(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210030085.2 (22)申请日 2022.01.12 (71)申请人 西南大学 地址 400715 重庆市北碚区天生路2号 申请人 四川省农业科 学院水产研究所 (72)发明人 罗辉　叶华　周剑　李雨　 (74)专利代理 机构 重庆晶智汇知识产权代理事 务所(普通 合伙) 50229 代理人 李靖 (51)Int.Cl. C12Q 1/6888(2018.01) C12Q 1/6879(2018.01) C12Q 1/686(2018.01) C12N 15/11(2006.01) (54)发明名称 一种鉴别长吻鮠遗传性别的分子标记及应 用 (57)摘要 本发明公开了一种鉴别长吻鮠遗传性别的 Indel分子标记， 为第7号染色体第1130404位碱 基处上一段长32bp的插入/缺失序列， 利用特异 性引物PCR扩增后获得长吻鮠在雌雄间的差异性 产物， 从而达到准确鉴定长吻鮠性别目的。 本发 明可以在长吻鮠胚胎、 仔稚鱼、 幼鱼及成鱼时期 简便、 快速、 稳定地鉴别遗传性别， 有助于长吻鮠 单性育种技术的开发， 实现长吻鮠的全雄养殖， 能在不增加养殖量的前提下大幅度提高产量， 从 而增加长吻鮠养殖的经济收益。 权利要求书1页 说明书3页 序列表1页 附图1页 CN 114214433 A 2022.03.22 CN 114214433 A 1.一种鉴别 长吻鮠遗传性别的分子标记， 其特征在于： 所述分子标记为长吻鮠第7号染 色体第1130404位碱基处一段长32bp的插入/缺失的核苷酸序列， 为SEQ  ID NO.1所示， 雌性 个体具有SEQ  ID NO.1序列， 雄 性个体缺失SEQ  ID NO.1序列。 2.用于检测权利要求1所述分子标记 的特异性引物， 其特征在于： 前引物F1， 核苷酸序 列为SEQ ID NO.2所示， 后引物R 1， 核苷酸序列为SEQ  ID NO.3所示。 3.采用如权利要求1所述分子标记鉴别长吻鮠遗传性别的检测方法， 其特 征在于： （1） 提取待测基因 组DNA； （2） 以待测基因组DNA为模板， 采用权利 要求2所述特异性引物进行PCR扩增， PCR反应体 系为： 10 x Buffer (Mg+ free) 1 μL， 25 mM MgCl2 1 μL， dNTP  Mix (10 mm each) 1.6 μL， 正向、 反向引物  (10 mm) 各1μL， 模板  DNA 1μL, TaqDNA聚合酶  (5U/μL) 0.2 μL， ddH2O  13.2 μL； PCR反应程序为： 94℃预变性5  min； 94℃变性30  s, 50 ℃退火30  s, 72 ℃ 延伸45 s 左右， 循环3 0次; 72 ℃延伸10 min； （3） 根据电泳图对长吻鮠的遗传性别 进行判断， 仅存在410bp特异性片段的个体为雌性 长吻鮠， 有410  bp 和378 bp两条片段的个 体为雄性长吻鮠。 4.一种用于鉴别 长吻鮠遗传性别的试剂 盒， 其特征在于： 该试剂 盒包括如下引物， 前引 物为F1， 核苷酸序列为SEQ  ID NO.2所示， 后引物为R 1， 核苷酸序列为SEQ  ID NO.3所示。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114214433 A 2一种鉴别长吻鮠遗传性别的分子标记及应用 [0001] 技术领域 [0002]本发明涉及生物技术领域， 具体涉及一种鉴别长吻鮠遗传性别的分子标记及应 用。 [0003] 技术背景 [0004]硬骨鱼类具有多样、 复杂的性别决定机制， 鱼类的性别决定分为遗传性别决定 （Genetic  sex determination,  GSD）和环境性别决定（Eenvironmental  sex  determination,  ESD） ， GSD主要是通过异型性染色体进行判断， 如雄性异型配子XX/ XY型和 雌性异型配子ZW/ZZ 型。 然而， 绝大多数的鱼类的性 染色体还不能通过目前的细胞遗传学分 析进行鉴定。 因此， 研究者通过开 发性别特异分子标记鉴定鱼类遗传性别， 目前已获得超过 30种鱼类的性别特异DNA标记， 这些标记包括扩增片段长度多态性 （Amplified  Fragment   Length Polymorphism， AFLP） 、 随机扩增多态性DNA （Rando m Amplification  Polymorphism   DNA， RAPD） 、 微卫星标记  (Simple Sequence  Repeat， SSR)、 单核苷酸多态性(Single   Nucleotide  Polymorphism， SNP)和苷酸序列的插入/缺失长度多态性 （Insertion ‑ deletion, InDel） 等。 [0005]长吻鮠(Leiocassis  longirostris )又名鮰鱼， 属鲶形目(Siloriformes)、 鲿科 (Bagridae)、 鮠属( Leiocassi s)， 因其吻部较一般鱼长， 故名长吻鮠。 长吻鮠肉质细嫩、 口感 爽滑、 且肌间刺少、 营养丰富， 民间素有 “不食江团， 不知鱼味 ”之说， 其鳔十分肥厚， 干制成 “鱼肚”是享誉中外的珍肴。 长吻鮠是我国名贵淡水经济 鱼类之一， 多分布于我国长江干流、 通江湖泊和各大支流的下流水域。 长吻鮠具有显著的雌雄生长二态性， 雄鱼生长速度显著 快于雌鱼， 进行全雄化养殖可以在不增加养殖量的前提下大幅度提高产量， 开发其单性育 种与单性养殖技术具有重要的产业意义。 但在其性腺发育成熟之前， 长吻鮠的雌鱼和雄鱼 外部形态完全没有区别， 无法用肉眼识别 雌雄个体； 通过细胞遗传学手段没有发现异型性 染色体， 也无法通过性 染色体鉴定其遗传性别； 这极大地限制了全雄化育种技术的发展。 因 此， 急需开发一种鉴别长吻鮠遗传性别的分子标记用于标记辅助育种。 [0006] 发明内容 [0007]本发明的目的在于提供一种快速精准鉴定长吻鮠性别的分子标记， 进而加快长吻 鮠全雄化育种进程。 [0008]本发明的另一目的在于提供 上述鉴定长吻鮠性别的检测方法。 [0009]本发明的又一目的在于提供 上述鉴定长吻鮠性别的检测试剂盒。 [0010]本发明目的是通过如下技 术方案实现的： 一种鉴别长吻鮠遗传性别的分子标记， 其特征在于： 所述分子标记为长吻鮠第7号说　明　书 1/3 页 3 CN 114214433 A 3