(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210918915.5 (22)申请日 2022.08.02 (71)申请人 四川农业大 学 地址 611830 四川省成 都市温江区惠民路 211号 申请人 广东省农业科 学院作物研究所 　 四川天府新区乡村振兴研究院 (72)发明人 林海建　李高科　李静威　胡剑锋　 冉峰　卢艳丽　汪青军　黄剑波　 胡尔良　 (74)专利代理 机构 西安铭泽知识产权代理事务 所(普通合伙) 61223 专利代理师 谢欢 (51)Int.Cl. G01N 1/28(2006.01)G01N 1/30(2006.01) G01N 21/84(2006.01) (54)发明名称 一种鉴别玉米单倍体的方法 (57)摘要 本发明属于农林技术领域， 具体涉及一种鉴 别玉米单倍体的方法， 所述方法包括以下步骤： 步骤一， 选择鉴别对象； 步骤二， 预处理： 将鉴别 对象至于含亚硫酸根的蒸馏水溶液中浸泡30 ‑ 50min， 然后水洗， 得到预处理样本； 步骤三， 固 定： 将预处理样本至于改良的固定液中固定8 ‑ 20h； 所述改良的固定液由无水乙醇、 冰醋酸、 亚 硫酸根溶液按照3:1:0.01 ‑0.03的体积比例混合 而成； 步骤四， 染色、 压片和镜检。 本发明提供的 鉴别玉米单倍体的方法一天内可完成鉴定， 耗时 短， 鉴别效率高， 精确度高。 权利要求书1页 说明书5页 CN 115144245 A 2022.10.04 CN 115144245 A 1.一种鉴别玉米单倍体的方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： 步骤一， 选择鉴别对象； 步骤二， 预处理： 将鉴别对象至于含亚硫酸根的蒸馏水溶液中浸泡30 ‑50min， 然后水 洗， 得到预处 理样本； 步骤三， 固定： 将预处 理样本至于改良的固定液中 固定8‑20h； 所述改良的固定液由无水乙醇、 冰醋酸、 亚硫酸根溶液按照3:1:0.01 ‑0.03的体积比例 混合而成； 步骤四， 染色、 压片和镜检。 2.根据权利要求1所述的一种鉴别玉米单倍体的方法， 其特征在于， 所述鉴别对象为父 本的花粉和母本的雌蕊； 或者 为授粉后的玉米幼胚； 或者 为玉米根尖。 3.根据权利要求2所述的一种鉴别玉米单倍体的方法， 其特征在于， 所述鉴别对象为授 粉前1‑2天的花粉和雌蕊； 或者 为长度5‑10mm的玉米幼胚； 或者 为长度1‑2mm的玉米根尖。 4.根据权利要求3所述的一种鉴别玉米单倍体的方法， 其特征在于， 当所述鉴别对象为 花粉和雌蕊， 或者 为玉米幼胚时， 鉴别对象的父本为农大高诱1号， 母本为郑 单958； 当所述鉴别对象为玉米根尖时， 植物体为农大高诱1号。 5.根据权利要求1所述的一种鉴别玉米单倍体的方法， 其特征在于， 含亚硫酸根的蒸馏 水溶液中亚硫酸 根的浓度为0.01 ‑0.03mol/L。 6.根据权利要求1所述的一种鉴别玉米单倍体的方法， 其特征在于， 亚硫酸根溶液中亚 硫酸根的浓度为0.1 ‑0.3mol/L。 7.根据权利要求5或6所述的一种鉴别玉米单倍体的方法， 其特征在于， 所述亚硫酸根 来源于亚硫酸钠。 8.根据权利要求7所述的一种鉴别玉米单倍体的方法， 其特征在于， 步骤二中浸泡 时向 溶液中添加非氧化 性酸溶液。 9.根据权利要求1所述的一种鉴别玉米单倍体的方法， 其特征在于， 非氧化性酸溶液为 0.01‑0.05mol/L盐酸溶液， 添加量为含亚硫酸根的蒸馏水的体积的1％每隔15min添加一 次， 分两次添加。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115144245 A 2一种鉴别玉米单倍体的方 法 技术领域 [0001]本发明属于农林技 术领域， 具体涉及一种鉴别玉米单倍体的方法。 背景技术 [0002]单倍体育种能获得所需形状 的纯合个体， 自交后代不发生性状分离， 所以能迅速 获得纯合体， 缩短育种年限， 加快育种进程。 传统的育种方法选育玉米自交系通常需要经过 6‑10代才能获得稳定的自交系， 时间跨度长， 所以快速鉴定并开发玉米单倍体植株对于加 速玉米育种过程具有重要意 义。 [0003]现有技术中， 关于玉米单倍体鉴定的方法有很多， 包括： 细胞遗传学方法， 其采用 染色剂对植物细胞进行染色， 并镜检， 根据染色结果区分单倍体， 优点是检测结果精度高， 缺点是染色时间长； 植物形态学鉴定， 其需要精 准掌握单倍体与其他植株的形态， 比如 玉米 单倍体的植株通常小于标准亲本植株， 优点是无需化学试剂， 缺点是该方法需要在大量样 本中区分出长势差的单倍体， 工作量大， 精确度较差； 遗传标记法， 通过特殊的分子标记等 对玉米单倍体进行标记， 然后进 行鉴别， 该方法虽然精确度也较高， 但是分子标记的过程也 需要消耗较长的时间， 并且分子标记的选择性较强， 并不 适用于大部分玉米品种。 [0004]综上所述， 现有技术存在的问题是精确度差， 或者单倍体鉴别精确度 高的方法耗 时长， 因此， 需要开发一种耗时短且具有良好精确度的玉米单倍体鉴别方法。 发明内容 [0005]为了解决上述 技术问题， 本发明提供了一种鉴别玉米单倍体的方法。 [0006]本发明的目的是提供一种鉴别玉米单倍体的方法， 包括以下步骤： [0007]步骤一， 选择鉴别对象； [0008]步骤二， 预处理： 将 鉴别对象至于含亚硫酸根的蒸馏 水溶液中浸泡30 ‑50min， 然后 水洗15‑30min， 得到预处 理样本； [0009]步骤三， 固定： 将预处 理样本至于改良的固定液中 固定8‑20h； [0010]所述改良的固定液由无水乙醇、 冰 醋酸、 亚硫酸根溶液按照3:1:0.01 ‑0.03的体积 比例混合而成； [0011]步骤四， 染色、 压片和镜检。 [0012]优选的， 上述鉴别玉米单倍体的方法， 所述鉴别对象为父本的花粉和母本的雌蕊； 或者为授粉后的玉米幼胚； 或者 为玉米根尖。 [0013]优选的， 上述鉴别玉米单倍体的方法， 所述鉴别对象为授粉前1 ‑2天的花粉和雌 蕊； 或者为长度5‑10mm的玉米幼胚； 或者 为长度1‑2mm的玉米根尖。 [0014]优选的， 上述鉴别玉米单倍体的方法， 当所述鉴别对象为花粉和雌蕊， 或者为玉米 幼胚时， 鉴别对象的父本为农大高诱1号， 母本为郑 单958； [0015]当所述鉴别对象为玉米根尖时， 植物体为玉米孤雌生殖诱 导系农大高诱1号。 [0016]优选的， 上述鉴别玉米单倍体的方法， 含亚硫酸根的蒸馏水溶液中亚硫酸根的浓说　明　书 1/5 页 3 CN 115144245 A 3