(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 20221094575 3.4 (22)申请日 2022.08.08 (71)申请人 江苏格诺生物科技有限公司 地址 226009 江苏省南 通市开发区新 东路9 号 (72)发明人 孙纯朴　薛良　陈璐　 (74)专利代理 机构 深圳博敖专利代理事务所 (普通合伙) 44884 专利代理师 杨洋 (51)Int.Cl. G01N 30/06(2006.01) G01N 30/04(2006.01) G01N 30/14(2006.01) G01N 30/02(2006.01) G01N 30/72(2006.01)G01N 30/88(2006.01) (54)发明名称 一种检测人血清中多种维生素的预处理试 剂盒及其使用方法 (57)摘要 本发明公开一种检测人血清中多种维生素 的预处理试剂盒， 本预处理试剂盒应用于LC ‑MS 法检测人血清中维生素A、 维生素D2、 维生素D3、 维生素E含量前的预处理， 本 试剂盒包括有A液和 C液， 其中： A液中包括有用于沉淀蛋白质， 减少上 清液杂质的乙腈， C液中包括有用于上清液复溶， 减少溶剂效应的甲醇。 本发明使用乙腈沉淀蛋白 上清杂质少， 处理后的上清液加入甲醇复溶， 能 有效减少溶剂效应， 相比目前主流免疫化学发光 测定法， 通过预处理试剂盒处理后， 上样质谱分 析， 具有特异性好， 灵敏度高， 检测限更低的显著 优势， 具有更广阔的应用前 景。 权利要求书1页 说明书4页 附图1页 CN 115166118 A 2022.10.11 CN 115166118 A 1.一种检测人血清中多种维生素的预处理试剂盒， 本预处理试剂盒应用于LC ‑MS法检 测人血清中维生素含量前的预处 理， 其特征在于： 本试剂盒包括有A液和C液， 其中： A液中包括有用于沉淀蛋白质， 减少上清液杂质的乙腈； C液中包括有用于上清液复溶， 减少溶剂效应的 甲醇。 2.根据权利要求1所述的检测人血清中多种维生素的预处理试剂盒的使用方法， 其特 征在于： 本方法包括以下步骤： S1、 配液 预处理； S2、 加入A液混匀 和S3、 加入C液处 理， 其中： S1、 配液预处理： 量取定量的取维生素标线1～6、 质控和内标储存液， 使用乙腈稀释内 标储存液得到内标工作液。 S2、 加入A液混匀： 精密吸取血清样品、 标线或质控20 ‑25μL于1.5mL离心管中， 添加90 ‑ 110 μL A液和95‑120 μL内标工作液， 手动摇匀； S3、 加入C液处理： 取经过步骤S2处理后的上清液100 ‑120μL于96孔板中， 加入80 ‑100μ LC液， 振荡5 ‑8min， 待上机通过LC ‑MS法检测。 3.根据权利要求2所述的检测人血清中多种维生素的预处理试剂盒的使用方法， 其特 征在于： 本方法步骤S1中量取的取维生素标线1～6、 质控和内标储存液需先进行恢复至室 温， 振荡混匀处 理。 4.根据权利要求2所述的检测人血清中多种维生素的预处理试剂盒的使用方法， 其特 征在于： 本方法步骤S2中手动摇匀后分别进行振荡处 理和离心处 理。 5.根据权利要求4所述的检测人血清中多种维生素的预处理试剂盒的使用方法， 其特 征在于： 所述振荡处理采用旋涡振荡器旋涡振荡， 振荡时长为5min， 旋涡振荡器转速为 1000rpm。 6.根据权利要求4所述的检测人血清中多种维生素的预处理试剂盒及的用方法， 其特 征在于： 所述离心处 理为在4℃的温度下离心 2min， 离心转速为120 0rpm。 7.根据权利要求2所述的检测人血清中多种维生素的预处理试剂盒的使用方法， 其特 征在于： 本方法步骤S3中振荡采用旋涡振荡器， 其中旋涡振荡器转速为10 00rpm。 8.根据权利要求1所述的检测人血清中多种维生素的预处理试剂 盒， 其特征在于： 所述 A液和C液均采用不透光的玻璃瓶进行封装。 9.根据权利要求2所述的检测人血清中多种维生素的预处理试剂 盒， 其特征在于： 所述 标准曲线C1～C6： VA线 性范围为： 2 5～2500ng/mL， VD2线 性范围为： 2～2 00ng/mL， VD3线 性范 围为： 2～200ng/mL， VE线性范围为： 0.25～5 0 μg/mL， VK1线性范围为： 0.1～ 20ng/mL； 所述质控品LQC、 MQC、 HQC： VA的浓度为： 50、 1000、 2000ng/mL， VD2的浓度为： 5、 100、 150ng/mL， VD3的浓度为： 5、 100、 150ng/mL， VE的浓度为： 0.5、 20、 40μg/mL， VK1的浓度为： 0.2、 8、 16ng/mL； 所述内标工作液浓度： VA内标浓度为： 200ng/mL， VD2内标浓度为： 50ng/mL， VD3内标浓 度为： 50ng/mL， VE内标浓度为： 5 μg/mL， VK1内标浓度为： 2ng/mL。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115166118 A 2一种检测人血清中多种 维生素的预处理试剂盒及其使用方 法 技术领域 [0001]本发明涉及 微量化合物检测技术领域， 具体为一种检测人血清中多种维生素的预 处理试剂盒及其使用方法。 背景技术 [0002]维生素在人体生长、 发育和代谢过程中发挥重要的作用， 合理的维生素含量水平 对维持身体健康非常重要， 准确测量其含量， 可以指导人们科学合理地补 充维生素、 预防疾 病， 提高生活质量。 [0003]现有技术的不足： [0004]目前， 市面上各种基于化学发光法的维生素检测试剂盒， 多是直接检测人血清中 的维生素含量， 但受 限于方法学 的灵敏度和特异性， 致使检测结果不能精确 地反映人血清 中的维生素含量， 不能为临床诊断提供 更加有效的信息 。 发明内容 [0005]本发明的目的在于提供一种检测人血清中多种维生素的预处理试剂盒及其使用 方法， 以解决上述背景技 术中提出的问题。 [0006]一种检测 人血清中多种维生素的预处理试剂盒， 本预处理试剂盒应用于LC ‑MS法 检测人血清中维生素含量前的预处 理， 本试剂盒包括有A液和C液， 其中： [0007]A液中包括有用于沉淀蛋白质， 减少上清液杂质的乙腈； [0008]C液中包括有用于上清液复溶， 减少溶剂效应的 甲醇。 [0009]本发明还公开了一种检测人血清中多种维生素的预处理试剂盒的使用方法， 本方 法包括以下步骤： S1、 配液 预处理； S2、 加入A液混匀 和S3、 加入C液处 理， 其中： [0010]S1、 配液预处理： 量取定量 的取维生素标线1～6、 质控和内标储存液， 使用乙腈稀 释内标储 存液得到内标工作液； [0011]S2、 加入A液混匀： 精密吸取血清样品、 标线或质控20 ‑25 μL于1.5mL离心管中， 添加 90‑110 μL A液和95‑120 μL内标工作液， 手动摇匀； [0012]S3、 加入C液处理： 取经过步骤S2处理后的上清液100 ‑120μL于96孔板中， 加入80 ‑ 100 μLC液， 振荡5 ‑8min， 待上机通过LC ‑MS法检测。 [0013]作为本发明的进一步改进， 本方法步骤S1中量取的取维生素标线1～6、 质控和内 标储存液需先进行恢复至室温， 振荡混匀处 理。 [0014]作为本发明的进一步改进， 本方法步骤S2中手动摇匀后分别进行振荡处理和离心 处理。 [0015]作为本发明的进一步改进， 所述振荡处理采用旋涡振荡器旋涡振荡， 振荡时长为 5min， 旋涡振荡器转速为10 00rpm。 [0016]作为本发明的进一步改进， 所述离心处理为在4℃的温度下离心2min， 离心转速为 1200rpm。说　明　书 1/4 页 3 CN 115166118 A 3