(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210939965.1 (22)申请日 2022.08.05 (71)申请人 吴昕辰 地址 100013 北京市朝阳区和平街28号 申请人 张梦奇 (72)发明人 吴昕辰　张梦奇　王道兵　杨文宁　 杨瑞　张洛琪　 (74)专利代理 机构 北京文慧专利代理事务所 (特殊普通 合伙) 11955 专利代理师 戴丽伟 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) G01N 30/06(2006.01) (54)发明名称 一种检测阿卡 地新兴奋剂的方法 (57)摘要 本发明涉及一种检测阿卡地新兴奋剂的方 法， 包括以下步骤： (1)对样本进行萃取； (2)采用 “液相色谱 ‑氧化接口 ‑同位素比值测定仪 ”检测， 获得AICAR的δ13C值； (3)检测参照物的δ13C值； (4)根据AICAR的δ13C值与参照物的δ13C值的差 值判断样本中阿卡地新兴奋剂的检测结果是否 为阳性。 该方法无需衍生化， 克服了现有技术中 因硅烷化产生副反应产物影 响检测的技术缺陷， 可以用于竞技体育的兴奋剂检测， 简便易行， 灵 敏准确。 权利要求书1页 说明书7页 附图1页 CN 115267000 A 2022.11.01 CN 115267000 A 1.一种检测阿卡 地新兴奋剂的方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： (1)对样本进行萃取； (2)采用“液相色谱 ‑氧化接口 ‑同位素比值测定 仪”检测， 获得AICAR的δ13C值； (3)检测参照物的δ13C值； (4)根据AICAR 的δ13C值与参照物的δ13C值的差值判断样本中阿卡地新兴奋剂的检测结 果是否为阳性。 2.根据权利要求1所述一种检测阿卡地新兴奋剂的方法， 其特征在于， 步骤(2)中， 色谱 柱为Zorbax  SB‑Aq色谱柱或等效柱， 柱温25 ‑55℃。 3.根据权利要求1所述一种检测阿卡地新兴奋剂的方法， 其特征在于， 步骤(2)中， 输送 氧化剂的条件包括： 0.3 ‑0.9M过二硫酸钠， 流速0.01 ‑0.05ml/min； 1 ‑2M磷酸， 流速0.01 ‑ 0.05ml/min； 氧化反应温度为9 9.9℃。 4.根据权利要求1所述一种检测阿卡地新兴奋剂的方法， 其特征在于， 步骤(2)中， 以含 有金属离子的水溶液为催化剂， 金属离子的浓度为500ppm， 所述 金属离子选自Ag+、 Fe2+、 Fe3+ 中的一种或几种， 催化剂加入到流动相由流动相带入反应体系； 优选地， 以AgNO3水溶液为 催化剂， AgNO3水溶液中AgNO3浓度为500ppm。 5.根据权利要求4所述一种检测阿卡地新兴奋剂的方法， 其特征在于， 步骤(2)中， 加入 了催化剂的流动相包括： 0.01 ‑1％硫酸水溶液A、 含0.1％硫酸和 500ppm AgNO3水溶液B； 加 入了催化剂的流动相流速0.1 ‑0.4ml/min； 反应程序包括： 起始100％A， 保持至38min,之后 在2min内达到50％A+50％B,在40min  50％A+50％B， 保持至50min,之后在2min内达到100％ A,保持至 60min结束。 6.根据权利要求1 ‑5任一项所述一种检测阿卡地新兴奋剂的方法， 其特征在于， 步骤 (1)中， 采用Oasis  HLB小柱对样本进行固相微萃取。 7.根据权利要求6所述一种检测阿卡地新兴奋剂的方法， 其特征在于， 采用Oasis  HLB 小柱对样本进行固相微萃取， 包括以下步骤： 乙醇处理Oasis  HLB小柱， 水冲洗小柱， 上样， 用乙醇洗脱， 合并洗脱液； 加热挥干溶剂， 残留物用超纯水复溶， 离心， 取上清液注入 “液相 色谱‑氧化接口 ‑同位素比值测定 仪”。 8.根据权利要求1 ‑5任一项所述一种检测阿卡地新兴奋剂的方法， 其特征在于， 步骤 (1)中， 所述样本为尿样。 9.根据权利要求1 ‑5任一项所述一种检测阿卡地新兴奋剂的方法， 其特征在于， 步骤 (3)中， 所述 参照物为孕烷 二醇。 10.根据权利要求9所述一种检测阿卡地新兴奋剂的方法， 其特征在于， 步骤(4)中， 如 果AICAR与参照物孕烷 二醇的δ13C值的差值大于4 ‰， 判定为阳性样本； 否则， 判定为阴性。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115267000 A 2一种检测阿卡 地新兴奋剂的方 法 技术领域 [0001]本发明属于医学检测技 术领域， 尤其涉及一种检测阿卡 地新兴奋剂的方法。 背景技术 [0002]阿卡地新(AICAR)， 别名； Acadesi ne； AICAR， 分子式： C9H14N4O5， 结构式如式1所示。 [0003] [0004]AICAR是人体内自身产生的内源性物质。 化学合成的AICAR可能被运动员作为药物 服用， 可以增加运动耐力。 自2009年， AICAR被确定为兴奋剂。 有报道测定尿中AICAR浓度。 但 是， 由于AICAR既可以是药物又可以是人体内可以自然产生的内源性物质， 测定其浓度并不 能判定尿中AICAR是来源于药物(即兴奋剂)还是体内自然产生的， 不能从根本上判定是否 使用了该兴奋剂。 此类既可以是自然产生的物质也可以是化学合成的药物的物质 被称为 “内源性兴奋剂 ”。 [0005]除AICAR外， 还有其它的 “内源性兴奋剂 ”， 如睾酮。 世界反兴奋剂机构(为国际兴奋 剂检测权威机构)对此类兴奋剂所颁布的检测方法采用稳定同位素分析方法。 其原理是： 化 学合成药物与内源性物质中的碳元素同位素比值(13C/12C， 以δ13C值表示， 单位： ‰)不同， 依 据此差异检测内源性兴奋剂。 判定标准 是： 被测定物质(为兴奋剂或其代谢物)的δ13C值与参 照物的δ13C差值大于4 ‰为阳性。 参照物是指某类物质其δ13C值不因服用兴奋剂而改变， 如 孕烷二醇。 δ13C值被定义 为： δ13C＝(R样 品‑R标 品)/R标 品， 其中R＝13C/12C。 [0006]目前， 测定兴奋剂碳元素同位素比值的仪器均采用 “气相色谱 ‑燃烧‑同位素比值 测定仪”。 在此测定中， 被测定物质是可挥发的。 但是AICAR难挥发(沸点726.3℃)， 不能直接 进行气相色谱分析。 有报道采用衍生化及 “气相色谱 ‑燃烧‑同位素比值测定仪 ”测定AICAR 的δ13C值。 该报道对样本进行了硅烷化， 同时指出硅烷化产生副反应产物会影响检测。 此方 法不能直接得到AICAR的δ13C值， 需要对衍生化产物进行δ13C值校正， 增加了数据误差来源。 由于已报道的方法存在诸多问题， 在兴奋剂检测领域没有得到广泛认可。 [0007]由于测定AICAR的碳元素同位素比值难度很大， 自2009年禁用至今， 在 世界反兴奋 剂机构所颁布的检测方法中， 没有检测AICAR的方法。 因此， 急需建立新方法以解决测定 AICAR的碳元 素同位素比值的问题。说　明　书 1/7 页 3 CN 115267000 A 3