(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211016883.6 (22)申请日 2022.08.24 (71)申请人 江阴天江药业有限公司 地址 214429 江苏省无锡市高新区新胜路1 号 (72)发明人 顾杨欣　祝倩倩　王协和　陈盛君　 李松　李淑娟　李媚　张钰萍　 王琪　肖乃文　 (74)专利代理 机构 南京苏高专利商标事务所 (普通合伙) 32204 专利代理师 王艳 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) G01N 30/06(2006.01) G01N 30/54(2006.01)G01N 30/74(2006.01) G01N 30/88(2006.01) (54)发明名称 一种竹沥半夏的特征图谱和对照图谱的构 建方法及半夏不同炮制品的区分方法 (57)摘要 本发明公开了一种构建竹沥半夏的特征图 谱和对照图谱的方法以及利用该特征图谱和对 照图谱区分竹沥半夏与清半夏、 法半夏、 姜半夏 的方法。 用本发 明的方法建立的色谱峰信息较为 丰富且定位准确； 同时， 对照特征图谱是通过多 产地多批次饮片取共有峰建立， 具有普适性； 半 夏不同炮制品之间的图谱差异明显， 可用于竹沥 半夏的质量控制， 以及半夏不同规格炮制品的区 分。 权利要求书2页 说明书22页 附图20页 CN 115267008 A 2022.11.01 CN 115267008 A 1.一种竹沥半夏特 征图谱的构建方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： S11、 分别取竹沥半夏饮片、 标准汤剂或其配方颗粒的粉末， 加入溶剂进行提取， 得到供 试品溶液； S12、 取酪氨酸、 色氨酸、 6 ‑姜辣素， 加入溶剂制成对照品溶 液； S13、 取供试品溶液和对照品溶 液分别注入液相色谱中， 获取 特征图谱。 2.根据权利要求1所述的竹沥半夏特征图谱的构建方法， 其特征在于， S11步骤中， 分别 取竹沥半夏饮片、 标准汤剂或其配方颗粒的粉末， 过筛后称量， 加入10～80％甲醇水溶液， 定量后超声处理15～60min， 冷却， 用相同的溶剂补足减失的重量， 摇匀， 2～10℃静置8h以 上， 12000rpm离心5mi n， 过滤， 续滤液即为供 试品溶液。 3.根据权利要求1所述的竹沥半夏特征图谱的构建方法， 其特征在于， S11步骤中， 所述 竹沥半夏 饮片、 标准汤 剂或其配方颗粒粉末与溶剂的质量体积比为1:5～ 25g/ml。 4.根据权利要求2所述的竹沥半夏特征图谱的构建方法， 其特征在于， 所述超声处理功 率为250W， 频率为40kHz。 5.根据权利要求1所述的竹沥半夏特征图谱的构建方法， 其特征在于， 步骤S13中液相 色谱的色谱条件为： 色谱柱： Waters  CORTECS T3； 进样量： 2 μl； 流速： 0.2 5～0.35ml/min； 柱 温： 20～30℃； 检测波长： 220～270nm； 乙腈为流动相A， 0.15％磷酸水溶液为流动相B进行梯 度洗脱。 6.根据权利要求5所述的竹沥半夏特征图谱的构建方法， 其特征在于， 步骤S13中梯度 洗脱为： 0～5min， 流动相 A的体积分数为0％， 流动相B的体积分数为100％； 5～18min， 流动 相A的体积分数变化为0 →8％， 流动相B的体积分数变化为100 →92％； 18～23min， 流动相A 的体积分数变化为8 →14％， 流动相B的体积分数变化为92 →86％； 23～28min， 流动相A的体 积分数为14％， 流动相B的体积分数为86％； 28～45min， 流动相A的体积分数变化为14 → 60％， 流动相B的体积分数变化为86 →40％； 45～47min， 流动相A的体积分数为60％， 流动相 B的体积分数为 40％。 7.根据权利要求5所述的竹沥半夏特征图谱的构建方法， 其特征在于， 所述竹沥 半夏饮 片、 标准汤剂或其配方颗粒的特征图谱 具有共有峰8 个， 取酪氨酸为对照品， 峰1为 酪氨酸的 色谱峰； 取色氨酸为对照品， 峰5为色氨酸的色谱峰； 取6 ‑姜辣素为对照品， 峰8为6 ‑姜辣素 的色谱峰， 与酪氨酸参照物相应的峰为S1峰， 计算峰2与S1峰的相 对保留时间， 其相 对保留 时间在规定值的 ±10％范围以内， 峰2规定值为1.77， 与色氨酸参照物相应的峰为S2峰， 计 算峰3、 峰4、 峰6、 峰7与S2峰的相对保留时间， 其相对保留时间均应在规定值的 ±10％范围 之内， 峰3、 峰4、 峰6、 峰7规定值分别为： 0.83、 0.90、 1.21、 1.5 6。 8.一种建立竹沥半夏对照图谱的方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： S21、 分别制备多批次竹沥 半夏饮片供试品溶液、 多批次竹沥半夏标准汤剂供试品溶液 和多批次竹沥半夏 配方颗粒 供试品溶液； S22、 根据权利要求1所述的竹沥半夏特征图谱的构建方法对所述供试品溶液分别进行 检测， 得到竹沥半夏饮片的特征图谱、 标准汤剂的特征图谱和竹沥半夏配方颗粒 的特征图 谱； S23、 将得到的特征图谱导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统建立竹沥半夏饮片、 标 准汤剂及其配方颗粒的对照图谱。权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115267008 A 29.根据权利要求8所述的建立竹沥 半夏对照图谱的方法， 其特征在于， 所述半夏饮片供 试品共有2 2批次， 所述标准汤 剂共有22批， 所述竹沥半夏 配方颗粒有3 批次。 10.一种区分竹沥半夏和清半夏、 法半夏、 姜半夏的方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： (1)制备供试品溶液： 分别将竹沥半夏饮片、 标准汤剂或其配方颗粒研细， 称量， 加入溶 剂， 称定重量， 提取， 再称定重量， 用相应的溶剂补足减失的重量， 摇匀， 2～10℃静置8h以 上， 12000rpm离心5mi n， 过滤， 取续滤 液， 即得供试溶液； (2)制备对照品溶液： 分别称定对照品酪氨酸、 色氨酸和6 ‑姜辣素， 加入 甲醇溶液作为 对照品参照物溶 液； (3)高效液相图谱检测： 分别取供试溶液或对照品溶液， 注入液相色谱仪， 按220nm～ 270nm波长、 以乙腈～0.15％磷酸 为流动相的条件下进行高效液相图谱检测， 记录色谱图； (4)分析： 在色谱图中选取相对保留时间稳定的峰作为特征峰， 再与对照品溶液图谱的 峰进行比较， 确定8个特 征峰； (5)区分： 分别将供试品溶液色谱图与对照品溶液色谱图进行比较； 当供试品溶液色谱 图仅有峰1、 峰5时， 该供试品为法半夏饮片、 标准汤剂或其颗粒； 当供试溶液色谱图有峰1、 峰2、 峰3、 峰5、 峰6时， 该供试品为清半夏饮片、 标准汤剂或其颗粒； 当供试溶液色谱图有峰 1、 峰2、 峰3、 峰5、 峰6、 峰8时， 该供试品为姜半夏饮片、 标准汤剂或其颗粒； 当供试溶液色谱 图含有8个峰时， 该 供试品为竹沥半夏 饮片、 标准汤 剂或其配方颗粒。 11.根据权利要求10所述区分竹沥 半夏和清半夏、 法半夏、 姜半夏的方法， 其特征在于， 步骤(1)中所述溶剂为10％～80％甲醇或3 0％乙醇。 12.根据权利要求10所述区分竹沥 半夏和清半夏、 法半夏、 姜半夏的方法， 其特征在于， 步骤(1)中所述 提取方式为振荡、 超声或回流， 提取时间为15～6 0min。 13.根据权利要求10所述区分竹沥 半夏和清半夏、 法半夏、 姜半夏的方法， 其特征在于， 步骤(3)中所述高效液相图谱检测中的色谱柱为CORTECS  UPLC T3、 ACQUITY  UPLC HSS T3 或ZORBAX  Eclipse Plus C18。 14.根据权利要求10所述区分竹沥 半夏和清半夏、 法半夏、 姜半夏的方法， 其特征在于， 步骤(3)中所述高效液相图谱检测中的色谱柱 柱温为20～3 0℃， 流速为0.25～0.32ml/mi n。 15.根据权利要求10所述区分竹沥 半夏和清半夏、 法半夏、 姜半夏的方法， 其特征在于， 步骤(3)中所述供 试品溶液或对照品溶 液的进样量 为2 μl。 16.根据权利要求10所述区分竹沥 半夏和清半夏、 法半夏、 姜半夏的方法， 其特征在于， 步骤(4)中的相对保留时间是若干组实验结果的平均值。 17.根据权利要求10所述区分竹沥 半夏和清半夏、 法半夏、 姜半夏的方法， 其特征在于， 步骤(4)中取酪氨酸为对照品时， 峰1为酪氨酸的色谱峰； 取色氨酸为对照品， 峰5为色氨酸 的色谱峰； 取6 ‑姜辣素为对照品， 峰8为 酪氨酸的色谱峰， 与酪氨 酸参照物相应的峰为S1峰， 计算峰2与S1峰的相 对保留时间， 其相 对保留时间应在规定值的 ±10％范围以内， 峰2规定 值为1.77， 与色氨酸参照物相应的峰为S2峰， 计算峰3、 峰4、 峰6、 峰7与S2峰的相对保留时 间， 其相对保留时间均应在规定值的 ±10％范围之内， 峰3、 峰4、 峰6、 峰7规定值分别为： 0.83、 0.90、 1.21、 1.5 6。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115267008 A 3