(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210861770.X (22)申请日 2022.07.22 (71)申请人 扬州市食品药品检验检测中心 地址 225000 江苏省扬州市广陵区临江路 205号2幢 申请人 上海交通大 学 (72)发明人 胡云　刘源　 (74)专利代理 机构 南京苏科专利代理有限责任 公司 32102 专利代理师 董旭东 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) G01N 30/06(2006.01) G01N 30/30(2006.01) G01N 30/32(2006.01)G01N 30/34(2006.01) G01N 30/72(2006.01) G01N 30/86(2006.01) (54)发明名称 一种玉米淀粉餐盒食品模拟液中17种基因 毒性芳香胺迁移量的检测方法 (57)摘要 本发明公开了分析检测技术领域内的一种 玉米淀粉餐盒食品模拟液中17种基因毒性芳香 胺迁移量的检测方法， 其步骤： （1） 设定超高效液 相色谱‑串联质谱同时分析 17种基因毒性芳香胺 的条件； （2） 配制17种基因毒性芳香胺 的系列标 准工作溶液， 并注入超高效液相色谱 ‑串联质谱 进行分析， 得到17种基因毒 性芳香胺标准物质质 谱图， 绘制标准工作曲线。 （3） 样品制备： 将玉米 基餐盒剪成一定大小的小片， 浸泡在食品模拟液 中。 （4） 检测： 按样品检出的质量 色谱峰保留时间 和定性离子相对丰度比进行定性 分析， 按定量离 子峰面积进行定量分析。 本发明无需衍生化步 骤、 分析时间短， 为生物基餐具中基因毒性芳香 胺的迁移量提供了更准确、 高效、 快速的分析方 法。 权利要求书3页 说明书7页 附图7页 CN 115201377 A 2022.10.18 CN 115201377 A 1.一种玉米淀粉餐盒食 品模拟液中17种基因毒性芳香胺迁移量的检测方法， 其特征在 于， 包括以下步骤： （1） 以超高效液相色谱 ‑串联质谱法进行分析， 设定超高效液相色谱 ‑串联质谱条件： 1） 色谱仪： UPLC ‑MS/MS 2） 色谱柱： BEH  Phenyl column， 2.1  mm  × 100 mm， 1.7 μm； 这种苯基柱对芳香族化合 物具有独特的选择性， 能实现17种基因毒性芳香胺特别是间氯苯胺与对氯苯胺、 4 ‑氨基联 苯与2‑氨基联苯、 3,4‑二氯苯胺与3,5 ‑二氯苯胺这 三对同分异构体的有效分离； 3） 柱温： 3 5‑45℃； 4） 流动相A为0.07% （v/v） 含有甲酸的甲醇溶液， 流动相B为水， 进行梯度洗脱， 优化的洗 脱程序为： 0～1.0分钟； 99%A， 1%B， 1.0～3.0分钟： 99%～70%A， 1%～30%B， 3.0～7.0分钟： 70% ～0%A， 30%～100%B； 7.0～9.5分钟： 0%A， 100%B， 9.5～9.6分钟： 0%～99%A， 100%～1%B， 9.6～ 12.0分钟： 99%A， 1%B， 总运行时间为12分钟,17种基因毒性芳香胺的出峰时间全部少于 7min； 5） 流动相流速： 0.20 ‑0.3mL/mi n； 6） 注射样品量 为10 μL‑20 μL， 温度为20℃ ‑30℃； 7） 离子源： 电喷雾正离 子源， 离子源温度15 0℃‑170℃； 8） 扫描方式： 多反应离 子监测模式； 9） 脱溶剂气、 锥孔气、 碰撞气均为氮气； 洗脱温度 为500℃， 洗脱气体流速为1000L/H； 锥 孔气体流速为15 0 L/H； 碰撞气体流速为0.12mL/mi n； 10） 毛细管电压、 锥孔电压、 碰撞能量： 毛细管电压为0.5kV和0.6kV； 锥孔电压为20V； 针 对17种基因毒性芳香胺设置了优化的碰撞能量， 优化的碰撞能量和对应的离子对分别如 下： 间苯二胺： 母离 子109， 定性离 子65， 碰撞能量18V， 定量离 子92， 碰撞能量14V； 4,4’ ‑二氨基二苯醚： 母离子201， 定性离子80， 碰撞能量30V， 定量离子108， 碰撞能量 20V； 2,6‑二氨基甲苯： 母离 子123， 定性离 子108， 碰撞能量16V， 定量离 子106， 碰撞能量14V； 对甲氧基苯胺： 母离 子124， 定性离 子92， 碰撞能量15V， 定量离 子93， 碰撞能量17V； 对甲苯胺： 母离 子108， 定性离 子91， 碰撞能量16V， 定量离 子93， 碰撞能量15V； 1,5‑二氨基萘： 母离 子159， 定性离 子142， 碰撞能量20V， 定量离 子115， 碰撞能量20V； 2,4‑二甲基苯胺： 母离 子122， 定性离 子105， 碰撞能量17V， 定量离 子107， 碰撞能量15V； 间氯苯胺： 母离 子213， 定性离 子196， 碰撞能量19 V， 定量离 子180， 碰撞能量3 6V； 邻联甲苯胺： 母离 子128， 定性离 子75， 碰撞能量27V， 定量离 子93， 碰撞能量17V； 2‑甲氧基‑5‑三氟甲基苯胺： 母离子122， 定性离子77， 碰撞能量20V， 定量离子105， 碰撞 能量10V； 4,4'‑二氨基二苯硫醚： 母离子217， 定性离子139， 碰撞能量30V， 定量离子124， 碰撞能 量20V； 2‑氨基‑4‑硝基甲苯： 母离子128， 定性离子75， 碰撞能量27V， 定量离子93， 碰撞能量 17V； 4‑氨基联苯： 母离子170， 定性离 子153， 碰撞能量20V， 定量离 子152， 碰撞能量26V；权　利　要　求　书 1/3 页 2 CN 115201377 A 23,4‑二氯苯胺： 母离 子170， 定性离 子153， 碰撞能量20V， 定量离 子152， 碰撞能量26V； 对氯苯胺： 母离 子192， 定性离 子148， 碰撞能量20V， 定量离 子177， 碰撞能量20V； 2‑氨基联苯： 母离子162， 定性离 子74， 碰撞能量3 6V， 定量离 子127， 碰撞能量18V； 3,5‑二氯苯胺： 母离 子162， 定性离 子74， 碰撞能量3 6V， 定量离 子127， 碰撞能量18V； （2） 绘制标准曲线： 分别准确称取一定量的17种基因毒性芳香胺标准物质， 加甲醇溶解并定容， 配得标准 储备液； 分别准确移取一定体积的标准储备液， 用甲醇稀释并定容， 配得标准工作溶液； 将 17种基因毒性芳香胺的标准工作溶液注入超高效液相色谱 ‑串联质谱进行分析， 将每种基 因毒性芳香胺的信号响应值与对应浓度按外标法绘制标准工作曲线； 所述17种基因毒性芳香胺标准物质为： 间苯二胺、 4,4 ’ ‑二氨基二苯醚、 2,6 ‑二氨基甲 苯、 对甲氧基苯胺、 对甲苯胺、 1,5 ‑二氨基萘、 2,4 ‑二甲基苯胺、 间氯苯胺、 邻联甲苯胺、 2 ‑甲 氧基‑5‑三氟甲基苯胺、 4,4' ‑二氨基二苯硫醚、 2 ‑氨基‑4‑硝基甲苯、 4 ‑氨基联苯、 3,4 ‑二氯 苯胺、 对氯苯胺、 2 ‑氨基联苯和3,5‑二氯苯胺； （3） 样品制备： 将玉米基餐盒剪成一定大小的小片， 分别用一定体积的四种食品模拟液A、 B、 C、 D， 于一 定温度条件下浸泡 一定时间获得样品浸泡液； 其中， 食品模拟液A为水； 食品模拟液C为10%乙醇水 溶液； 食品模拟液B为3%冰乙酸水 溶液； 食品模拟液D为橄榄油； 食品模拟液A、 C浸泡后的样品浸泡液分别直接经滤膜过滤后供超高效液相色谱 ‑串联 质谱测定； 食品模拟液B浸泡后的样品浸泡液先用氨水调节pH至7， 再经滤膜过滤后供超高 效液相色谱 ‑串联质谱测定； 食品模拟液D浸泡后的样品浸泡液用正己烷 ‑甲醇液液萃取法 萃取， 取甲醇萃取 液经滤膜过滤后供超高效液相色谱 ‑串联质谱测定； （4） 检测： 按样品浸泡液检出的质量色谱峰保留时间和定性离子相对丰度比进行定性分析， 按定 量离子峰面积进行定量分析， 获得17种基因毒性 芳香胺的迁移量。 2.根据权利要求1所述的玉米淀粉餐盒食 品模拟液中17种基因毒性芳香胺迁移量的检 测方法， 其特征在于， 配制得17种基因毒性芳香胺标准工作液的浓度为： 0.10 μg/L， 0.20 μg/ L， 0.50 μg/L， 1.0 0 μg/L， 2.0 0 μg/L， 15 μg/L， 3 0 μg/L， 75 μg/L， 15 0 μg/L和3 00 μg/L。 3.根据权利要求1所述的玉米淀粉餐盒食 品模拟液中17种基因毒性芳香胺迁移量的检 测方法， 其特征在于， 步骤 （3） 中玉米基 餐盒小片的大小为， 1.5  cm×4 cm； 食品模拟液体积 为20 mL， 浸泡温度为5℃、 25℃、 40℃、 100℃， 分别模拟凉拌食品、 常温食品和热烫食品； 浸 泡时间模拟一般外卖送餐时长， 设为： 30分钟、 1小时、 1.5小时、 2小时、 3小时； 5℃浸泡温度 时的浸泡时间为： 3 0分钟、 1小时、 1.5小时、 2小时、 3小时、 6小时、 9小时、 15小时。 4.根据权利要求1所述的玉米淀粉餐盒食 品模拟液中17种基因毒性芳香胺迁移量的检 测方法， 其特 征在于， 步骤 （3） 中， 所用滤膜孔径为0.2 2 μm。 5.根据权利要求1所述的玉米淀粉餐盒食 品模拟液中17种基因毒性芳香胺迁移量的检权　利　要　求　书 2/3 页 3 CN 115