(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210034587.2 (22)申请日 2022.01.12 (71)申请人 首钢医院有限公司 地址 100144 北京市石景山区西黄 村首钢 医院住院处1- 63幢 (72)发明人 胡守奎　闫琳琳　赵帆　唐冲　 蔡煜　农金轻　张可　朱琳琳　 王鹏飞　吴蕾　朱晓雪　 (74)专利代理 机构 北京华沛德权律师事务所 11302 专利代理师 马苗苗 (51)Int.Cl. C12Q 1/689(2018.01) C12Q 1/6844(2018.01) C12Q 1/6804(2018.01)C12N 15/11(2006.01) C12R 1/36(2006.01) (54)发明名称 一种基于多交叉置换扩增检测脑膜炎奈瑟 菌的引物和方法 (57)摘要 本发明属于脑膜炎奈瑟菌检测技术领域， 尤 其涉及一种基于多交叉置换扩增检测脑膜炎奈 瑟菌的引物和方法。 所述引物包括第一引物， 所 述第一引物包括： 交叉内引物对、 置换引物对和 三组扩增引物对； 其核苷酸序列如SEQ  ID NO： 1‑ SEQ ID NO： 10所示， 将本申请引物进行MCDA扩 增， 对原始核酸序列起到指数级别的放大作用， 提高检测精度， 缩短检测时间。 权利要求书2页 说明书14页 序列表8页 附图4页 CN 114480681 A 2022.05.13 CN 114480681 A 1.一种基于多交叉置换扩增检测脑膜炎奈瑟菌的引物， 其特征在于， 所述引物包括第 一引物， 所述第一引物包括： 如核苷酸序列如SEQ  ID NO： 1所示的置换引物F1和如核苷酸序列如SEQ  ID NO： 2所示 的置换引物F2； 如核苷酸序列如SEQ  ID NO： 3所示的交叉内引物CP1和 如核苷酸序列如SEQ  ID NO： 4所 示的交叉内引物CP2； 如核苷酸序列如SEQ  ID NO： 5所示的扩增引物C1和如核苷酸序列如SEQ  ID N0： 6所示 的扩增引物C2； 如核苷酸序列如SEQ  ID NO： 7所示的扩增引物D1和如核苷酸序列如SEQ  ID NO： 8所示 的扩增引物D2； 如核苷酸序列如SEQ  ID NO： 9所示的扩增引物R1和 如核苷酸序列如SEQ  ID NO： 10所示 的扩增引物R2。 2.根据权利要求1所述的引物， 其特征在于， 所述引物还包括第二引物， 用于脑膜炎奈 瑟菌血清群检测， 所述第二引物包括： 第一组引物、 第二组引物、 第三组引物和第四组引物 中的至少一组， 所述第一组引物为特异基因sacB的引物， 所述第二组引物为针对特异基因 siaD第一区域的引物， 所述第三组引物为针对特异基因siaD第二区域的引物， 所述第四组 引物为特异基因synG的引物。 3.根据权利要求2所述的引物， 其特征在于， 所述第一组引物包括： 核苷酸序列如SEQ   ID NO： 11‑12所示的置换引物对A， 核苷酸序列如SEQ  ID NO： 13‑14所示的交叉内引物对A， 核苷酸序列如SEQ  ID NO： 15‑20所示的三组扩增引物对A。 4.根据权利要求2所述的引物， 其特征在于， 所述第二组引物包括： 核苷酸序列如SEQ   ID NO： 21‑22所示的置换引物对B， 核苷酸序列如SEQ  ID NO： 23‑24所示的交叉内引物对B， 核苷酸序列如SEQ  ID NO： 25‑30所示的三组扩增引物对B。 5.根据权利要求2所述的引物， 其特征在于， 所述第三组引物包括： 核苷酸序列如SEQ   ID NO： 31‑32所示的置换引物对C， 核苷酸序列如SEQ  ID NO： 33‑34所示的交叉内引物对C， 核苷酸序列如SEQ  ID NO： 35‑40所示的三组扩增引物对C 。 6.根据权利要求2所述的引物， 其特征在于， 所述第四组引物包括： 核苷酸序列如SEQ   ID NO： 41‑42所示的置 换引物对W135， 核苷酸序列如SEQ  ID NO： 43‑44所示的交叉内引物对 W135， 核苷酸序列如SEQ  ID NO： 45‑50所示的三组扩增引物对W13 5。 7.一种基于多交叉置换扩增检测脑膜炎奈瑟菌的引物的使用方法， 其特征在于， 所述 方法包括： 将权利要求1所述的引物进行M CDA扩增， 所述M CDA扩增的反应温度为62 ‑67℃。 8.一种基于多交叉置换扩增检测脑膜炎奈瑟菌的引物的使用方法， 其特征在于， 将权 利要求1所述的第一引物进行M CDA扩增， 所述M CDA扩增的目标基因片段模板浓度≥10fg。 9.一种基于多交叉置换扩增检测脑膜炎奈瑟菌的检测器具， 其特征在于， 所述检测器 具的组成部件包括： 样品垫、 金标垫、 纤维膜、 吸水垫及背板， 所述样品垫、 金标垫、 纤维膜及 吸水垫依次组装在背板上； 所述金标垫中物质包括： 金纳米粒子偶联的链霉素 亲和素； 所述纤维膜中物质包括： 含抗异硫氰酸荧光素的捕获抗体和生物素偶联的牛血清蛋 白；权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114480681 A 2所述检测器具还包括： 如权利 要求1‑6任意一项所述的引物， 用于对待检测物进行MCDA 扩增以使扩增产物滴入所述样品垫 。 10.基于多交叉置换扩增的脑膜炎奈瑟菌及其血清群的检测方法， 其特征在于， 所述方 法包括以下步骤： 得到如权利要求1 ‑6任意一项的所述引物； 在所述引物 的扩增引物中， 任意一条扩增引物 的5’端标记异硫氰酸荧光素， 任意一条 扩增引物的5 ’端标记生物素， 得到标识有异硫氰酸 荧光素和生物素的第三引物； 将待检测物与所述第三引物进行M CDA扩增， 得到双标M CDA产物； 对所述双标MCDA产物进行金纳米检测， 判断所述待检测物是否有脑膜炎奈瑟菌及其血 清群。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114480681 A 3