(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210982496.1 (22)申请日 2022.08.16 (71)申请人 云南植物药业有限公司 地址 650500 云南省昆明市高新区马澄公 路2899号 (72)发明人 郭昕　黄春球　武正才　谢忠浪　 腾利兵　杨经巾　陈大彪　何耀莹　 马海燕　 (74)专利代理 机构 北京隆达恒晟知识产权代理 有限公司 1 1899 专利代理师 李中强 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) G01N 30/06(2006.01) G01N 30/30(2006.01)G01N 30/34(2006.01) G01N 30/74(2006.01) G01N 30/86(2006.01) (54)发明名称 一种竹红菌指纹图谱及其建立方法与应用 (57)摘要 本发明公开了一种竹红菌指纹图谱及其建 立方法与应用， 本发明以乙腈溶液为流动相A， 磷 酸溶液为流动相B， 色谱柱以十八烷基硅烷键合 硅胶为填料， 波长215 ‑300nm， 柱温10 ‑35℃， 采用 梯度洗脱为 色谱条件， 将对照品溶液和供试品溶 液分别注入高效液相色谱仪， 照高效液相色谱法 测定， 得到指纹图谱。 指纹图谱技术作为天然药 物提取物及其制剂的质量控制方法已达成国际 共识， 基于指纹图谱鉴定中药材质量具有特征 性、 稳定性和重现性好的特点。 本发明通过HPLC 技术构建了竹红菌指纹图谱， 为竹红菌及其制剂 提供了一种稳定可靠的质量控制检测方法。 权利要求书1页 说明书9页 附图2页 CN 115372510 A 2022.11.22 CN 115372510 A 1.一种竹红菌指纹图谱的建立方法， 其特 征在于， 包 含以下步骤： S1， 对照品溶液的制备： 精密称取竹红菌甲素、 竹红菌乙素、 竹红菌丙素对照品， 以甲醇 或乙醇为溶剂配成对照品溶 液； S2， 供试品溶液的制备： 精密称取竹红菌药材粉末， 精密加入乙醇水溶液， 超声振荡， 滤 过， 作为供 试品溶液； S3， 色谱条件： 乙腈溶液为流动相A， 磷酸溶液为流动相B， 色谱柱以十八烷基硅烷键合 硅胶为填料， 波长215 ‑300nm， 柱温10 ‑35℃， 采用梯度洗脱， 条件设置为： 0分钟时， 流动相A为3 0%的乙腈溶 液、 流动相B为70%的0.1~0.5%的磷酸溶 液； 6分钟时， 流动相A为6 0%的乙腈溶 液、 流动相B为 40%的0.1~0.5%的磷酸溶 液； 30分钟时， 流动相A为80%的乙腈溶 液、 流动相B为20%的0.1~0.5%的磷酸溶 液； 35分钟时， 流动相A为3 0%的乙腈溶 液、 流动相B为70%的0.1~0.5%的磷酸溶 液； 40分钟时， 流动相A为3 0%的乙腈溶 液、 流动相B为70%的0.1~0.5%的磷酸溶 液； S4， 测定： 精密吸取步骤S1中的对照品溶液和步骤S2中的供试品溶液分别注入高效液 相色谱仪， 照高效液相色谱法测定， 得到指纹图谱。 2.根据权利要求1所述的一种竹红菌指纹图谱的建立方法， 其特征在于： 所述步骤S2供 试品溶液的制备具体包括： 取过60目筛的竹红菌药材粉末 0.5g， 置具塞锥形瓶中， 精密加入 75 %的乙醇溶液50ml， 称 重， 然后超声振荡40min， 放冷， 再称 定重量， 用75%乙醇补足减失的 重量， 摇匀， 用  0.45 μm的滤膜过 滤， 作为供 试品溶液。 3.根据权利要求1或2任一项所述的一种竹红菌指纹图谱的建立方法获得的指纹图谱。 4.根据权利要求1或2任一项所述的一种竹红菌指纹图谱的建立方法在竹红菌药材或 其制剂质量检测中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115372510 A 2一种竹红菌指纹图谱 及其建立方 法与应用 技术领域 [0001]本发明属于中药材质量控制技术领域， 具体的说， 涉及一种竹红菌指纹图谱及其 建立方法与应用。 背景技术 [0002]竹红菌为肉座菌科植物竹生小肉座菌 Hypocrella  Bambusae (B.et Br.)Sacc.的 干燥子座， 是它的药用部位。 竹红菌在滇西北的纳西族、 白族、 彝族等民族医药中应用广泛， 竹红菌主要成分为竹红菌素， 竹红菌素是一种苝醌类衍生物， 主要包括竹红菌甲素、 竹红菌 乙素、 竹红菌丙素， 另外竹红菌中还含有甘露醇、 尿囊素等成分， 其中以竹红菌甲素和甘露 醇的含量较高。 竹红菌素是一种典型的光敏活性物质， 目前研究较多的是它的抗肿瘤作用， 竹红菌乙醇提取物竹红菌素软膏在临床上用于治疗外阴白色病变、 瘢痕疙瘩、 外阴瘙痒及 外阴炎等具有较好的疗效。 [0003]竹红菌标准收载于2005年版 《云南省药材标准》 中， 标准号为 （云YCB Z0018‑2005） ， 标准中鉴别项仅对竹红菌粉末外观， 子座切面显色， 乙醇提取液最大吸收波长的鉴别， 没有 对其化学成分相关的鉴别， 鉴别精度较差， 另外没有含量测定项， 现行标准不能反映竹红菌 素成分的比例和含量， 竹红菌药材指纹图谱能全面反映药材所含内在化学成分的比例和含 量， 能全面有效的反映中药 材质量。 [0004]为了解决竹红菌药材质量控制问题， 中国专利申请， 公开号为： CN102028717A， 申 请日为： 2 010.12.07， 申请号为： CN201010575529.8的专利公开了竹红菌药材的薄层鉴别方 法， 分别以竹红菌甲素、 竹红菌乙素、 竹红菌丙素为对照对竹红菌药材进行薄层色谱鉴别， 薄层色谱仅能做到定性的鉴别， 对各成分的比例、 含量不能全面的反映出来， 公开号： CN101710070A， 申请日为： 2 009.12.0 7， 申请号为： CN2 00910218284.0， 的专利公开了竹红菌 药材中竹红菌甲素 的含量的测定方法， 仅对竹红菌甲素进行含量测定， 不能全面反映每个 成分含量， 存在一定的不 足， 竹红菌药材指纹图谱采用液相色谱的方法， 能准确全面地检测 中药材质量。 发明内容 [0005]为了克服背景技术中存在的问题， 本发明提供了一种竹红菌指纹图谱及其建立方 法与应用， 具有能够较为全面评价竹红菌药 材， 保证产品质量的有益效果。 [0006]为实现上述目的， 本发明提供： 一种竹红菌指纹图谱的建立方法， 包 含以下步骤： S1， 对照品溶液的制备： 精密称取竹红菌甲素、 竹红菌乙素、 竹红菌丙素对照品， 以 甲醇或乙醇为溶剂配成对照品溶 液； S2， 供试品溶液的制备： 精密称取竹红菌药材粉末， 精密加入乙醇水溶液， 超声振 荡， 滤过， 作为供 试品溶液； S3， 色谱条件： 乙腈溶液为流动相A， 磷酸溶液为流动相B， 色谱柱以十八烷基硅烷说　明　书 1/9 页 3 CN 115372510 A 3