为Gy14  v2  Genome， http://cucurbitgen omics.org/)， 具有 T或G的单核苷酸多态性； [0006]在glossy5_01标记处基因型为T T时， 黄瓜果实为亮果皮； [0007]在glossy5_01标记处基因型为G G或T/G时， 黄瓜果实为暗果皮。 [0008]本发明第二方面提供一种位于黄瓜5号染色体上且包含glossy5_01标记的核苷 酸。 [0009]进一步地， 所述核苷酸序列如SEQ  ID NO.3所示。 [0010]本发明第三方面 提供一组用于检测所述gl ossy5_01标记的引物对。 [0011]进一步地， 所述用于检测所述glossy5_01标记的引物对的核苷酸序列如SEQ  ID  NO.1和SEQ  ID NO.2所示。 [0012]本发明第四方面提供所述glossy5_01标记、 位于黄瓜5号染色体上且包含 glossy5_01标记的核苷酸或所述glossy5_01标记的引物对在高亮度栽培型黄瓜分子标记 辅助育种中的应用。 [0013]本发明第五方面提供所述glossy5_01标记、 位于黄瓜5号染色体上且包含 glossy5_01标记的核苷酸或所述glossy5_01标记的引物对在栽培型黄瓜果实亮度性状鉴 定中的应用。说　明　书 1/4 页 3 CN 114540528 A 3