(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211049764.0 (22)申请日 2022.08.30 (71)申请人 南开大学 地址 300350 天津市津南区同砚路38号 (72)发明人 黄津辉　潘蕾　陈军辉　 (74)专利代理 机构 天津创智睿诚知识产权代理 有限公司 12 251 专利代理师 王海滨 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) G01N 30/06(2006.01) G01N 30/72(2006.01) G01N 30/86(2006.01) G01N 30/34(2006.01) G01N 30/20(2006.01) (54)发明名称 一种水体中麻痹性贝类毒素的检测方法 (57)摘要 本发明公开了一种水体中麻痹性贝类毒素 的检测方法， 首先对水样进行初次固相萃取得到 的待检测的洗脱液， 然后采用固相萃取结合亲水 相互作用色谱串联质 谱仪检测系统对得到的待 检测洗脱液进行检测， 检测时， 采用ZIC ‑HILIC保 护柱用作所述SPE柱， 采用HILIC ‑Z色谱柱用作所 述分析柱， 首先通过上样泵将待分析的洗脱液加 载到SPE柱上， 之后将SPE柱捕集的目标化合物以 反冲洗模式洗脱到分析柱上， 进行色谱分离， 再 对分析柱进行梯度洗脱使目标物得以分离， 进入 质谱仪检测。 本发明通过固相萃取结合亲水相互 作用色谱串联质 谱技术实现了能够一次性同步 检测出环境水体中13种麻痹性贝类毒素。 权利要求书2页 说明书12页 附图1页 CN 115469027 A 2022.12.13 CN 115469027 A 1.一种水体中麻痹性贝类毒素的检测方法， 包括以下步骤： 步骤一： 对 采集的水样进行 过滤预处理； 步骤二： 对步骤一获得的水样进行初次固相萃取， 得到的待检测的洗脱液； 步骤三： 采用检测系统对步骤二得到的待检测洗脱液进行检测； 所述检测系统包括上样泵、 进样器、 SPE柱、 六通阀、 分析泵、 分析柱和质谱仪， 上样泵的 进口端与流动相A和流动相B连通， 采用ZIC ‑HILIC保护柱用作所述SPE柱， 采用HILIC ‑Z色谱 柱用作所述分析柱； 所述上样泵的出 口端与进样器的进口连接， 进样器的出 口连接六通阀 的第四接口， 分析泵的进口端与流动相A和流动相B连通， 分析泵的出口端与六通阀的第一 接口连接， 六通阀的第二接口连接 分析柱的一端， 分析柱的另一端连接质谱仪， 六通阀的第 三接口连接SPE柱的一端， 六通阀的第六接口连接SPE柱的另一端， 六通阀的第五接口作为 废液出口； 所述 流动相A是 水， 流动相B是乙腈水 溶液； 首先， 将六通阀设置为加载位置P1， 此位置下， 六通阀的第四接口和第三接口导通， 第 五接口和第六接口导通， 使上样泵、 进样 器、 六通阀的第四接口、 六通阀的第三接口、 SP E柱、 六通阀的第六接口、 六通阀的第五接口依次形成通路， 向进样器中注入分析的洗脱 液， 以流 动相B作为样品加载流动相， 通过 上样泵将待分析的洗脱液加载到S PE柱上； 之后将六通阀切换到洗脱位置P2， 此位置下， 六通阀的第四接口和第五接口导通， 六通 阀的第一接口和第六接口导通， 第二接口和第三接口导通， 使分析泵、 六通阀的第一接口、 六通阀的第六接口、 SPE柱、 六通阀的第三接口、 六通阀的第二接口、 分析柱、 质谱仪依次形 成通路， 分析泵将SPE柱捕集的目标化合物以反冲洗模式洗脱到分析柱上， 进行色谱分离； 与此同时， 利用六通阀的第四接口和 第五接口导通， 上样泵提高流速冲洗整个进样 器， 去除 前一次进样产生的样品残留； 之后将六通阀切换回P1位置， 对SPE柱进行等度洗脱进一步去除样品残留， 对分析柱进 行梯度洗脱 使目标物得以分离， 进入质谱仪检测。 2.根据权利要求1所述的水体中麻痹性贝类毒素的检测方法， 其特征在于： 步骤一中， 采用0.45 μm的玻璃纤维膜进行现场过 滤， 去除悬浮颗粒物和浮游生物。 3.根据权利要求1所述的水体中麻痹性贝类毒素的检测方法， 其特征在于： 步骤二中， 采用多孔石墨化炭固相萃取柱对步骤一获得的水样进行固相萃取。 4.根据权利要求3所述的水体中麻痹性贝类毒素的检测方法， 其特征在于： 步骤二中， 包括以下步骤： 2.1， 依次用二氯甲烷、 甲醇和水对多孔石墨化炭固相萃取柱进行活化与平衡处 理； 2.2， 将80mL的水样加载到多孔石墨化炭固相萃取柱上， 以使水样中的PST留在多孔石 墨化炭固相萃取柱上； 2.3， 加载结束后， 用水淋洗多孔石墨化炭固相萃取柱以去除盐分与杂质； 然后用含甲 酸的乙腈溶 液对多孔石墨化炭固相萃取柱进行洗脱， 得到 洗脱液； 2.4， 向收集到的洗脱液中加入甲酸铵溶液， 将洗脱液中的甲酸铵浓度调节为2mmol/L， 再经过滤器过滤后， 得到待检测的洗脱液。 5.根据权利要求1所述的水体中麻痹性贝类毒素的检测方法， 其特征在于： 步骤二中， 如果待检测的水样为淡水， 向淡水中添加一定量的NaCl， 使待检测水样发生盐析效应以增 强PST在萃取柱上的富 集。权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115469027 A 26.根据权利要求4所述的水体中麻痹性贝类毒素的检测方法， 其特征在于： 步骤二中， 如果待检测的水样为淡水， 向80mL的淡水 水样中添加3％(w/v)NaCl。 7.根据权利要求1所述的水体中麻痹性贝类毒素的检测方法， 其特征在于： 步骤三中， 所述流动相B是90％乙腈水 溶液， 流动相A和流动相B二 者均含2m mol/L甲酸铵， 0.0 3％甲酸。 8.根据权利要求1所述的水体中麻痹性贝类毒素的检测方法， 其特征在于： 步骤三中， 以100％的流动相B作为样品加载流动相， 通过 上样泵将待分析的洗脱液加载到S PE柱上。 9.根据权利要求1所述的水体 中麻痹性贝类毒素的检测方法， 其特征在于： 以90％的流 动相B和10％的流动相A将S PE柱捕集的目标化 合物以反冲洗模式洗脱到分析柱上。 10.根据权利要求1所述的水体中麻痹性贝类毒素的检测方法， 其特征在于： 步骤三中， 质谱检测条件为： 采用正负离子同时扫描， 在多反应监控模式下对目标物进行定性定量分 析； 一级、 二级质谱分辨率分别采用Wide和Unit模式； 喷射流电喷雾电离源的优化电离参数 如下： 干燥气温度， 300℃； 鞘气温度， 320℃； 干燥气流量， 8L/min； 鞘气流速， 11L/min； 雾化 器压力， 20psi； 正负模式下毛细管电压： 3 500V。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115469027 A 3