(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210874047.5 (22)申请日 2022.07.21 (71)申请人 广东万年青制药股份有限公司 地址 515064 广东省汕头市金园工业城潮 阳路16片区08号 (72)发明人 翟德设　刘卫　钟嘉华　张英华　 李以诺　陈人苹　董晓红　 (74)专利代理 机构 北京三聚阳光知识产权代理 有限公司 1 1250 专利代理师 周卫赛 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) G01N 30/06(2006.01) G01N 30/30(2006.01) G01N 30/32(2006.01)G01N 30/34(2006.01) G01N 30/74(2006.01) G01N 30/86(2006.01) (54)发明名称 一种滋阴凉血的中药组合物的含量测定方 法 (57)摘要 本发明属于中药质量检测领域， 具体提供了 一种滋阴凉血的中药组合物的含量测定方法， 所 述的含量测定方法选自如下A ‑C中的至少一项： A、 芍药苷的含量测定； B、 黄芩苷的含量测定； C、 盐酸小檗碱的含量测定； 具体见说明书， 三个含 量测试方法均具有检测时间短、 分离度高、 专属 性强、 线性 关系满足要求， 以及精密度、 准确度和 稳定性高等的优势， 不仅能够快速、 简便的获知 该产品的质量情况的， 更可以有效的对产品的质 量性能进行监控， 适用于该中药 组合物不同的制 剂类型的质量控制。 权利要求书2页 说明书21页 附图10页 CN 115420816 A 2022.12.02 CN 115420816 A 1.一种中药组合物及其制剂的含量测定方法， 其特征在于： 所述中药组合物包括生地 黄、 熟地黄、 芍药、 山药、 川续 断、 黄芩、 黄柏和生甘草， 所述的含量测定方法选自如下A ‑C中 的至少一项： A、 芍药苷的含量测定 (1)供试品溶液和芍药苷对照品溶 液的制备； (2)采用高效液相色谱法检测供试品溶液和芍药苷对照品溶液， 填充剂采用十八烷基 硅烷键合硅胶， 以乙腈和含磷酸的水溶液为流动相， 按照如下程序进 行梯度洗脱： 0 →35min →50min→65min， 流动相中乙腈的体积百分数为13％ →13％→60％→13％； B、 黄芩苷的含量测定 (1)供试品溶液和黄芩苷对照品溶 液的制备； (2)采用高效液相色谱法检测供试品溶液和黄芩苷对照品溶液， 填充剂采用十八烷基 硅烷键合硅胶， 以体积比为 45:55‑50:50的甲醇和含 磷酸的水 溶液为流动相； C、 盐酸小檗碱的含量测定 (1)供试品溶液和盐酸小檗碱对照品溶 液的制备 (2)采用高效液相色谱法检测供试品溶液和盐酸小檗碱对照品溶液， 填充剂采用十八 烷基硅烷键合硅胶， 以体积比为40 ‑50:50‑60的乙腈与水相为流动相， 水相为含十二烷基磺 酸钠和磷酸的水 溶液。 2.根据权利要求1所述的含量测定方法， 其特征在于， 在芍药苷的含量测定、 黄芩苷的 含量测定以及盐酸小檗碱的含量测定中， 步骤(1)包括： 1)取供试品， 加溶剂提取， 得到提取 液； 2)将提取 液固液分离， 取 液体， 即为供 试品溶液。 3.根据权利 要求2所述的含量测定方法， 其特征在在于， 步骤(1)还满足如下A ‑D中的任 意一项或者多 项： A、 步骤1)中， 溶剂选自甲醇、 乙醇、 甲醇水 溶液或者乙醇水 溶液； B、 步骤1)供 试品的质量与溶剂的体积之比为0.1 ‑0.3:20‑50； C、 步骤1)中， 提取 方式为回流 提取或者超声提取， 提取时间为15mi n‑1h； D、 步骤2)中， 所述固液分离为离心或者过 滤。 4.根据权利要求1 ‑3中任一项所述的含量测定方法， 其特征在于， A、 芍药苷的含量测定 中， 步骤(2)高效液相色谱法的色谱条件还包括： 检测波长为220 ‑240nm， 流速为0.8 ‑1.2ml/ min， 柱温25 ‑40℃， 进样量为2 ‑20 μl； 和/或， 所述含磷酸的水溶液中磷酸的体积百分浓度为 0.05‑0.2％； 和/或， 色谱柱 选自Agilene  5TC‑C18 5 μm， 250×1.6mm色谱柱、 Diamon sil C18  5 μm， 250×1.6mm色谱柱或者Agela  C18 5 μm， 250×1.6mm色谱柱。 5.根据权利要求1 ‑3中任一项所述的含量测定方法， 其特征在于， B、 黄芩苷的含量测定 中， 步骤(2)高效液相色谱法的色谱条件还包括： 检测波长为270 ‑290nm， 流速为0.8 ‑1.2ml/ min， 柱温25 ‑40℃， 进样量为2 ‑20 μl； 和/或， 所述含磷酸的水溶液中磷酸的体积百分浓度为 0.05‑0.2％； 和/或， 色谱柱 选自Agilene  5TC‑C18 5 μm， 250×1.6mm色谱柱、 Diamon sil C18  5 μm， 250×1.6mm色谱柱或者Agela  C18 5 μm， 250×1.6mm色谱柱。 6.根据权利要求1 ‑3中任一项所述的含量测定方法， 其特征在于， C、 盐酸小檗碱的含量 测定中， 步骤(2)高效液相色谱法的色谱条件还包括： 检测波长为260 ‑270nm， 流速为0.8 ‑权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115420816 A 21.2ml/min， 柱温25 ‑40℃， 进样量为2 ‑20μl； 和/或， 所述水相中磷酸的体积百分浓度为 0.05‑0.3％； 和/或， 所述水相中十二烷基磺酸钠的质量体积百分浓度为0.05 ‑0.2％； 和/ 或， 色谱柱选自Agilene  5TC‑C18 5μm， 250 ×1.6mm色谱柱、 Diamonsil  C18 5μm， 250 × 1.6mm色谱柱或者Agela  C18 5 μm， 250×1.6mm色谱柱。 7.根据权利要求1 ‑3中任一项所述的含量测定方法， 其特征在于， C、 盐酸小檗碱的含量 测定中， 柱温为25 ‑30℃， 和/或， C、 盐酸小檗 碱的含量测定中， 流动相采用体积比为45:55的 乙腈与含0.05 ‑0.2％十二烷基磺酸钠和0.05 ‑0.3％的磷酸的水溶液； 和/或， B、 黄芩苷的含 量测定中， 柱温为25 ‑30℃， 和/或， B、 黄芩苷的含量测定中， 供试品溶液的提取溶剂选自 30％‑80％的乙醇水溶液； 和/或， A、 芍药苷的含量测定中， 供试品溶液的提取溶剂选自 30％‑80％的乙醇水溶液； 和/或， A、 芍药苷的含量测定中， 色谱柱为Agilene5TC ‑C18 5 μm， 250×1.6mm色谱柱。 8.根据权利要求1 ‑3中任一项所述的含量测定方法， 其特征在于， 在芍药苷的含量测 定、 黄芩苷的含量测定以及盐酸小檗碱的含量测定中步骤(1)包括： 取供试品0.1 ‑0.3g， 加 入30％‑80％的乙醇水溶液10 ‑40mL， 超声处理15min ‑1h， 加入30％ ‑80％的乙醇水溶液定容 至25‑50mL， 滤过， 取续滤 液， 即得。 9.根据权利要求1 ‑3中任一项所述的含量测定方法， 其特征在于， 黄芩苷对照品溶液的 制备包括， 取黄芩苷对照品， 加溶剂制成每1ml含黄芩苷10 ‑140 μg的溶液； 和/或， 芍药苷对 照品溶液的制备包括， 取芍药苷对照品， 加溶剂制成每1ml含芍药苷8 ‑120 μg的溶液； 和/或， 盐酸小檗 碱对照品溶液的制备包括， 取盐酸小檗碱对照品， 加溶剂制成每1ml含盐酸小檗碱 5‑80 μg的溶 液。 10.一种中药组合物及其制剂的质量检测方法， 其特征在于， 包括按照权利要求1 ‑9中 任一所述的含量测定方法测定待测样品中芍药苷和/或黄芩苷和/或盐酸小檗碱的含量的 步骤； 所述中药组合物包括 生地黄、 熟地黄、 芍药、 山药、 川续断、 黄 芩、 黄柏和生甘草。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115420816 A 3