(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210893848.6 (22)申请日 2022.07.27 (71)申请人 河南省奶牛生产性能测定中心 地址 450000 河南省郑州市金 水区杨金路8 号 申请人 河南省种牛遗传性能测定中心 　 河南省奶牛生产性能测定有限公司 (72)发明人 闫磊　张震　高娜　岳婷婷　潘磊　 吴一鸣　任小丽　冯光宝　闫跃飞　 侯玉芳　鲁晓娜　张亮　皇超英　 张志阳　刘长磊　李静茹　连真真　 卜秋月　刘欢　周峰　薛永康　 王向佩　谷淑华　贺倩倩　冯豆　 杨兰　刘小峰　李秋平　(74)专利代理 机构 郑州银河专利代理有限公司 41158 专利代理师 刘帅杰 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) G01N 30/06(2006.01) G01N 30/14(2006.01) G01N 30/72(2006.01) (54)发明名称 一种牛奶中黄曲霉素M1的检测方法 (57)摘要 本发明提供一种牛奶中黄曲霉素M1的检测 方法， 取待测牛奶放入离心机中离心， 取离心的 上清液过免疫亲和柱洗脱， 收集洗脱液加入丙三 醇甲醇溶液， 过氮气吹至近干， 然后加入初始流 动相定容， 复溶过滤膜后， 进超高效液相色谱 ‑串 联三重四级杆质 谱联用仪检测得到牛奶中黄曲 霉素M1的含量。 本发明提供的牛奶中黄曲霉素M1 的检测方法， 提高检测样品的回收率。 权利要求书1页 说明书4页 附图1页 CN 115326951 A 2022.11.11 CN 115326951 A 1.一种牛奶中黄曲霉素M1的检测方法， 其特征在于， 取待测牛奶放入离心机 中离心， 取 离心的上清液过免疫 亲和柱洗脱， 收集洗脱 液加入丙三醇甲醇溶液， 过氮气吹至近干， 然后 加入初始 流动相定容， 复溶过滤膜后， 进超高效液相色谱 ‑串联三重四级杆质谱联用仪检测 得到牛奶中黄曲霉素M1的含量。 2.根据权利要求1所述的牛奶中黄曲霉素M1的检测方法， 其特征在于， 所述丙三醇甲醇 溶液的浓度是10％。 3.根据权利要求1所述的牛奶中黄曲霉素M1的检测方法， 其特征在于， 所述待测牛奶放 入离心机中离心是： 将所述待测牛奶放入离心管中， 在所述离心管中加入甲醇， 涡旋震荡 3min后， 在4℃、 80 00r/min离心10mi n。 4.根据权利要求1～3任一项所述的牛奶中黄曲霉素M1的检测方法， 其特征在于， 所述 取离心的上清液过免疫亲和柱洗脱是： 将低温下 的免疫亲和柱恢复至室温， 用注射器下端 用力插穿亲和柱盖， 使所述注射器和所述免疫亲和柱连通； 加入用水稀释的所述离心的上 清液， 打开柱子下端盖子， 待样液滴完后， 往所述注射器筒内加入水， 待 水滴完后， 抽干所述 免疫亲和柱， 用甲醇洗脱所述免疫亲和柱。 5.根据权利要求4所述的牛奶中黄曲霉素M1的检测方法， 其特征在于， 所述初始流动相 是甲酸水和乙腈， 所述甲酸水和所述乙腈的体积比为9:1。 6.根据权利要求5所述的牛奶中黄曲霉素M1的检测方法， 其特征在于， 所述初始流动相 定容后： 涡旋 30s后复溶， 所述过 滤膜是过0.22 μm滤膜。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115326951 A 2一种牛奶中黄曲霉素M1的检测方 法 技术领域 [0001]本发明涉及食品和农产品领域， 尤其涉及一种牛奶中黄曲霉素M1的检测方法。 背景技术 [0002]黄曲霉毒素(AFT)是黄曲霉和寄生曲霉等某些菌株产生的双呋喃环类毒素， 该毒 素是一种强烈生物毒 素的化学物质， 被世界卫生组织癌症研究机构划分为 Ⅰ类致癌物， 广泛 存在于各种食物中。 玉米、 花生、 大米、 小麦等谷物及其副产品是黄曲霉毒素的主要来源。 AFM1属于黄曲霉毒素一类结构相似的化合物中的一种,哺乳动物摄入被AFB1污染的饲料和 食品后， 一部分AFB1转化成AFM1而存在于动物分泌的乳汁中， 黄曲霉毒素作为肝癌的三大 诱因之一， 也是胃癌、 肠癌等疾病的主要原因， 对人类的健康构成很大的威胁。 世界各国对 食品和饲料中的黄曲霉毒素都有严格的限量标准。 [0003]目前， 牛奶中黄曲霉毒素M1的检测方法是 《GB  5009.24‑2016食品安全国家 标准食 品中黄曲霉毒 素M族的测定》 ， 该方法中包含了液相色谱 ‑串联质谱联法、 液相色谱法和酶联 免疫吸附法三种方法， 该方法中的液相色谱 ‑串联质谱联法采用的是同位素内标法， 一方面 内标法操作比较麻烦， 标准溶液配置比较麻烦， 而且每个样品都 需要添加内标物， 操作起来 耗时， 而且同位素内标物比较贵， 大大增加了检测的成本； 另一方面该国标中在50℃条件下 用氮气吹至近干， 在实际操作过程中， 在样品比较多时， 氮吹时很容易因为观 察不到位而造 成样品被吹干， 大 大降低样品的回收率。 发明内容 [0004]有鉴于此， 本发明的目的是牛奶中黄曲霉素M1的检测方法， 提高检测样品的回收 率。 [0005]为了解决上述技术问题， 本发明提供一种牛奶中黄曲霉素M1的检测方法， 取待测 牛奶放入离心机中离心， 取离心的上清液过免疫亲和柱洗脱， 收集洗脱液加入丙三醇甲醇 溶液， 过氮气吹至近干， 然后加入初始 流动相定容， 复溶过滤膜后， 进超高效液相色谱 ‑串联 三重四级杆质谱联用仪检测得到牛奶中黄曲霉素M1的含量。 [0006]可选的， 所述丙三醇甲醇溶 液的浓度是10％。 [0007]可选的， 所述待测牛奶放入离心机中离心是： 将所述待测牛奶放入离心 管中， 在所 述离心管中加入甲醇， 涡旋震荡3mi n后， 在4℃、 80 00r/min离心10mi n。 [0008]可选的， 所述取离心的上清液过免疫亲和柱洗脱是： 将低温下的免疫亲和柱恢复 至室温， 用注射器下端用力插穿亲和柱盖， 使所述注射器和所述免疫 亲和柱连通； 加入用水 稀释的所述离心的上清液， 打开柱子下端盖子， 待样液滴完后， 往所述注射器筒内加入水， 待水滴完后， 抽干所述免疫亲和柱， 用甲醇洗脱所述免疫亲和柱。 [0009]可选的， 所述初始流动相 是甲酸水和乙腈， 所述甲酸水和所述乙腈的体积比为9: 1。 [0010]可选的， 所述 流动相定容后： 涡旋 30s后复溶， 所述过 滤膜是过0.22 μm滤膜。说　明　书 1/4 页 3 CN 115326951 A 3