(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211034613.8 (22)申请日 2022.08.26 (71)申请人 上海和黄药业有限公司 地址 201401 上海市奉贤区肖业路38 8号 (72)发明人 沈丹萍　张正光　温方方　姜鹏　 詹常森　 (74)专利代理 机构 上海光华专利事务所(普通 合伙) 31219 专利代理师 许亦琳　余明伟 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) G01N 30/04(2006.01) G01N 30/06(2006.01) G01N 30/14(2006.01) G01N 30/30(2006.01)G01N 30/32(2006.01) G01N 30/34(2006.01) G01N 30/74(2006.01) G01N 30/86(2006.01) (54)发明名称 一种甘露消毒丸中5种成分含量的检测方法 及应用 (57)摘要 本发明提供一种甘露消毒丸中5种成分含量 的检测方法及应用， 包括： 将甘露消毒丸加入溶 剂溶解后超声提取、 过滤， 获得的供试品溶液采 用超高效液相色谱法(UPLC)进行检测， 确定供试 品溶液中5种指标 成分： 绿原酸、 连翘酯苷A、 3,5 ‑ O‑二咖啡酸酰基奎宁酸、 黄芩苷、 汉黄芩苷的含 量。 本发明提供的一种甘露消毒丸中5种成分含 量的检测方法及应用， 线性关系良好， 重复性良 好、 精密度良好、 准确度高、 稳定性好， 可真实反 映甘露消毒丸中多种主要活性 成分的质量差异， 确保批次间生产工艺与质量的稳定性， 全面完善 甘露消毒丸的质量控制体系。 权利要求书1页 说明书10页 附图1页 CN 115356415 A 2022.11.18 CN 115356415 A 1.一种甘 露消毒丸中5种成分含量的检测方法， 包括： 将甘 露消毒丸加入溶剂溶解后超 声提取、 过滤， 获得的供试品溶液采用超高效液相色谱法进行检测， 确定供试品溶液中5种 指标成分： 绿原酸、 连翘酯苷 A、 3,5‑O‑二咖啡酸 酰基奎宁酸、 黄 芩苷、 汉黄 芩苷的含量。 2.根据权利要求1所述的一种甘露消毒 丸中5种成分含量的检测方法， 其特征在于， 所 述溶剂为甲醇。 3.根据权利要求1所述的一种甘露消毒 丸中5种成分含量的检测方法， 其特征在于， 所 述甘露消毒丸加入的质量与溶剂加入的体积之比为0.1:15～ 25， g/mL。 4.根据权利要求1所述的一种甘露消毒 丸中5种成分含量的检测方法， 其特征在于， 所 述超声提取的时间为20～40分钟。 5.根据权利要求1所述的一种甘露消毒 丸中5种成分含量的检测方法， 其特征在于， 所 述采用超高效液相色谱法进行检测， 包括以下步骤： 1)配制对照 品溶液： 将绿原酸、 连翘酯苷A、 3,5 ‑O‑二咖啡酸酰基奎宁酸、 黄芩苷、 汉黄 芩苷的对照品， 加入溶剂溶解并定容， 配成对照品溶 液； 2)样品检测： 采用超高效液相 色谱法分别检测供试品溶液和步骤1)中的对照品溶液， 比较保留时间进 行定性， 采用外标法进 行定量， 确定供试品溶液中绿原 酸、 连翘酯苷A、 3,5 ‑ O‑二咖啡酸 酰基奎宁酸、 黄 芩苷、 汉黄 芩苷的含量。 6.根据权利要求5所述的一种甘露消毒 丸中5种成分含量的检测方法， 其特征在于， 步 骤1)中， 所述对照品溶液中绿原酸的含量范围为1.85～23.16 μg/mL， 连翘酯苷A的含量范围 为8.16～102.00 μg/mL， 3,5 ‑O‑二咖啡酸酰基奎宁酸的含量范围为1.82～22.73 μg/mL、 黄芩 苷的含量范围为38.10～476.24 μg/mL、 汉黄芩苷的含量范围为7.84～98.01μg/mL； 和/或， 所述溶剂为甲醇。 7.根据权利要求5所述的一种甘露消毒 丸中5种成分含量的检测方法， 其特征在于， 步 骤2)中， 所述超高效液相色谱法的检测条件为： 检测器为二极管阵列检测器； 色谱柱 为T3色 谱柱； 检测波长为320～340nm； 流动相为乙腈 ‑0.05～0.15％磷酸水溶液， 其中， A相为乙腈， B相为0.0 5～0.15％磷酸水 溶液； 分析时间为32mi n； 梯度洗脱。 8.根据权利要求5所述的一种甘露消毒 丸中5种成分含量的检测方法， 其特征在于， 步 骤2)中， 所述超高效液相色谱法的检测条件还包括有： 柱温为30～45℃； 流速为0.1～ 0.5mL/mi n； 进样量 为0.5～5 μL。 9.根据权利要求7所述的一种甘露消毒 丸中5种成分含量的检测方法， 其特征在于， 所 述梯度洗脱的具体程序为： 0～3min， A相： B相体积比为10： 90 ‑10： 90； 3～14min， A相： B相体积比为10： 90 ‑20： 80； 14～20min， A相： B相体积比为20： 80 ‑30： 70； 20～23min， A相： B相体积比为3 0： 70‑95： 5； 23～26min， A相： B相体积比为95： 5 ‑95： 5； 26～27min， A相： B相体积比为95： 5 ‑10： 90； 27～32mi n， A相： B相体积比为10： 90 ‑10： 90。 10.根据权利要求1 ‑9任一所述的一种甘露消毒丸中多种成分含量的测定方法在甘露 消毒丸的质量检测中的用途。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115356415 A 2一种甘露消毒丸中5种成分含量的检测方 法及应用 技术领域 [0001]本发明属于中药成分检测的技术领域， 涉及一种甘露消毒丸中5种成分含量的检 测方法及应用， 具体涉及一种甘露消毒丸中5种成分： 绿原酸、 连翘酯苷A、 3,5 ‑O‑二咖啡酸 酰基奎宁酸、 黄 芩苷、 汉黄 芩苷的含量的检测方法及应用。 背景技术 [0002]甘露消毒丸由11味药组成， 分别为藿香、 连翘、 川 贝母、 茵陈、 射干、 豆蔻、 木通、 黄 芩、 滑石、 石菖蒲和薄荷， 具有辛开肺气于上， 芳香化湿于中， 淡渗利湿于下的特点， 全方合 用以达清热解毒、 芳化淡渗、 化浊利湿的功效。 临床研究发现甘露消毒丹对流感、 流行性腮 腺炎、 非典型肺炎、 呼吸道病毒感染、 手足口病等传染病具有良好的治疗作用， 实验也证明 了其具有广谱抗病毒作用， 对流感病毒、 柯萨奇病毒、 水痘 ‑带状疱疹病毒等均具有一定疗 效。 [0003]甘露消毒丸临床研究亦发现其对COVID ‑19安全有效。 甘露消毒丸作为一首古名 方， 首载于 《续名医类案》 ， 其载: “雍正癸丑， 疫气流行 ……时毒疠气， 必应司天， 癸丑湿土气 化运行……故凡人之脾胃虚者， 乃应其疠气， 邪从口鼻皮毛而入， 并从湿化者， 发热、 目黄、 胸满、 丹疹、 泄泻， 当察其舌色， 或淡白， 或舌心干焦者， 湿邪犹在气分， 甘露消毒丹治之 ”。 与 七版诊疗方案中湿热蕴肺证症状相似， 陕西的中医药治疗方案中寒湿束表， 热郁 津伤型， 吉 林省中医药治疗方案的湿热蕴毒、 肺气闭塞和上海市2019冠状病毒病综合救治专家共识中 普通型COVID ‑19患者均推荐 使用甘露消毒丹加减。 [0004]甘露消毒丸临床应用较多， 疗效显著， 但目前缺少其对质量全面控制， 收载于2020 版 《中华人民共和国药典》 一部也仅对黄芩苷作了含量测定， 其他文献也少于报道其含量测 定方法。 发明内容 [0005]鉴于以上所述现有技术的缺点， 本发明的目的在于提供一种甘露消毒丸中5种成 分含量的检测方法及应用， 为甘露消毒丸的临床安全用药提供了一定保证。 [0006]为实现上述目的及其他相关目的， 本发明第一方面提供一种甘露消毒丸中5种成 分含量的检测方法， 包括： 将甘露消毒丸加入溶剂溶解后超声提取、 过滤， 获得的供试品溶 液采用超高效液相色谱法(UPLC)进行检测， 确 定供试品溶液中5种指标成分： 绿原酸、 连翘 酯苷A、 3,5‑O‑二咖啡酸 酰基奎宁酸、 黄 芩苷、 汉黄 芩苷的含量。 [0007]较佳地， 所述绿原酸的CAS号为327 ‑97‑9， 所述连翘酯苷A的CAS号为79916 ‑77‑1， 所述3,5‑O‑二咖啡酸酰基奎宁酸的CAS号为89919 ‑62‑0， 所述黄芩苷的CAS号为21967 ‑41‑ 9， 所述汉黄 芩苷的CAS号 为51059‑44‑0。 [0008]较佳地， 所述甘露消毒丸呈粉状。 [0009]较佳地， 所述溶剂为甲醇。 [0010]较佳地， 所述甘露消毒丸加入的质量g与溶剂加入的体积mL之比为0.1:15～25， 优说　明　书 1/10 页 3 CN 115356415 A 3