(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210045437.1 (22)申请日 2022.01.15 (71)申请人 黎榕萍 地址 526600 广东省肇庆市德庆县产业 转 移工业园崇德大道1 1号 (72)发明人 黎榕萍　田芸　 (51)Int.Cl. C12Q 1/70(2006.01) C12Q 1/6851(2018.01) C12N 15/11(2006.01) C12R 1/93(2006.01) (54)发明名称 一种用于快速检测乙型肝炎病毒基因的试 剂盒及其应用 (57)摘要 本发明一方面公开了一种长链非编码RNA， 所述的长链非编码RNA为lncRNA  MEG8、 lncRNA   HOTAIR、 lncRNA  ADAMTS9‑AS2， 定量检测lncRNA   MEG8、 lncRNA  HOTAIR、 lncRNA  ADAMTS9‑AS2表达 水平的试剂在制备诊断或预后检测乙型肝炎的 试剂盒中的应用。 另 一方面， 本发明还公开了一 种用于快速检测乙型肝炎病毒的试剂盒， 所述试 剂盒包括检测lncRNA  MEG8、 lncRNA  HOTAIR、 lncRNA ADAMTS9‑AS2表达水平的试剂。 本发明的 试剂盒具有良好的特异性和敏感性， 可用于乙型 肝炎病毒的早期诊断。 权利要求书1页 说明书5页 附图1页 CN 114317829 A 2022.04.12 CN 114317829 A 1.一种长链非编码RNA， 所述的长链非编码RNA为lncRNA  MEG8、 lncRNA  HOTAIR、 lncRNA   ADAMTS9‑AS2， 其特征在于， 定量检测lncRNA  MEG8、 lncRNA  HOTAIR、 lncRNA  ADAMTS9‑AS2表 达水平的试剂在制备诊断或预后检测乙型肝炎的试剂盒中的应用。 2.根据权利要求1所述的应用， 其特征在于， 所述的试剂为特异性扩增lncRNA  MEG8、 lncRNA HOTAIR、 l ncRNA ADAMTS9‑AS2的引物。 3.一种用于快速检测乙型肝炎病毒的试剂盒， 其特征在于， 所述试剂盒包括检测 lncRNA MEG8、 lncRNA HOTAIR、 l ncRNA ADAMTS9‑AS2表达水平的试剂。 4.根据权利要求3所述的试剂盒， 其特征在于， 所述的的试剂包括特异性扩增lncRNA   MEG8、 lncRNA HOTAIR、 l ncRNA ADAMTS9‑AS2的引物。 5.根据权利要求3所述的试剂盒， 其特征在于， 所述的特异性扩增lncRNA  MEG8、 lncRNA   HOTAIR、 l ncRNA ADAMTS9‑AS2的引物为： lncRNA MEG8‑F： 5’ ‑cctcagtatcctgcgagctg‑3’； lncRNA MEG8‑R： 5’ ‑tctcctgtacccagcacgta‑3’； lncRNA HOTAIR‑F： 5’ ‑ggaagcgaaggggttgtgta‑3’； lncRNA HOTAIR‑R： 5’ ‑gcaggaggaagttcaggcat‑3’； lncRNA ADAMTS9‑AS2‑F： 5’ ‑ggacctgctcctttcccttc‑3’； lncRNA ADAMTS9‑AS2‑R： 5’ ‑caagccccttctggtctgag‑3’。 6.根据权利要求3所述的试剂盒， 其特征在于， 所述的试剂盒的所述判定公式为Y＝ ‑ 0.028*AlncRNA MEG8+0.048*BlncRNA HOTAIR+0.046*ClncRNA ADAMTS9‑AS2； 其中， AlncRNA MEG8是lncRNA   MEG8的表达量， B  lncRNA HOTAIR是lncRNA  HOTAIR的表达量， ClncRNA ADAMTS9 ‑AS2是lncRNA   ADAMTS9‑AS2的表达量； 当Y≥0.5时判断为阳性， 表 示可能患有乙型肝炎或是乙型肝炎病毒 携带者； 当Y＜0.5时判为阴性， 表示可能未感染乙型肝炎病毒。 7.一种快速检测乙型肝炎病 毒的仪器， 其特征在于， 所述的仪器由前处理装置、 检测装 置和后处 理装置组成。 8.根据权利要求7所述的仪器， 其特征在于， 所述的前处理装置为核酸处理装置， 用于 样品的处理和核酸的提取和评价； 所述的检测装置为P CR检测装置， 对 前处理装置提取的核 酸进行标志物的定量检测； 所述的后处理装置为结果判定装置， 对检测装置检测的结果进 行判定， 并出 具和打印检测报告。 9.根据权利要求8所述的仪器， 其特征在于， 所述的标志物为lncRNA  MEG8、 lncRNA   HOTAIR、 l ncRNA ADAMTS9‑AS2。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114317829 A 2一种用于快速检测乙型肝炎病毒基因的试剂盒及其应用 技术领域 [0001]本发明属临床医学诊断领域， 具体涉及一种用于快速检测乙型肝炎病毒基因的试 剂盒及其应用。 背景技术 [0002]乙型病毒性肝炎的病原为乙肝炎病毒， 缩写为HBV， 乙型肝炎病毒为D NA病毒。 基因 组是双链、 环形、 不完全闭合DNA。 病毒最外层是病毒的外膜或称衣膜(envelope)， 其内层为 核心部分(core)， 核蛋白即是核心抗原(HBcAg)， 不能在血清中检出。 [0003]非编码RNA(Non ‑coding RNA)是指不编码蛋白质的RNA。 其中包括LncRNA， tRNA， snRNA， snoRNA和microRNA等多种已知 功能的RNA 。 这些RNA的共同特点是都能从基因组上转 录而来， 但是不翻译成蛋白， 在RNA水平上就能行使各自的生物学功能了， 主要包括基因的 激活和沉默， RNA的剪 接、 修饰和编辑， 蛋白质的翻译等。 [0004]长链非编码RNA(Long  non‑coding RNA,lncRNA)是长度大于200个核苷酸的非编 码RNA。 研究表明,lncRNA在剂量补偿效应、 表观遗传调控、 细胞周期调控和细胞分化调控等 众多生命活动中发挥重要作用， 成为遗传学研究热点。 [0005]中国发明专利(CN  111826466  B)已经公开了一种检测microRNA的方法和试剂盒 来对乙型肝炎病毒的早筛。 马庆， 吕宗军等公开了LncRNA ‑HEIH和LncRNA ‑HULC与乙型肝炎 相关性肝病的相关性。 邓慧敏， 张琰， 宋春丽， 周义文等公开了lncRNA在乙型肝炎病毒复制 调控中的研究进 展。 [0006]综上所述， 现在迫切需要一类准确、 特异以及灵敏的lncRNA， 能够在乙型肝炎病毒 (HBV)患者、 携带者和健康者人群早期筛查、 诊断和监测预后复发中发挥作用。 发明内容 [0007]为了弥补现有技术的不足， 本发明在于提供一种用于早期检测乙型肝炎病毒的生 物标志物及其试剂盒和 应用。 该检测方法能够检测人体外周血中极微量的lncRNA， 灵敏度 高， 特异性强。 [0008]因此， 本发明一方面公开了一种长链非编码RNA， 所述的长链非编码RNA为lncRNA   MEG8、 lncRNA  HOTAIR、 lncRNA  ADAMTS9 ‑AS2， 定量检测lncRNA  MEG8、 lncRNA  HOTAIR、 lncRNA ADAMTS9‑AS2表达水平的试剂在制备诊断或预后检测乙型肝炎的试剂盒中的应用。 [0009]优选地， 本发明所述的试剂为特异性扩增lncRNA  MEG8、 lncRNA  HOTAIR、 lncRNA   ADAMTS9‑AS2的引物。 [0010]另一方面， 本发明还提供了一种用于快速检测乙型肝炎病毒的试剂盒， 所述试剂 盒包括检测l ncRNA MEG8、 lncRNA HOTAIR、 l ncRNA ADAMTS9‑AS2表达水平的试剂。 [0011]优选地， 本发明所述的的试剂包括特异性扩增lncRNA  MEG8、 lncRNA  HOTAIR、 lncRNA ADAMTS9‑AS2的引物。 [0012]优选地， 本发 明所述的特异 性扩增lncRNAMEG8、 lncRNA  HOTAIR、 lncRNA  ADAMTS9‑说　明　书 1/5 页 3 CN 114317829 A 3