ICS 65.150 B 51 DB2102 大 连 市 地 方 标 准 DB 2102/T 0005—2020 海带配子体采苗及育苗技术规程 Technical Specification for Gametophyte clonal breeding of Saccharina japonica 2020 - 10 - 29 发布 大连市市场监督管理局 2020 - 11 - 29 实施 发 布 DB2102/T 0005—2020 前 言 本标准按照GB/T 1.1—2020给出规则起草。 本标准由大连市农业农村局提出并归口。 本标准主要起草单位：大连海宝渔业有限公司。 本标准主要起草人：冷晓飞、张喜昌、刘剑波、孙颖、许淑芬。 本标准发布实施后，任何单位和个人如有问题和意见建议，均可以通过来电和来函等方式进行反馈， 我们将及时答复并认真处理，根据实际情况依法进行评估及复审。 归口管理部门：大连市农业农村局 通讯地址：大连市西岗区新开路87号 联系电话：0411-83689291 标准起草单位：大连海宝渔业有限公司 通讯地址：辽宁省大连市旅顺口区铁山街道柏岚子村1号 联系人：刘剑波 联系电话：18741166775 I DB2102/T 0005—2020 海带配子体采苗及育苗技术规程 1 范围 本标准规定了海带配子体采苗及育苗的环境与水质、设施、配子体扩增培养、配子体育苗和苗帘出 库、运输。 本标准适用于大连地区室内海带配子体采苗及育苗。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，标注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用 于本文件。 NY 5052 无公害食品 海水养殖用水水质 NY 5362 无公害食品 海水养殖产地环境条件 SC/T 2024 种海带 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 3.1 配子体 gametophyte 形成配子进行有性生殖世代的藻体（核相 n）。 4 环境与水质 育苗场址应选择远离城市污水和工业污水排放口，附近没有大型河流入海，岩石或砂质底质的沿海 区域，其它环境条件应符合NY 5362的规定，水质应符合NY 5052的规定。 5 5.1 设施 扩增培养室 用于配子体的扩增培养，应为配有制冷设施的保温室，内设培养台架和充气设备，台架层高50 cm， 各层顶部应配备LED灯管。 5.2 育苗室 1 DB2102/T 0005—2020 育苗室设置应为温室结构，以东西走向为宜。屋顶下设置可拉伸的黑色和白色布帘各一层，窗口设 深色布帘。育苗池呈平面并联式，单池规格 10 m×1.4 m×0.5 m。池内设搅拌机保持循环水流。 5.3 供排水系统 包括泵房、沉淀池、砂滤罐（塔）、储水池、回水池等。 5.4 制冷系统 包括集成式制冷机、制冷槽、砂滤罐、回水槽等。 6 配子体扩增培养 6.1 配子体准备 6.1.1 游孢子采集与配子体培育 在海带成熟季节，参照SC/T 2024的规定选择种海带。用消毒剪刀剪下3 cm×3 cm含有孢子囊的藻体， 以灭菌纱布蘸消毒海水清洗藻体表面浮泥杂藻，阴干1 h～3 h后，转移到盛有消毒海水的烧杯中放散游 孢子。5 min后镜检，视野（×100）中游孢子数量达到10个～20个以上时，取中上层孢子液，接种到多 个加有培养液的消毒培养皿中培养20 d，获得配子体。培养条件为温度15 ℃～20 ℃，光照500 lx～1000 lx，光周期L：D=12 h:12 h。培养液为灭菌海水中添加NaNO3-N 10 mg/L，KH2PO4-P 2 mg/L，F/2 培养基 1 ml/L。 6.1.2 配子体雌雄分离与保种 用微细管分离法分离雌雄配子体，分别移到数个直径18 cm盛有培养液的培养皿内培养。培养条件 为：温度15 ℃～20 ℃，光照500 lx～1000 lx。当配子体生长至布满培养皿底面时，将雌雄配子体用消 毒毛刷刷下，转移到50 ml透明试管中，在温度4 ℃～8 ℃，光照低于50 lx条件下储藏保种。每月更换一 次培养液。培养液为在灭菌海水中添加NaNO3-N 10 mg/L，KH2PO4-P 2 mg/L。 6.2 配子体扩增 配子体扩增应在采苗前6个月进行，在适宜的培养条件下，扩增后的配子体生物量每月可翻一倍。 采苗时，一个苗帘需求雌雄配子体各0.5 g，因此，可根据苗帘数确定配子体需求量和扩增时间。 6.3 配子体扩增操作 将低温储藏的雌、雄配子体分别移入组织捣碎机中，加灭菌冰海水至1000 ml， 16000 r/min 切碎 30 s后，按 1 g/L～1.5 g/L的密度，分别接种于5 L三角烧瓶中培养。 6.4 扩增培养条件 应符合以下要求： ——扩增培养用海水应为煮沸消毒的砂滤海水； ——培养液温度应控制在 15 ℃～20 ℃； ——光照应控制在 1000 lx～1500 lx，光周期 L：D=12 h:12 h； ——培养瓶应 24 小时连续充气； ——新培养液中营养盐浓度应为 NaNO3-N 10 mg/L，KH2PO4-P 2 mg/L； ——更换培养液或接种前，操作人员双手和器具应消毒。 2 DB2102/T 0005—2020 6.5 扩增培养管理 6.5.1 更换培养液 培养液 2 周更换一次，更换前应停止充气，使配子体自然沉降于烧瓶底部，将烧瓶中上层的旧培养 液倒出。配子体量较多时，用 300 目筛绢收集倒出的配子体。 6.5.2 分瓶扩增培养 配子体生长至15 g/L～20 g/L时应分瓶培养。若配子体呈絮状，直接分瓶培养。若配子体呈簇团状， 用300目筛绢滤出配子体，转入组织捣碎机，加灭菌冰海水至1000 ml，16000 r/min 切碎30 s后，分瓶 扩增培养。 7 配子体育苗 7.1 采苗前准备 7.1.1 苗帘的组装 应按以下要求进行： ——使用聚乙烯材质规格为 68 cm×34 cm 长方形框架，上缠直径 3.0 mm～4.0 mm，混纺 1 根～3 根 聚乙烯丝的白色维尼纶绳，绳不宜缠得过紧，每帘用绳 37 m； ——苗帘使用前需用喷灯将苗绳上的细毛烤掉，且使用三道聚乙烯绳均匀的固定好苗帘绳； ——苗帘 4 帘一组，水平并列绑缚到两根长 1.4 m 的 PVC 圆管上。 7.1.2 育苗池处理 每个育苗池 2 个长池壁内侧距池底20 cm处，设置托架，用于托放成组的苗种帘。 7.2 采苗 7.2.1 采苗时间 可根据海区养殖季节来确定，多在8月中旬。 7.2.2 配子体切碎 用灭菌的 300 目筛绢网收集扩增培育养的配子体。每次取50 g配子体，转移到组织捣碎机，加灭菌 冰海水至1000 ml，16000 r/min 切碎120 s，经 400 目筛绢过滤，未滤出的配子体细胞段继续切碎过滤。 重复切碎 4 次后，将捣碎机中的配子体细胞段混合到前三次的滤液中备用。 7.2.3 附苗 把备好的海带苗种帘逐组摆放到育苗池壁托架上，9 ℃～11 ℃低温海水浸泡预冷，池水没过苗种帘 6 cm～8 cm。将雌、雄配子体细胞段按照破碎前湿重的 1:1 混合，用5 ℃～6 ℃低温海水稀释，按照1 g/ 帘的配子体用量，均匀泼洒在苗种帘上方的水面，使配子体细胞段沉降到苗种帘上，静水附着72 h，水 温9 ℃～13 ℃。 7.3 7.3.1 幼苗培育管理 水流、水温及换水量 3 DB2102/T 0005—2020 附苗72 h后正常流水，流速5 cm/s～10 cm/s，水温9 ℃～11 ℃。每日补新水。幼孢子体规格在0.3 mm 之前，日补水量30%，规格在0.3 mm～10 mm时，日补水量60%，规格在10 mm以上，日补水量100%。 7.3.2 光照及营养盐 配子体期，光照不高于2000 lx，营养盐NaNO3-N 3 mg/L，KH2PO4-P 0.6 mg/L，F/2 培养基0.3 mg/L； 幼孢子体前期，规格在0.5 mm之前，光照不高于3500 lx，营养盐NaNO3-N 3 mg/L，KH2PO4-P 0.3 mg/L， FeC6H5O7-Fe·5H2O 0.02 mg/L；幼孢子体后期，规格在0.5 mm之后，光照不高于7000 lx，营养盐NaNO3-N 4 mg/L，KH2PO4-P 0.4 mg/L。 7.3.3 洗帘 附苗20 d内不洗涮苗帘；附苗20 d后，每3 d洗刷苗帘1次。 7.3.4 病害及防治 应符合表1的要求。 表1 名称 长脖子病 绿烂病 白尖病 8 8.1 育苗期间主要病害及防治方法 症状 病因 防治方法 柄部变细、变脆，抖动后脱落 多为幼苗密度大，光照不 （1）增加洗刷苗帘的次数；（2）适当 严重，叶片失去光泽。 叶片从尖端开始变绿、变软， 逐渐腐烂脱落。 足。 提高光照强度；（3）降低水温。 （1）适当提高光照强度；（2）增加补 多为光照不足。 水量，加大流速；（3）降低水温；（4） 加强苗帘洗刷。 藻体尖端变白，而后只剩下空 细胞脱落掉。 （1）调节光照强度；（2）防止幼苗受 多为突然受强光刺激。 到突然的强光刺激； （3）经常活动苗帘； （4）加强苗帘洗刷。 苗帘出库、运输 出库时间 10月份，海水温度降至20 ℃以下。 8.2 出库规格 海带幼苗长度达到1.5 cm～2 cm。 8.3 运输方法 将苗帘置于规格为70 cm×40 cm×35 cm保温箱内，每箱18帘，箱内两端各放置2个用海棉包裹的冰 瓶，密封运输。从苗帘出库至转运到暂养海区的时间应控制在10 h以内。 _________________________________ 4