(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211052059.6 (22)申请日 2022.08.31 (71)申请人 修正药业集团股份有限公司 地址 134000 吉林省通 化市修正路36号 申请人 吉林修正药业新药开发有限公司 (72)发明人 展月　赵俞　鄢必新　郭文英　 王鑫　祁树贤　李敏　伦宗慧　 秦思莲　 (74)专利代理 机构 北京集佳知识产权代理有限 公司 11227 专利代理师 王洋 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) G01N 30/06(2006.01) G01N 30/34(2006.01)G01N 30/74(2006.01) G01N 30/86(2006.01) (54)发明名称 一种清淋颗粒HPLC特 征图谱构建方法 (57)摘要 本发明提供了一种清淋颗粒HPLC特征图谱 构建方法， 包括： A)将清淋颗 粒采用溶剂溶解， 得 到待测液； B)将待测液采用高效液相色谱法测 定， 得到清淋颗粒的HPLC特征图谱； 所述高效液 相色谱法色谱条件为： 色谱柱为C18柱； 流动相A 为乙腈， 流动相B为0.2％磷 酸， 梯度洗脱。 本发明 采用高效液相色谱法， 选用乙腈 ‑0.2％磷酸为流 动相进行梯度洗脱， 以栀子苷、 京尼平苷为参照 物， 建立了清淋颗粒HPLC特征图谱。 建立了10批 清淋颗粒HPLC特征图谱， 确定了9 个特征峰， 建立 了清淋颗粒标准特征图谱。 本发明具有方便、 快 捷、 稳定、 精密度高、 重现性好等特点， 可有效控 制清淋颗粒质量。 权利要求书1页 说明书12页 附图5页 CN 115469028 A 2022.12.13 CN 115469028 A 1.一种清淋颗粒HPLC特 征图谱构建方法， 包括： A)将清淋颗粒采用溶剂溶解， 得到待测液； B)将待测液采用高效液相色谱法测定， 得到清淋颗粒的HPLC特 征图谱； 所述高效液相色谱法色谱条件为： 色谱柱为C18柱； 流动相A为乙腈， 流动相 B为0.2％磷 酸， 梯度洗脱。 2.根据权利要求1所述的方法， 其特征在于， 还包括制备参照物溶液： 分别取栀子苷、 京 尼平苷， 采用甲醇溶解， 得到参照物溶 液； 将所述参照物溶液采用高效液相色谱法测定， 得到参照物的色谱图； 并根据参照物的 色谱图对清淋颗粒HPLC特 征图谱的成分进行定性测定 。 3.根据权利要求1所述的方法， 其特 征在于， 所述梯度洗脱具体为： 0～10min， A相： 5％、 B相： 95％； 10～15mi n， A相： 5％～10％、 B相： 95％～ 90％； 15～45mi n， A相： 10％～ 20％、 B相： 90％～80％； 45～50min， A相： 20％～ 25％、 B相： 80％～75％； 50～60min， A相： 25％～3 0％、 B相： 75％～70％。 4.根据权利要求3所述的方法， 其特征在于， 所述色谱柱为Agilent  ZORBAX SB‑C18， 规 格为5 μm， 4.6 ×250mm； 柱温30℃～40℃。 5.根据权利要求4所述的方法， 其特征在于， 所述流动相流速为0.9～1.1mL/min； 检测 波长为23 5～245nm； 进样量 为10～20 μL； 理论塔板数按芍药苷峰计算应不低于 3000。 6.根据权利要求5所述的方法， 其特征在于， 所述流动相流速为1.0mL/min； 检测波长为 240nm； 进样量 为10 μL； 所述参照物溶 液中， 栀子苷的浓度为10 0 μg/mL； 京尼平 苷的浓度为10 0 μg/mL。 7.根据权利要求1所述的方法， 其特征在于， 采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统对 清淋颗粒HPLC特征图谱的相 似度进行评价， 得到由9个特征峰构成的清淋颗粒HPLC标准特 征图谱， 其中第3号峰为栀子苷峰， 第8号峰为京尼平苷峰； 对9个特征峰进行归属： 1、 2、 4号 特征峰归属为炙甘 草药材， 3、 5号特征峰归属为栀 子药材， 6、 7号特征峰归属为大黄药材， 8、 9号特征峰归属为盐车 前子药材。 8.根据权利要求7所述的方法， 其特征在于， 在所述标准特征图谱中， 以栀子苷峰为参 照峰S峰， 计算各特征峰与S峰的相对保留时间， 所述相对保留时间在规定值的 ±10％之内， 所述规定值分别为： 0.70 ‑峰1、 0.91‑峰2、 1.00 ‑峰3、 1.60 ‑峰4、 1.67 ‑峰5、 1.83 ‑峰6、 2.27 ‑ 峰7、 2.76 ‑峰8、 2.89 ‑峰9。 9.根据权利要求1所述的方法， 其特征在于， 步骤A)所述溶剂为甲醇； 所述溶解为超声 提取； 所述超声功率 为400W， 40kHz； 所述超声时间为20～40mi n。 10.根据权利要求1所述的方法， 其特征在于， 步骤A)所述清淋颗粒的质量g和溶剂的体 积mL的比为(1～ 2)： (20～5 0)。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115469028 A 2一种清淋颗粒HPL C特征图谱构建 方法 技术领域 [0001]本发明涉及分析检测技术领域， 尤其是涉及一种清淋颗粒HPLC特征图谱构建方 法。 背景技术 [0002]清淋颗粒由瞿麦、 萹蓄、 木通、 盐车前子、 滑石、 栀子、 大黄、 炙甘草八味药材组成。 标准收载于2020年版 《中国药典》 。 本品质量标准中包括颗粒的性状； 大黄、 栀子的薄层鉴 别； 栀子苷的含量测定。 其质量标准只控制一味药的定性定量检测方法， 难以整体全面的控 制产品质量。 [0003]因此， 有必要建立一种清淋颗粒HPLC特征图谱构建方法， 为有效控制和较全面评 价清淋颗粒的质量 提供依据。 发明内容 [0004]有鉴于此， 本发明要解决的技术问题在于提供一种清淋颗粒HPLC特征图谱构建方 法， 本发明构建的清淋颗粒HPLC特征图谱方法稳定， 可靠， 可以对清淋颗粒的质量进行控 制。 [0005]本发明提供了一种清淋颗粒HPLC特 征图谱构建方法， 包括： [0006]A)将清淋颗粒采用溶剂溶解， 得到待测液； [0007]B)将待测液采用高效液相色谱法测定， 得到清淋颗粒的HPLC特 征图谱； [0008]所述高效液相色谱法色谱条件为： 色谱柱为C18柱； 流动相A为乙腈， 流动相B为 0.2％磷酸， 梯度洗脱。 [0009]优选的， 还包括制备参照 物溶液： 分别取栀子苷、 京尼平苷， 采用甲醇溶解， 得到参 照物溶液； [0010]将所述参照物溶液采用高效液相色谱法测定， 得到参照物的色谱图； 并根据参照 物的色谱图对清淋颗粒HPLC特 征图谱的成分进行定性测定 。 [0011]优选的， 所述梯度洗脱具体为： [0012]0～10min， A相： 5％、 B相： 95％； [0013]10～15mi n， A相： 5％～10％、 B相： 95％～ 90％； [0014]15～45mi n， A相： 10％～ 20％、 B相： 90％～80％； [0015]45～50min， A相： 20％～ 25％、 B相： 80％～75％； [0016]50～60min， A相： 25％～3 0％、 B相： 75％～70％。 [0017]优选的， 所述色谱柱为Agilent  ZORBAX SB ‑C18， 规格为5 μm， 4.6 ×250mm； 柱温30 ℃～40℃。 [0018]优选的， 所述流动相流速为0.9～1.1mL/min； 检测波长为235～2 45nm； 进样量为 10 ～20 μL； 理论塔板数按芍药苷峰计算应不低于 3000。 [0019]优选的， 所述 流动相流速为1.0mL/mi n； 检测波长为240nm； 进样量 为10 μL；说　明　书 1/12 页 3 CN 115469028 A 3