(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210961028.6 (22)申请日 2022.08.11 (71)申请人 朱金兰 地址 225300 江苏省泰州市海陵区莲 花住 宅2区4幢四单 元507室 (72)发明人 朱金兰　许燕平　王华为　王菁　 张姗　潘浴梅　 (74)专利代理 机构 成都鱼爪智云知识产权代理 有限公司 513 08 专利代理师 范伦 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) G01N 30/04(2006.01) G01N 30/06(2006.01) G01N 30/72(2006.01) (54)发明名称 一种畜产品大环内酯类残留的检测方法 (57)摘要 本申请提出了一种畜产品大环内酯类残留 的检测方法， 涉及分析检测技术领域。 一种畜产 品大环内酯类残留的检测方法， 其包括如下步 骤： 称取2 ‑2.5g牲畜肉产品作为试样， 加入乙腈 溶液10mL和内标工作溶液， 涡旋混合并超声萃 取， 然后离心并取上清液， 将上清液加载至Prime   HLB固相萃取柱进行洗脱净化， 对洗脱液氮吹干， 再加入乙腈溶液 1mL复溶， 再过有机微孔滤膜， 滤 液供液相色谱 ‑串联质谱仪进行检测。 其操作简 便， 耗时短效率高、 检测效果稳定且成本低廉。 权利要求书1页 说明书6页 CN 115308330 A 2022.11.08 CN 115308330 A 1.一种畜产品大环内酯类残留的检测方法， 其特 征在于， 其包括如下步骤： 称取2‑2.5g牲畜肉产品作为试样， 加入乙腈溶液10mL和内标工作溶液， 涡旋混合并超 声萃取， 然后离心并取上清液， 将上清液加载至Prime  HLB固相萃取柱进行洗脱净化， 对洗 脱液氮吹干， 再加入乙腈溶液1mL复溶， 再过有机微孔滤膜， 滤液供液相色谱 ‑串联质谱仪进 行检测。 2.根据权利要求1所述的畜产品大环内酯类残留的检测方法， 其特征在于， 所述乙腈溶 液的体积浓度为 10％； 每千 克试样加入内标工作溶液5 μg； 所述内标工作溶液为罗红霉素同 位素内标。 3.根据权利要求1所述的畜产品大环内酯类残留的检测方法， 其特征在于， 漩涡混合 0.5‑2min并超声萃取3‑8min。 4.根据权利要求1所述的畜产品大环内酯类残留的检测方法， 其特征在于， 在10000r/ min的转速下离心3 ‑8min并取5mL上清液。 5.根据权利要求1所述的畜产品大环内酯类残留的检测方法， 其特征在于， 所述Prime   HLB固相萃取柱的规格为5 00mg‑6cc。 6.根据权利要求1所述的畜产品大环内酯类残留的检测方法， 其特征在于， 所述有机微 孔滤膜的孔径为0.2 2 μm。 7.根据权利要求1所述的畜产品大环内酯类残留的检测方法， 其特征在于， 色谱检测条 件如下： 色谱柱： C18柱Rapid  Resolution HD 2.1×100mm， 1.8‑Micron； 流动相： A相为0.1％甲酸水含5mM的乙酸铵， B相为0.1％甲酸乙腈； 梯度洗脱程序： 0 ‑0.5min保持90％A， 0.5 ‑1min从90％A变为80％A， 1.0 ‑4.0min从80％A 变为75％A， 4.0 ‑7.0min从75％A变为10％A， 7.0 ‑8.5min保持10％A； 流速： 0.4mL/mi n； 进样量： 1.0 μL； 时间： 10mi n； 柱温： 30℃。 8.根据权利要求1所述的畜产品大环内酯类残留的检测方法， 其特征在于， 质谱检测条 件如下： 电离模式： 电喷雾正离 子ESI+； 毛细管电压： 40kV； 离子源温度： 3 50℃； 干燥气流速： 1 1L/min； 雾化器压力： 45psi； 采集方式： 多反应监测扫描模式MRM； 增加电压： +20 0V。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115308330 A 2一种畜产品大环 内酯类残留 的检测方 法 技术领域 [0001]本申请涉及分析检测技术领域， 具体而言， 涉及一种畜产品大环内酯类残留的检 测方法。 背景技术 [0002]大环内酯类抗生素(macrolides  antibiotics， MA)是一类分子结构中具有12 ‑16 碳内酯环的抗菌药物的总称， 通过阻断50s核糖体中肽酰转移酶的活性来抑制细菌蛋白质 合成， 属于快速抑菌剂。 主要用于治疗需氧革兰阳性球菌和阴性球菌、 某些厌氧菌以及军团 菌、 支原体、 衣原体等感染， 多应用于兽药。 [0003]目前畜禽肉中九种大环内酯类抗生素(林可霉素、 竹桃 霉素、 红霉素、 替米考星、 泰 乐菌素、 克林霉素、 螺旋霉素、 吉他霉素和交沙霉素)的检测方法主要采用GB/T20762 ‑2006 《禽肉中林可霉素、 竹桃霉素、 红霉素、 替米考星、 泰乐菌素、 克林霉素、 螺旋霉素、 吉他霉素 和交沙霉素残留量的测定液相色谱 ‑串联质谱法》 ， 具体为： 取5g试样， 加入10.0 μL内标工作 溶液和15.0mL乙腈， 振荡 10min， 以42 00r/min离心 5min， 取上清液加入2.0g氯化钠和10.0mL 正己烷， 振荡10min， 以42 00r/min离心10min， 吸取中间乙腈层12.0mL， 55℃氮吹干； 用7mL磷 酸盐缓冲溶液分两次溶解残液， 以小于1.0mL/min流速过Oasis  HLB固相萃取柱并用10mL水 和5mL甲醇加水溶液洗柱， 弃去流出液， 固相萃取柱用真空泵抽干1h， 再用10mL甲醇洗脱， 55 ℃氮吹干， 加入1.0mL甲酸铵溶 液溶解残渣， 过 滤膜后供色谱 ‑串联质谱仪测定 。 [0004]但该方法在实际使用过程中， 存在以下缺 点： [0005]1.提取所用色谱纯乙腈、 正己烷、 甲醇等原料用量较大； [0006]2.样品前处 理时间较长， 通常需要3 ‑4个小时左右； [0007]3.净化过程繁琐， 需要进行预活化、 上柱、 洗柱、 洗脱等步骤， 且药物残留回收不稳 定。 发明内容 [0008]本申请的目的在于提供一种畜产品大环内酯类残留的检测方法， 其操作简便， 耗 时短效率高、 检测效果稳定且成本低廉。 [0009]本申请解决其 技术问题是采用以下技 术方案来实现的。 [0010]本申请实施例提供一种畜产品大环内酯类残留的检测方法， 其包括如下步骤： [0011]称取2‑2.5g牲畜肉产品作为试样， 加入乙腈溶液10mL和内标工作溶液， 涡旋混合 并超声萃取， 然后离心并取上清液， 将上清液加载至Prime  HLB固相萃取柱进行洗脱净化， 对洗脱液氮吹干， 再加入乙腈溶液1mL复溶， 再过有机微孔滤膜， 滤液供液相色谱 ‑串联质谱 仪进行检测。 [0012]相对于现有技 术， 本申请的实施例至少具有如下优点或有益效果： [0013]本申请实施例提供了一种畜产品大环内酯类残留的检测方法， 整个方法流程简 单， 与现有的畜肉产品中大环内酯类残留检测方法相比试样原料以及检测试剂的用量更说　明　书 1/6 页 3 CN 115308330 A 3