(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210948247.0 (22)申请日 2022.08.08 (71)申请人 北京金必来 生物科技有限公司 地址 101400 北京市怀柔区北房镇经纬工 业区16号 (72)发明人 谢利国　付荣军　 (51)Int.Cl. C12N 1/14(2006.01) C12M 1/00(2006.01) C12R 1/645(2006.01) (54)发明名称 一种丛枝菌根真菌的连续扩繁方法 (57)摘要 本发明公开了一种丛枝菌根真菌的连续扩 繁方法， 本发明涉及微生物应用的技术领域， 它 包括以下步骤： S1、 制作培养装置； S2、 在填装前 将沸石、 河 沙和土壤混合， 混合后对其辐照灭菌； 在菌根室和尼龙网袋的混合基质内均添加营养 液， 同时在尼龙网袋的混合基质内添加磷营养 液； S3、 利用 层接法在培养室将菌剂接种于菌根 室的混合基质内； 选择多年生豆科植物为宿主植 物， 将种子播种于菌根室的混合基质内， 一周后 间苗， 每个菌根室保留5株长势一致的植株。 本发 明的有益效果是： 提高生产出的丛枝菌根真菌的 遗传稳定性、 高节省人力物力、 便于AM真菌技术 的规模化应用和普及。 权利要求书1页 说明书5页 附图4页 CN 115141759 A 2022.10.04 CN 115141759 A 1.一种丛枝菌根真菌的连续扩繁方法， 其特 征在于： 它包括以下步骤： S1、 制作培养装置， 取用一个顶部带开口的塑料长方体盒， 在塑料长方体盒内焊接一个 隔板， 隔板将塑料长方体盒分 隔为菌根室(4)和菌丝室(5)， 在隔板上开出连通菌根室(4)和 菌丝室(5)内的窗口， 在窗口处焊接将其遮挡 住的滤网(3)， 然后在菌丝室(5)内填装带开口 的尼龙网袋(2)， 随后在菌根室(4)的上开口处套装顶部带开口的透明防护罩(1)， 从而最终 实现了培养装置的制作； S2、 在菌根室(4)内填装体积比分别为7： 2： 1的沸石、 河沙和土壤的混合基质， 在填装前 将沸石、 河 沙和土壤 混合， 混合后对其辐 照灭菌； 在尼龙网袋(2)内填装体积比分别为5： 2： 3 的沸石、 河沙和土壤的混合基质， 在填装前将沸 石、 河沙和土壤 混合， 混合后对其辐照灭菌； 在菌根室(4)和尼龙网袋(2)的混合基质内均添加营养液， 同时在尼龙网袋(2)的混合基质 内添加磷营养液； S3、 利用层接法在培养室将菌剂接种于菌根室(4)的混合基质内； 选择多年生豆科植物 为宿主植物， 用10％过氧化氢溶液将宿 主植物浸泡消毒9～10 min， 浸泡后， 用蒸馏水对种子 清洗， 待洗净后， 将种子置于黑暗潮湿的室温环境下催芽1～2天， 待种子露白后， 将种子播 种于菌根室(4)的混合基质内， 一周后间苗， 每 个菌根室保留5株长势一 致的植株； S4、 待生长2个半月后， 第一次采取植株根系样品进行侵染率测定， 收取并更换相同的 菌丝室(5)中尼龙网袋(2)内的混合基质， 对授权的混合基质进 行孢子密度和菌丝密度的测 定， 之后每隔一个半月重复上述操作， 共计三次； S5、 步骤S5结束后， 将植株地下部的根系剪碎， 待干燥后与培养基质混合即可得丛枝菌 根真菌。 2.根据权利要求1所述的一种丛枝菌根真菌的连续扩繁方法， 其特征在于： 所述步骤S1 中， 滤网(3)的网孔 直径为30～50 μm， 滤网(3)完整覆盖所述窗口。 3.根据权利要求1所述的一种丛枝菌根真菌的连续扩繁方法， 其特征在于： 所述步骤S1 中， 尼龙网袋(2)的孔径大小为70～10 0 μm， 尼龙网袋(2)的形状为长方体或椭球形。 4.根据权利要求1所述的一种丛枝菌根真菌的连续扩繁方法， 其特征在于： 所述步骤S1 中， 透明防护罩(1)为塑料或玻璃材质， 透明防护罩(1)高出菌根室(4)15～ 20cm。 5.根据权利要求1所述的一种丛枝菌根真菌的连续扩繁方法， 其特征在于： 所述步骤S1 中， 菌丝室(5)的形状为长方 形。 6.根据权利要求1所述的一种丛枝菌根真菌的连续扩繁方法， 其特征在于： 所述步骤S3 中， 多年生豆科植物为白三叶草、 甘草、 紫 穗槐、 胡枝子中任意 一种。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115141759 A 2一种丛枝菌根真 菌的连续扩繁方 法 技术领域 [0001]本发明涉及微 生物应用的技 术领域， 特别是一种丛枝菌根真菌的连续扩繁方法。 背景技术 [0002]丛枝菌根(arbuscular  mycorrhiza， AM)真菌是自然界中普遍存在的土壤真菌， 能 与大多数陆生植物形成共生体并产生互惠关系。 AM真菌能够促进植物吸收矿质元素和水 分， 特别是对磷的吸收， 增强植物的抗逆性和抗病性， 提高苗木移栽的成活率， 促进植物生 长， 提高作物的品质和产量， 而且能提高土壤质量， 改善退化土壤肥力等。 由于AM真菌对于 植物重要的作用， 其在农林生产、 环 境保护和生态修复等方面的应用前景十 分广阔， AM 真菌 的研究和发展日益受到世界各国的关注， 对其进行广泛的开发应用也成为目前的重要任 务。 [0003]由于AM真菌是一种专性活体营养微生物， 只能与宿主植物共生以完成生命周期， 故借助宿 主植物对其进 行扩繁是获取AM 真菌的有效途径。 目前AM 真菌的扩繁方法主要有盆 栽培养法、 培养基培养 法、 营养液培养法、 玻璃珠分室培养 法、 雾化培养法、 大田培养法及离 体双重培养 法等。 其中， 营养液培养 法对技术要求高， 操作复杂， 成本较高， AM真菌菌物产量 相对较少， 扩繁效果差； 离体双重培养 法和玻璃珠培养法可获得纯度较高的AM 真菌， 但数量 较少， 操作和技术难度大， 仅适用于科研和特殊目的要求； 大田培养法是在开放的环境中培 养AM真菌， 容易受到污染， 不适用于商业化菌剂生产。 盆栽培养法还是当前广泛使用的AM 真 菌扩繁方法， 是将AM 真菌的孢子、 菌丝和植株被侵染的根段等繁殖体， 接种于宿 主植物生长 的基质中， 经过培养获得风干后的包含AM 真菌繁殖体的培养基质。 此方法操作简单， 生产的 菌剂也比较可靠， 但其需要较大的空间和较长的时间培养， 菌剂 体积大不便于运输， 且菌剂 的质量降低速度较快， 每半年至一年就需要转接一次， 培养或转接过程中可能受到污染而 造成菌株的损失， 以至 于造成菌种的退化和性状丢失。 [0004]因此， 需要一种便捷高效的AM真菌扩繁方法， 既能减少菌剂生产中人力物力的耗 费， 又能保证菌种的遗传稳定性， 收获 高质量的AM 真菌菌剂， 满足农林、 生态、 环 境等行业对 AM真菌菌剂的迫切需求。 发明内容 [0005]本发明的目的在于克服现有技术的缺点， 提供一种提高生产出的丛枝菌根真菌的 遗传稳定性、 高节省人力物力、 便于AM真菌技术的规模化应用和普及的丛枝菌根真菌的连 续扩繁方法。 [0006]本发明的目的通过以下技术方案来实现： 一种丛枝菌根真菌 的连续扩繁方法， 它 包括以下步骤： [0007]S1、 制作培养装置， 取用一个顶部带开口的塑料长方体盒， 在塑料长方体盒内焊接 一个隔板， 隔板将塑料长方体盒分隔为菌根室和菌丝室， 在隔板上开出连通菌根室和菌丝 室内的窗口， 在窗口处焊接将其遮挡 住的滤网， 然后在菌丝室内填装 带开口的尼龙网袋， 随说　明　书 1/5 页 3 CN 115141759 A 3