(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210723088.4 (22)申请日 2022.06.24 (71)申请人 浙江康佰裕生物科技有限公司 地址 310051 浙江省杭州市滨江区滨安路 688号天和高科产业园 (72)发明人 朱建高　杨文君　 (74)专利代理 机构 北京纪凯知识产权代理有限 公司 11245 专利代理师 董函竹 (51)Int.Cl. C12N 13/00(2006.01) C12N 5/0783(2010.01) C12N 5/10(2006.01) C12N 15/62(2006.01) C12N 15/867(2006.01)A61K 35/17(2015.01) A61K 39/00(2006.01) A61P 35/00(2006.01) (54)发明名称 一种新型同种异体 CAR-T细胞的制备及应用 (57)摘要 本发明公开了一种新型同种异 体CAR‑T细胞 的制备及应用。 所要解决的技术问题是如何在过 继性细胞免疫治疗中抑制T细胞增殖以降低GVHD 反应并保持T细胞活性的方法。 本发明首先提供 了一种抑制T细胞增殖的方法， 包括用电离射线 对离体的T细胞进行辐照处理， 所述电离射线可 为X射线， 所述辐照处理条件包括10Gy照射500s 或30Gy照射1500s。 本发明制备的辐照CAR ‑T细胞 增殖活性被抑制， 但仍保持良好的T细胞活性、 分 泌功能效应分子IFN ‑γ功能、 脱颗粒能力和体内 和体外特异性杀伤靶细胞的能力。 可提前大批量 生产， 有效地控制毒副反应CRS、 CRES、 GVHD， 无基 因编辑相关风险， 避免污染 RCR的风险。 权利要求书1页 说明书12页 序列表4页 附图5页 CN 115109774 A 2022.09.27 CN 115109774 A 1.一种抑制T细胞增殖的方法， 其特征在于， 所述方法包括用电离射线对离体的T细胞 进行辐照处理， 所述电离射线选自α 射线、 β 射线、 γ射线、 X射线、 电子束、 质子束、 重离子束、 中子束中的一种或几种。 2.根据权利要求1所述的方法， 其特征在于， 所述电离射线为X射线， 所述辐照处理的时 间为200‑2000秒。 3.根据权利要求2所述的方法， 其特 征在于， 所述辐照处 理的剂量 为1‑50Gy。 4.根据权利要求2或3所述的方法， 其特 征在于， 所述辐照处 理为下述任一种： A1)辐照剂量 为10Gy， 辐照时间为5 00秒； A2)辐照剂量 为30Gy， 辐照时间为15 00秒。 5.根据权利要求2 ‑4中任一所述的方法， 其特征在于， 所述辐照处理条件为： 剂量率为 1.199Gy/min。 6.根据权利要求1 ‑5中任一所述的方法， 其特征在于， 所述T细胞为过继性细胞免疫治 疗中的效应T细胞。 7.根据权利要求6所述的方法， 其特 征在于， 所述效应T细胞为下述任一种： B1)CAR‑T细胞、 TCR ‑T细胞、 LAK细胞、 TI L细胞、 CIK细胞或CTL细胞； B2)表达BC MA‑CAR‑CD27基因的T细胞。 8.一种制备增殖活性降低的T细胞的方法， 所述方法包括利用权利要求1 ‑5中任一所述 方法对T细胞进 行辐照处理， 得到辐照T细胞， 所述辐照T细胞的增殖 活性低于所述T细胞， 所 述辐照T细胞为增殖活性降低的T细胞。 9.由权利要求8所述的方法制备的增殖活性降低的T细胞。 10.根据权利要求9所述的增殖活性降低的T细胞， 其特征在于， 所述T细胞为下述任一 种： B1)CAR‑T细胞、 TCR ‑T细胞、 LAK细胞、 TI L细胞、 CIK细胞或CTL细胞； B2)表达BC MA‑CAR‑CD27基因的T细胞。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115109774 A 2一种新型同种异体CAR ‑T细胞的制备及应用 技术领域 [0001]本发明涉及 细胞免疫 治疗领域中的一种新型同种异体CAR ‑T细胞的制备及应用。 背景技术 [0002]过继性细胞免疫治疗(Adopt ive cell therapy， ACT)是指通过向机体输注在体外 扩增的自体或同种异体特异性或非特异性的免疫细胞， 直接或间接杀伤肿瘤细胞的疗法。 过继性细胞免疫治疗包括淋巴因子激活的杀伤细胞(Lymphokine  activated  killer  cell， LAK  cell)免疫疗法、 肿瘤浸润淋巴细胞(Tumor  infiltratin g lymphocyte， TIL)免 疫疗法、 细胞因子诱导的杀伤细胞(Cytokine  induced killer cell， CIK  cell)免疫疗法、 细胞毒性T细胞(Cytotoxic  T lymphocyte， CTL)免疫疗法、 T细胞受体基因工程改造的T细 胞(T cell receptor  gene engineered  T cell， TCR ‑T)免疫疗法和嵌合抗原受体T细胞 (Chimeric  antigen receptor  T cell， CAR‑T)免疫疗法。 LAK细胞疗法因高剂量IL ‑2的应 用而产生严重的不良反应， 另外LAK细胞自身在体外较低的扩增能力和体内有限的杀瘤活 性， 导致其慢慢地退出临床治疗的舞台。 TIL细胞是指从肿瘤组织中分离出的浸润淋巴细 胞， 是过继性细胞免疫治疗中继LAK细胞后又一代高效的抗肿瘤效应T细胞， 1986年 Rosenber g等首先报道了TIL用于治疗转移性黑色素瘤， 得到较好的临床疗效。 作为肿 瘤微 环境中的一类免疫细胞， TIL在宿主抗肿 瘤免疫反应中发挥重要作用。 CIK细胞又称为 自然 杀伤细胞样T细胞， 是继LAK细胞、 TIL之后的新一代 抗肿瘤过继性免疫细胞。 CIK细胞的杀伤 毒性较LAK细胞强， 也不像TIL增殖时需与肿瘤细胞直接接触， 并且 具有广谱的杀瘤活性， 在 免疫治疗过程中产生的不良反应较小， 是一种安全、 有效的治疗方法。 CTL的功能特点是可 以在MHC限制的条件下， 直接、 连续、 特异性地杀伤靶细胞， 具有 高效性。 TCR ‑T和CAR‑T是目 前临床研究中过继性细胞免疫治疗的两大最新技术。 TCR ‑T细胞和CAR ‑T细胞均通过基因改 造手段提高T细胞受体(TCR)对特异性肿瘤抗原的识别、 攻击和杀伤能力， 但是两者在受体 结构和抗原识别方面有很大区别。 TCR ‑T细胞免疫技术作为传统过继性细胞免疫疗法 的延 伸， 其识别肿瘤抗原的能力依赖于表达于抗原 提呈细胞表 面的MHC分子， 其优势在于不仅能 够识别肿瘤细胞表面抗原， 还能够识别肿瘤细胞内的抗原。 CAR ‑T是将外周血单个核细胞 (Peripheral  blood mononuclear  cell， PBMC)在体外 经过基因修饰、 细胞因子刺激和诱导 生成的一种具有非MHC限制性的携带特异性抗原受体且可在体内扩增的CTL。 研究表明， CAR‑T细胞对肿瘤的攻击是特异、 高效及持续的， 尤其在血液肿瘤的治疗 方面。 近年来， CAR ‑ T细胞治疗在B细胞等的血液系统肿瘤中取得了令人鼓舞的疗效， 但该疗法的产业化难以实 现仍然是阻碍其发展的瓶颈所在。 [0003]目前常规自体CAR ‑T或异体CAR ‑T治疗面临如下问题： (1)治疗窗 口和细胞制备： 常 规自体CAR ‑T的治疗窗口和细胞生产时间较长， 不太适合用于进展较快的侵袭性肿瘤的治 疗； 自体CAR ‑T的细胞来源受限于患者本身免疫系统中T细胞的数量和其杀伤能力， 导致治 疗效果有高有低； 自体CAR ‑T细胞每批生产的批量小， 仅适合用于1个患者使用， 不易于规模 化生产； 自体CAR ‑T细胞需针对每个患者的具体情况实施 生产， 流程复杂， 不易于统一质控。说　明　书 1/12 页 3 CN 115109774 A 3