(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211040264.0 (22)申请日 2022.08.29 (66)本国优先权数据 202210423776.9 202 2.04.21 CN (71)申请人 南京市产品质量 监督检验院(南京 市质量发展与先进技 术应用研究 院) 地址 210019 江苏省南京市 建邺区嘉陵江 东街3号质监大厦 (72)发明人 吴肖肖　蒋迪尧　梅秀明　张驰　 徐婧婧　纪晗旭　李雨枫　王灿　 查莉　 (74)专利代理 机构 南京经纬专利商标代理有限 公司 32200 专利代理师 黄欣(51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) G01N 30/08(2006.01) G01N 30/72(2006.01) (54)发明名称 一种牛奶中糖皮质激素的检测方法 (57)摘要 本发明公开了一种牛奶中糖皮质激素的检 测方法， 属于分析检测技术领域。 该方法先利用 聚苯乙烯纳米纤维富集糖皮质激素， 然后采用超 高效液相色谱 ‑串联质谱检测， 可实现牛奶中的 25种糖皮质激素的检测。 本发明通过聚苯乙烯纳 米纤维萃取柱可高效、 快速吸附样品中糖皮质激 素， 达到去除干扰、 浓缩富集的作用， 方法有机溶 剂用量少、 减少了分析时间。 权利要求书1页 说明书10页 附图2页 CN 115184513 A 2022.10.14 CN 115184513 A 1.一种牛奶中糖皮质激素的检测方法， 其特 征在于： 包括以下步骤： 步骤1， 将牛奶用有机溶剂涡旋萃取， 离心取 上清液， 氮吹干后复溶， 得到待富 集溶液； 步骤2， 采用以聚苯乙烯纳米纤维为填料的固相萃取柱处理待富集溶液， 得到待测溶 液； 步骤3， 将待测溶液用超高效液相色谱 ‑三重四极杆质谱进行检测， 采用外标法定量， 即 得糖皮质激素残留量； 所述糖皮质激素为泼尼松龙、 泼尼松、 氢化可的松、 可的松、 甲基泼尼松龙、 倍他米松、 氟米松、 地塞米松、 倍氯米松、 曲安奈德、 曲安西龙双醋酸酯、 泼尼松龙醋酸酯、 氟氢缩松、 氢 化可的松醋酸酯、 氟氢可的松醋酸酯、 氟米龙、 泼尼松醋酸酯、 地夫可特、 可的松醋酸酯、 甲 基泼尼松龙醋酸酯、 倍他米松醋酸酯、 布地奈德、 地塞米松醋酸酯、 氢化可的松丁酸酯或氟 米龙醋酸酯中一种或多种的组合； 所述聚苯乙烯纳米纤维是将聚苯乙烯用静电纺丝技 术制备成聚苯乙烯纳米纤维。 2.根据权利要求1所述的检测方法， 其特征在于： 步骤1的具体过程为： 牛奶经乙腈涡旋 提取5 min后， 以7500  rpm转速离心15  min， 取上清液， 氮气吹干， 用5%  v/v乙腈水溶液复溶 为待富集溶液。 3.根据权利要求1所述的检测方法， 其特征在于： 所述聚苯乙烯纳米纤维是将聚苯乙烯 溶解在四氢呋喃和N,N ‑二甲基甲酰胺的混合溶剂中， 形成纺丝液， 利用静电纺丝技术将纺 丝液制成聚苯乙烯纳米纤维。 4.根据权利要求1所述的检测方法， 其特征在于： 步骤2中， 以聚苯乙烯纳米纤维为填料 的固相萃取柱在使用前需要用甲醇和水进行活化。 5.根据权利要求1所述的检测方法， 其特征在于： 步骤3中， 超高效液相色谱 ‑三重四极 杆质谱的条件如下： 色谱柱： C18色谱柱， 规格为1.7  μm、 2.1×100 mm； 流动相： A为含0.1%甲酸的水 溶液， B为乙腈； 梯度程序： 0~4.5 min， 20% B； 4.5 ~7 min， 20%~45% B； 7~9 min， 45%~52% B； 9~10 min， 52%~55% B； 10~12 min， 55%~65% B； 12~14 min， 65%~90% B； 14~15 min， 90% B； 后运行： 2   min； 进样量： 2  µL； 流速： 0.3  mL/min； 柱温： 40 ºC； 离子化模式： 双喷射 流电喷雾 离子源， 正离 子模式； 质谱扫描方式： 多反应监测； 雾化器压力： 310  kPa； 气体温度： 3 50ºC； 气体流速： 12  L/min； 鞘气N2温度： 250ºC； 鞘气N2流速： 11 L/min； 毛细管电压： 正离 子模式3500 V。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115184513 A 2一种牛奶中糖皮质激素的检测方 法 技术领域 [0001]本发明属于分析检测技术领域， 具体涉及一种利用聚苯乙烯纳米纤维固相萃取 ‑ 超高效液相色谱质谱检测牛奶中糖皮质激素的方法。 背景技术 [0002]糖皮质激素(Glucocorticoids,GCs)为类固醇激素， 是由肾上腺皮质分泌的一类 甾体激素， 具有抗炎、 抗过敏、 抗毒、 抗休克等药理作用， 同时能提高饲料的转化率、 促进畜 禽的生长， 因而在畜牧业生产中被广泛使用。 然而， 过量的不合理使用， 会导致糖皮质激素 类药物在动物体内残留， 进而危害 人体健康， 引起肥胖、 高血压等疾病。 因此， 各国对动物源 性食品中糖 皮质激素的最大残留量进行了规定。 如GB  31650‑2019 《食品中兽药最大残留限 量》 和欧盟 法规(EU)No  37/2010均规定牛奶中倍他米松和地塞米松的最大残留量为0.3 μg/ kg， 氢化可的松仅作外用， 未指定残留限量。 [0003]目前， 同时测定多种糖皮质激素的方法主要有液相色谱 ‑三重四极杆串联质谱法、 液相色谱 ‑四极杆/飞行时间质谱法、 气相色谱 ‑质谱法以及毛细管电泳法等。 超高效液相色 谱‑质谱法因具有高灵敏度和高选择性， 是痕量分析的常用方法， 但其样品需要 净化来减少 基质干扰， 而传统的固相萃取 前处理方法比较耗时费力。 [0004]静电纺丝是一种在强电场作用下将聚合物溶液喷射拉伸得到直径为纳米级纤维 的纺丝技术。 静电纺丝纳米纤维具有直径小、 比表面积大、 孔隙率高、 易于修饰等特点， 基于 纳米纤维的固相萃 取技术是一种操作简单、 快速、 有机溶剂用量少的前处理方法。 本发明设 计采用纳米纤维 固相萃取技术对样品提取液中的糖皮质激素进行了富集与净化， 并基于超 高效液相色谱 ‑串联质谱， 建立了牛奶中泼尼松龙等25种糖皮质激素的检测方法。 发明内容 [0005]本发明的目的是提供一种利用聚苯乙烯纳米纤维固相萃取结合超高效液相色谱 质谱检测牛奶中糖皮质激素 的方法， 通过设计制备基于聚苯乙烯纳米纤维的固相萃取柱， 实现了牛奶中25种糖皮质激素的高效快速检测， 解决了有机溶剂用量大、 前处理耗时的问 题， 具有良好的应用前 景。 [0006]为了实现上述目的， 本发明采用以下技 术方案： [0007]一种牛奶中糖皮质激素的检测方法， 包括以下步骤： [0008]步骤1， 将牛奶用有机溶剂涡旋萃取， 离心取上清液， 氮吹干后复溶， 得到待富集溶 液； [0009]步骤2， 采用以聚苯乙烯纳米纤维为填料的固相萃取柱处理待富集溶液， 得到待测 溶液； [0010]步骤3， 将待测溶液用超高效液相色谱 ‑三重四极杆质谱进行检测， 采用外标法定 量， 即得糖皮质激素残留量； [0011]所述糖皮质激素为泼尼松龙、 泼尼松、 氢化可的松、 可的松、 甲基 泼尼松龙、 倍他米说　明　书 1/10 页 3 CN 115184513 A 3