(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211026887.2 (22)申请日 2022.08.25 (71)申请人 宁波卫生职业技术学院 地址 315100 浙江省宁波市 鄞州区学府路 51号 (72)发明人 魏华　金明佳　黄晶晶　周坤鑫　 陶涛　保琦蓓　岳思青　费红军　 岑叶平　江玲丽　张旭　汪文娟　 (74)专利代理 机构 北京睿智保诚专利代理事务 所(普通合伙) 11732 专利代理师 马欢欢 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) G01N 30/04(2006.01) G01N 30/06(2006.01)G01N 30/72(2006.01) G01N 30/86(2006.01) G01N 30/88(2006.01) (54)发明名称 一种用于检测AD的粪便标志物组合和试剂 盒 (57)摘要 本发明属于生物标志物 技术领域， 本发明提 供了一种用于检测AD 的粪便标志物组合和试剂 盒。 本发明以15个粪便化合物作为标志物组合， 由该标志物组合与检测该标志物组合的试剂组 成的试剂盒可有效检测患者是否患有AD。 本发明 检测费用相对较低， 且为非损伤性方法， 未来随 着更多AD以及AD的前期病变MCI的研究， 特定粪 便化合物有望发展成为AD的辅助诊断方法， 为AD 的筛选提供损伤性小且可持续动态观察的临床 辅助诊断指标。 权利要求书1页 说明书8页 附图3页 CN 115326982 A 2022.11.11 CN 115326982 A 1.一种用于检测AD的粪便标志物组合， 其特征在于， 所述粪便标志物组合包括5 ‑氨基 戊酸、 24,25 ‑二氢羊毛甾醇、 丙酮醇、 丙酮酸、 草酸、 10 ‑羟基癸酸、 山梨醇、 胍基琥珀酸、 十五 烷酸、 4‑羟基苯甲醛、 α ‑酮戊二酸、 4 ‑甲基‑5‑噻唑乙醇、 棕榈酸甲酯、 酵母甾醇和3 ‑羟基十 六酸。 2.一种用于检测AD的试剂 盒， 其特征在于， 所述试剂盒包括权利要求1所述的粪便标志 物组合以及利用气相色谱 ‑飞行时间质谱联用的方法检测权利要求1所述粪便标志物组合 的试剂， 所述试剂包括： 甲醇， 氯仿， L ‑2‑氯苯丙氨 酸， 甲氧胺盐酸盐， 吡啶， 衍生化试剂和饱 和脂肪酸甲脂 。 3.根据权利要求2所述的试剂盒， 其特征在于， 所述气相色谱 ‑飞行时间质谱联用的检 测条件为： 进样量： 0.5～1.5 μl； 分流模式： 不分流； 前进样口吹扫流速： 2 ～4mL·min‑1； 载气： 氦气； 柱流速： 0.5～1.5mL ·min‑1； 柱温： 45～55℃保持0.5～1.5min， 以9～11℃/min的速率上升至300～320℃， 保持7～ 9min； 前进样口温度： 270～ 290℃； 传输线温度： 26 0～280℃； 离子源温度： 210～ 230℃； 电离电压： ‑80～‑60eV； 质量范围： 5 0～500m/z； 扫描速率： 18～ 22spectra/sec； 溶剂延迟： 6～7mi n。 4.根据权利要求2或3所述的试剂盒， 其特征在于， 所述甲醇、 氯仿的体积浓度独立≥ 99.8％， 所述L ‑2‑氯苯丙氨酸的质量浓度≥98.5％， 所述甲氧胺盐酸盐的质量浓度≥97％， 所述吡啶的质量浓度≥9 9.5％。 5.根据权利要求4所述的试剂盒， 其特征在于， 所述衍生化试剂包括BSTFA和TMCS， 所述 BSTFA与TM CS的体积比为98～10 0:1。 6.根据权利要求5所述的试剂盒， 其特征在于， 所述饱和脂肪酸甲酯的化学分子 式为R‑ COOCH3， 所述R为饱和烃基， 所述饱和烃基的碳原子个数为6～ 22。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115326982 A 2一种用于 检测AD的粪便标志物组合和试剂盒 技术领域 [0001]本发明涉及生物标志物技术领域， 尤其涉及一种用于检测AD的粪便标志物组合和 试剂盒。 背景技术 [0002]随着老年人口的数量增加， 阿尔茨海默病(Alzheimer's  disease,AD)患者的发病 率逐年增高， 严重影响人们的身心 健康， 也为社会与 家庭增添了繁重的负担。 目前临床已有 一些筛查与诊断AD的方法， 但都存在一定局限性， 认知评估方法对医生经验要求高且精确 度较低、 核磁共振等成像技术价格昂贵， 脑脊液检测由于抽取过程存在一定风险性与损伤 性， 患者接受度低。 因此临床急需损伤度小， 价格适中且易被患者接受的AD评估系统。 粪便 样本的采集为 非损伤性的方法。 但目前有关于利用粪便化合物为标志物对AD进 行辅助诊断 的研究还 鲜有报道。 发明内容 [0003]为克服现有技术中存在的上述缺陷， 本 发明提供了一种用于检测AD的粪便标志物 组合和试剂盒。 [0004]为了实现上述发明目的， 本发明提供以下技 术方案： [0005]本发明提供了一种用于检测AD的粪便标志物组合， 所述粪便标志物组合包括5 ‑氨 基戊酸、 24,25 ‑二氢羊毛甾醇、 丙酮醇、 丙酮酸、 草酸、 10 ‑羟基癸酸、 山梨醇、 胍基琥珀酸、 十 五烷酸、 4 ‑羟基苯甲醛、 α ‑酮戊二酸、 4 ‑甲基‑5‑噻唑乙醇、 棕榈酸甲酯、 酵母甾醇和3 ‑羟基 十六酸。 [0006]本发明还提供了一种用于检测AD的试剂盒， 所述试剂盒包括粪便标志物组合以及 利用气相色谱 ‑飞行时间质 谱联用的方法检测粪便标志物组合的试剂， 所述试剂包括： 甲 醇， 氯仿， L ‑2‑氯苯丙氨酸， 甲氧胺盐酸盐， 吡啶， 衍 生化试剂和饱和脂肪酸甲脂 。 [0007]优选的， 所述气相色谱 ‑飞行时间质谱联用的检测条件为： [0008]进样量： 0.5～1.5 μl； [0009]分流模式： 不分流； [0010]前进样口吹扫流速： 2 ～4mL·min‑1； [0011]载气： 氦气； [0012]柱流速： 0.5～1.5mL ·min‑1； [0013]柱温： 45～55℃保持0.5～1.5min， 以9～11℃/min的速率上升至300～320℃， 保持 7～9min； [0014]前进样口温度： 270～ 290℃； [0015]传输线温度： 26 0～280℃； [0016]离子源温度： 210～ 230℃； [0017]电离电压： ‑80～‑60eV；说　明　书 1/8 页 3 CN 115326982 A 3