(19)国家知识产权局 (12)发明 专利 (10)授权公告 号 (45)授权公告日 (21)申请 号 202210958378.7 (22)申请日 2022.08.11 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 115032377 A (43)申请公布日 2022.09.09 (73)专利权人 裕菁科技 （上海） 有限公司 地址 200131 上海市浦东 新区(上海)自由 贸易试验区法赛路361号1幢二楼206 室 (72)发明人 谭晓杰　张元媛　 (74)专利代理 机构 上海段和段律师事务所 31334 专利代理师 郭国中 (51)Int.Cl. G01N 33/50(2006.01) G01N 30/02(2006.01) G01N 30/72(2006.01) G01N 30/06(2006.01) (56)对比文件 US 20132170 56 A1,2013.08.2 2 CN 113826015 A,2021.12.21 US 2006286034 A1,20 06.12.21 US 2022025065 A1,202 2.01.27US 2019249155 A1,2019.08.15 US 20120 09616 A1,2012.01.12 WO 2021158986 A1,2021.08.12 WO 201713 6533 A1,2017.08.10 US 2015017672 A1,2015.01.15 CN 112986429 A,2021.0 6.18 CN 107003324 A,2017.08.01 CN 1097819 97 A,2019.0 5.21 TW 200400351 A,2004.01.01 Roger Lawrence等.Disease-specific non–reducing end carbohydrate bi omarkers for mucopo lysaccharidoses. 《Nature Chemical Bi ology》 .2012,第8卷 Zackary M. Herbst等.Evaluati on of Multiple Methods for Quantificati on of Glycosami noglycan Bi omarkers i n Newborn Dried Bl ood Spots from Patients w ith Severe and A ttenuated Mucopolysaccharidosis-I. 《I nternati onal Journal of Neo natal Scre ening》 .2020,第6卷 (续) 审查员 聂群 (54)发明名称 一种粘多糖贮积症生物标记 物及应用 (57)摘要 本发明涉及一种粘多糖贮积症生物标记物 及应用。 所述生物标志物包括： 艾杜糖酸 ‑(1‑O‑ 4)‑N‑磺基胺基葡萄糖苷， 艾杜糖酸 ‑(1‑O‑4)‑N, 6‑二磺基胺基葡萄糖苷， 4,5 ‑不饱和葡萄糖酸 ‑ (1‑O‑3)‑6‑磺基‑N‑乙酰胺基半乳糖苷， 4,5 ‑不 饱和葡萄糖酸 ‑(1‑O‑4)‑N‑乙酰胺基葡萄糖苷， 4,5‑不饱和葡萄糖酸 ‑(1‑O‑3)‑N‑磺基胺基葡萄 糖苷。 本发 明根据粘多糖化合物的基本结构及粘 多糖贮积症的发病机理分析， 认识到尿液中特定 的二糖单元可作为粘多糖贮积症筛查的生物标志物， 并成功用于粘多糖 贮积症的筛查和粘多糖 贮积症I型， I I型和IVA型的区分。 [转续页] 权利要求书3页 说明书9页 附图3页 CN 115032377 B 2022.11.01 CN 115032377 B (56)对比文件 Eveline J. Langereis等.Bi omarker responses cor relate w ith antibody status in mucopo lysaccharidosis type I patients on long-term enzy me replacement therapy. 《Molecular Genetics and Metabo lism》 .2014, 第114卷 Junhua Wang等.High -Throughput L iquid Chromatography –Tandem Mas s Spectrometry Quantificati on of Glycosami noglycans as Biomarkers of Mucopo lysaccharidosis I I. 《Internati onal Journal of Mo lecular Sciences》 .2020,第21卷 苑晓舟等.粘 多糖贮积症基 于GAG累积的检 测方法. 《临床检验杂志(电子版)》 .2015,(第04 期),1008-1013.2/2 页 2[接上页] CN 115032377 B1.一种生物标志物在制备粘多糖贮积症的筛查、 不同亚型诊断或风险评估的产品中的 应用， 其特征在于， 所述生物标志物为软骨素ABC酶和肝素裂解 酶裂解的二糖单元； 其中， 所 述肝素裂解酶包括 肝素裂解酶I、 肝素裂解酶I I和肝素裂解酶I II； 所述生物标志物包括艾杜糖酸 ‑(1‑O‑4)‑N‑磺基胺基葡萄糖苷、 艾杜糖酸 ‑(1‑O‑4)‑N, 6‑二磺基胺基葡萄糖苷、 4,5 ‑不饱和葡萄糖酸 ‑(1‑O‑3)‑6‑磺基‑N‑乙酰胺基半乳糖苷、 4, 5‑不饱和葡萄糖酸 ‑(1‑O‑4)‑N‑乙酰胺基葡萄糖苷、 4,5 ‑不饱和葡萄糖酸 ‑(1‑O‑3)‑N‑磺基 胺基葡萄糖苷； 用于区分MPS  I型的生物标志物为4,5 ‑不饱和葡萄糖酸 ‑(1‑O‑4)‑N‑乙酰胺基葡萄糖 苷、 4,5‑不饱和葡萄糖酸 ‑(1‑O‑3)‑N‑磺基胺基葡萄糖苷、 4,5 ‑不饱和葡萄糖酸 ‑(1‑O‑3)‑ 6‑磺基‑N‑乙酰胺基半乳糖苷和艾杜糖酸 ‑(1‑O‑4)‑N‑磺基胺基葡萄糖苷； 当标志物4,5 ‑不 饱和葡萄糖酸 ‑(1‑O‑4)‑N‑乙酰胺基葡萄糖苷、 4,5 ‑不饱和葡萄糖酸 ‑(1‑O‑3)‑N‑磺基胺基 葡萄糖苷、 4,5 ‑不饱和葡萄糖酸 ‑(1‑O‑3)‑6‑磺基‑N‑乙酰胺基半乳糖苷含量相对于正常人 群升高， 且能够检测到艾 杜糖酸‑(1‑O‑4)‑N‑磺基胺基葡萄糖苷时， 即判定为MP S I型； 用于区分MPS  II型的生物标志物为4,5 ‑不饱和葡萄糖酸 ‑(1‑O‑4)‑N‑乙酰胺基葡萄糖 苷、 4,5‑不饱和葡萄糖酸 ‑(1‑O‑3)‑N‑磺基胺基葡萄糖苷、 4,5 ‑不饱和葡萄糖酸 ‑(1‑O‑3)‑ 6‑磺基‑N‑乙酰胺基半乳糖苷和艾杜糖酸 ‑(1‑O‑4)‑N,6‑二磺基胺基葡萄糖苷； 当标志物4, 5‑不饱和葡萄糖酸 ‑(1‑O‑4)‑N‑乙酰胺基葡萄糖苷、 4,5 ‑不饱和葡萄糖酸 ‑(1‑O‑3)‑N‑磺基 胺基葡萄糖苷、 4,5 ‑不饱和葡萄糖酸 ‑(1‑O‑3)‑6‑磺基‑N‑乙酰胺基半乳糖苷含量相对于正 常人群升高， 且能够检测到艾杜糖酸 ‑(1‑O‑4)‑N,6‑二磺基胺基葡萄糖苷时， 即判定为MPS   II型； 用于区分MPS  IVA型的生物标志物为4,5 ‑不饱和葡萄糖酸 ‑(1‑O‑4)‑N‑乙酰胺基葡萄 糖苷、 4,5 ‑不饱和葡萄糖酸 ‑(1‑O‑3)‑N‑磺基胺基葡萄糖苷、 4,5 ‑不饱和葡萄糖酸 ‑(1‑O‑ 3)‑6‑磺基‑N‑乙酰胺基半乳糖苷含量、 艾杜糖酸 ‑(1‑O‑4)‑N‑磺基胺基葡萄糖苷和艾杜糖 酸‑(1‑O‑4)‑N,6‑二磺基胺基葡萄糖苷； 当标志物4,5 ‑不饱和葡萄糖酸 ‑(1‑O‑4)‑N‑乙酰胺 基葡萄糖苷、 4,5 ‑不饱和葡萄糖酸 ‑(1‑O‑3)‑N‑磺基胺基葡萄糖苷含量相对于正常人群未 见变化， 同时， 标志物4,5 ‑不饱和葡萄糖酸 ‑(1‑O‑3)‑6‑磺基‑N‑乙酰胺基半乳糖苷含量相 对于正常人群升高， 且未检出艾杜糖酸 ‑(1‑O‑4)‑N‑磺基胺基葡萄糖苷和艾杜糖酸 ‑(1‑O‑ 4)‑N,6‑二磺基胺基葡萄糖苷时， 即判定为MP S IVA型。 2.根据权利要求1所述的应用， 其特征在于， 所述生物标志物的样本来自尿液、 血清、 血 浆、 全血、 干血斑中的任意 一种。 3.根据权利要求1所述的应用， 其特征在于， 所述生物标志物的检测方法包括如下步 骤： 1） 待测样品准备， 所述待测样品为尿液样本； 2） 样本酶解和蛋白沉淀： 在待测的尿液样本中加入酶溶液和孵育缓冲液进行孵育， 孵 育后蛋白沉淀， 离心取 上清液； 3） 上机检测： 采用液相 色谱串联质谱法对步骤2） 得到的上清液进行检测， 针对性检测 二糖单元； 其中， 步骤2） 中， 所述酶溶液包括软骨素裂解酶ABC溶液和肝素裂解酶溶液； 其 中， 所述 肝素裂解酶溶 液包括肝素裂解酶I溶 液、 肝素裂解酶I I溶液和肝素裂解酶I II溶液。权　利　要　求　书 1/3 页 2 CN 115032377 B 3