(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210880217.0 (22)申请日 2022.07.25 (71)申请人 山东普洛汉兴医药有限公司 地址 261041 山 东省潍坊市昌邑市滨 海(下 营)经济开发区汉兴 路9号 申请人 普洛药业股份有限公司 (72)发明人 李明明　武强　吴言琴　姜磊　 (74)专利代理 机构 杭州知闲专利代理事务所 (特殊普通 合伙) 33315 专利代理师 张勋斌 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) (54)发明名称 一种测定DL-对氯苯丝氨酸乙酯 含量的HPLC 方法 (57)摘要 本发明公开一种测定DL ‑对氯苯丝氨 酸乙酯 含量的HPLC方法。 该方法是将DL ‑对氯苯丝氨酸 乙酯用稀酸溶液配制成溶液， 采用一种化学键合 固定相色谱柱， 以缓冲盐加离子对试剂， 用酸调 pH至0.8‑12为缓冲盐溶液， 缓冲盐加离子对试剂 溶液与有机改性剂以适当比例进行梯度洗脱， 然 后在适当的检测波长、 流速和柱温下检测， 再根 据谱图计算样品含量。 采用本发明方法可使DL ‑ 对氯苯丝氨酸乙酯、 对氯苯丝氨酸、 对氯苯甲醛 得到较好的分离， 准确测出DL ‑对氯苯丝氨酸乙 酯的含量， 方法简单、 可靠、 迅速、 灵 敏度高、 重现 性和专属性好， 为DL ‑对氯苯丝氨酸乙酯质量标 准的制定建立基础。 权利要求书2页 说明书12页 附图3页 CN 115266977 A 2022.11.01 CN 115266977 A 1.一种测定DL ‑对氯苯丝氨酸乙酯含量的HPLC方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： (1)将DL‑对氯苯丝氨酸乙酯待测样品进行稀释， 得到供 试液； (2)采用高效液相色谱 对步骤(1)的供 试液进行分析， 得到液相色谱数据； 所述的高效液相色谱所用的流动相为 流动相A与流动相B的混合溶 液； 所述的流动相A为缓冲盐与离 子对试剂溶 液； 所述的流动相B为有机相； 所述的缓冲盐与离 子对试剂溶 液配制方法如下： 将无机盐、 离 子对试剂与超纯 水混合， 然后用酸调pH 至2.0～6.0得到； (3)根据步骤(2)得到的液相色谱数据计算待测样品中DL ‑对氯苯丝氨酸乙酯的含量。 2.根据权利要求1所述的测定DL ‑对氯苯丝氨酸乙酯含量的HPLC方法， 其特征在于， 步 骤(1)中， 用0.8～1.2mo L/L的稀盐酸或超纯 水稀释待测样品。 3.根据权利要求1所述的测定DL ‑对氯苯丝氨酸乙酯含量的HPLC方法， 其特征在于， 步 骤(2)中分析 所用色谱柱为 化学键合固定相色谱柱： Ultimate  XB‑C18； 检测器为可变波长检测器， 检测波长为2 20～230nm； 流动相流速为0.8～1.5mL/mi n。 4.根据权利要求1所述的测定DL ‑对氯苯丝氨酸乙酯含量的HPLC方法， 其特征在于， 步 骤(2)中， 所述的无机盐选自钠、 钾、 铵的醋酸盐、 磷酸盐、 磷酸二氢盐、 磷酸一氢盐、 硫酸氢 盐或硫酸盐， 离子对 试剂选自四丁基氢氧化铵、 庚烷磺酸钠、 四丁基溴化铵或十二烷基磺酸 钠； 所述的有机相选自乙腈、 甲醇、 四氢呋喃、 乙醇、 异丙醇、 乙二醇、 丙酮中的一种或多种。 5.根据权利要求4所述的测定DL ‑对氯苯丝氨酸乙酯含量的HPLC方法， 其特征在于， 所 述的无机盐选自磷酸二氢钾， 离子对试剂选 自四丁基氢氧化铵， 所述的有机相 选自甲醇或 乙腈。 6.根据权利要求5所述的测定DL ‑对氯苯丝氨酸乙酯含量的HPLC方法， 其特征在于， 所 述的缓冲盐与离子对试剂溶液为10 ‑100mM磷酸二氢钾与0.5 ‑1.5mM四丁基氢氧化铵水溶液 混合后， 再用磷酸调pH值至1.8～ 2.2得到； 所述的有机相为乙腈。 7.根据权利要求6所述的测定DL ‑对氯苯丝氨酸乙酯含量的HPLC方法， 其特征在于， 步 骤(2)中， 先分别配制浓度不同的流动相A和流动相B， 然后采用梯度洗脱的方法进行分析。 8.根据权利要求7所述的测定DL ‑对氯苯丝氨酸乙酯含量的HPLC方法， 步骤(2)中， 梯度 洗脱的流 程如下： (1)0～7mi n， 流动相A与流动相B的体积比为90～85： 10～15； (2)7～12mi n， 流动相A与流动相B的体积比为80～6 0： 40～60； (3)12～17min， 流动相A与流动相B的体积比为5 0～40： 60～50； (4)17.1～ 27min， 流动相A与流动相B的体积比为85～ 90： 10～15 。 9.根据权利 要求7所述的测定DL ‑对氯苯丝氨酸乙酯含量的HPLC方法， 梯度洗脱的流程 如下： 时间(min) 0 7 12 17 17.1 27 流动相A 90 80 40 40 90 90 流动相B 10 20 60 60 10 10权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115266977 A 210.根据权利 要求1所述的测定DL ‑对氯苯丝氨酸乙酯含量的HPLC方法， 其特征在于， 步 骤(3)中， 所述的DL ‑对氯苯丝氨酸乙酯含量 通过面积归一法计算得到 。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115266977 A 3