(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211021384.6 (22)申请日 2022.08.24 (71)申请人 哈药集团技 术中心 地址 150000 黑龙江省哈尔滨市松北区利 民西四大街68号 (72)发明人 刘铁成　姜海涛　杨蕾　朱红杰　 黄炎　张秀文　汪立法　彭健华　 杨沫　路海光　郑昊　关晓丽　 郭丽娟　王巍　吴宝峰　 (74)专利代理 机构 哈尔滨市松花江专利商标事 务所 23109 专利代理师 李红媛 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) G01N 30/06(2006.01) (54)发明名称 一种维生素D3滴剂中维生素D3有关物质的 检测方法 (57)摘要 一种维生素D3滴剂中维生素D3有关物质的 检测方法， 属于化学检测技术领域， 本发明方法： 将维生素D3滴剂内容物与无水乙醇通过震摇低 温超声充分混合， 得到溶液需低温放置离心提取 上清液； 上清液加水和正己烷充分混合萃取； 将 所述正己烷萃取溶液进行SPE净化处理， 得到维 生素D3及其杂质洗脱液， 经过高效液相色谱进行 维生素D3有关物质分析。 本发明利用维生素D3及 其相关杂质与植物油在乙醇中溶解度差别进行 提取， 再通过加水降低维生素D3及相关杂质的溶 解度用正己烷萃取， 将 含有维生素D3及其相关杂 质萃取液经过SPE固相萃取柱进一步净化处理去 除无关干扰， 并浓缩维生素D3及其有关杂质。 经 过高效液相色谱法 分析。 权利要求书1页 说明书5页 附图5页 CN 115308338 A 2022.11.08 CN 115308338 A 1.一种维生素D3滴剂中维生素D3有关物质的检测方法， 其特征在于是按照以下步骤进 行的： 将维生素D3滴剂内容物与无水乙醇通过震摇低温超声充分混合， 得到溶液低温放置 后， 离心提取上清液； 上清液加水和正己烷充分混合萃取； 将所述正己烷萃取溶液进行SPE 净化处理， 得到维生素D3及其杂质洗脱液， 经 过高效液相色谱进行维生素D3有关物质分析。 2.根据权利要求1所述的一种维生素D3滴剂中维生素D3有关物质的检测方法， 其特征 在于所述维生素D3滴剂内容物与无 水乙醇震摇时间为2 ～3min。 3.根据权利要求1所述的一种维生素D3滴剂中维生素D3有关物质的检测方法， 其特征 在于所述低温超声温度为 4～8℃， 低温超声时间10分钟功率10 0Hz。 4.根据权利要求1所述的一种维生素D3滴剂中维生素D3有关物质的检测方法， 其特征 在于所述溶 液低温放置为： 将溶 液在‑18～‑22℃温度下放置1h 。 5.根据权利要求1所述的一种维生素D3滴剂中维生素D3有关物质的检测方法， 其特征 在于所述离心提取的条件为离心转数为20 00rpm， 离心时间5mi n。 6.根据权利要求1所述的一种维生素D3滴剂中维生素D3有关物质的检测方法， 其特征 在于所述上清液、 水和正己烷的体积比为2:1:1。 7.根据权利要求1所述的一种维生素D3滴剂中维生素D3有关物质的检测方法， 其特征 在于所述上清液加水和正己烷充分混合萃 取中需充分震摇2～3 min静止分层后吸取正己烷 上清液。 8.根据权利要求1所述的一种维生素D3滴剂中维生素D3有关物质的检测方法， 其特征 在于所述正己烷萃 取液进行SP E净化处理， SP E固相萃取柱 为硅胶柱， 淋洗条件为正己烷： 乙 酸乙酯体积比为9:1， 洗脱条件乙酸乙酯。 9.根据权利要求1所述的一种维生素D3滴剂中维生素D3有关物质的检测方法， 其特征 在于所述液相色谱检测条件包括： 色谱柱填充剂为硅胶柱， 柱温为25～35℃； 以正己烷和环 己烷混合异丙醇为流动相， 正己烷： 环己烷： 异丙醇的体积比为59.3： 40： 0.7； 流速为1.0mL/ min； 检测波长为26 5nm。 10.根据权利要求1至9任意一项所述的一种维生素D3滴剂中维生素D3有关物质的检测 方法， 其特征在于经SP E净化洗脱 液经过氮气吹干正己烷复溶为待测液； 将所述待测液注入 液相色谱仪， 得到待测液液相色谱图； 将维生素D 3杂质对照品溶液注入 液相色谱仪， 得到杂 质对照品液相色谱图； 按照外标法计算待测物中维生素D3有关物质。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115308338 A 2一种维生素D3滴剂中维生素D3有关物质的检测方 法 技术领域 [0001]本发明属于化学检测技术领域， 具体涉及一种维生素D3滴剂(软胶囊)中维生素D3 有关物质的前处 理及检测方法。 背景技术 [0002]维生素D3是一类脂溶性维生素， 能作用钙、 磷代谢的激素前体， 促进机体对钙的吸 收。 维生素D滴剂是一种用于儿童佝偻病的预防和治疗的药物。 经过大量循证医学研究和基 础研究发现， 维生素D 3滴剂对癌症、 高血压、 糖尿病、 结核病、 免疫功能异常的治疗具有一定 的疗效。 我国目前市面上的维生素D3滴剂(软胶囊)多为400IU， 800IU。 滴剂/软胶囊均制成 油溶性的内容物， 维生素D3溶于植物油， 直接进行有关物质测 定， 植物油的干扰严重。 现有 的从维生素D3油中提取维生素D3的方法多为碱性条件皂化后提取测定， 但是提取步骤较 多， 皂化加热会影响有关物质检测的结果的准确性。 由于维生素D3对光、 热不稳定， 在空气 中易氧化和光解成多种产物， 其中前维生素D3为有效成分。 原维生素、 反式维生素D3、 光甾 醇、 异速甾醇和速甾醇为维生素D3主要降解杂质。 现有专利CN109490435A公开的一种 检测 复方碳酸钙咀嚼片中维生素D3杂质的方法， 现有专利CN 111239272A公开的一种检测含维生 素D3的制剂中有关杂质的方法适用范围都是检测复方碳酸钙咀嚼片 中维生素D3杂质的方 法， 目前还未有维生素D3滴剂(软胶囊)中维生素D3有关物质的报道。 发明内容 [0003]本发明提供了一种维生素D3滴剂(软胶囊)的维生素D3有关物质的前处理及检测 方法。 本发明提供 的前处理方法能够高效提取待测物中维生素D3及其相关杂质， 确保了待 测物中的维生素D3及其相关杂质提取完全， 以保证有关物质检测结果的准确性。 [0004]本发明的一种维生素D3滴剂中维生素D3有 关物质的检测方法， 是按照以下步骤进 行的： [0005]将维生素D3滴剂内容物与无水乙醇通过震摇低温超声充分混合， 得到溶液低温放 置后， 离心提取上清液； 上清液加水和正己烷充分混合萃取； 将所述正己烷萃取溶液进行 SPE净化处理， 得到维生素D 3及其杂质洗脱 液， 经过高效液相色谱进行维生素D3有关物质分 析。 [0006]进一步地， 所述维生素D3滴剂内容物与无 水乙醇震摇时间为2 ～3min。 [0007]进一步地， 所述低温超声温度为 4～8℃， 低温超声时间10分钟功率10 0Hz。 [0008]进一步地， 所述溶 液低温放置为： 将溶 液在‑18～‑22℃温度下放置1h 。 [0009]进一步地， 所述离心提取的条件为离心转数为20 00rpm， 离心时间5mi n。 [0010]进一步地， 所述上清液、 水和正己烷的体积比为2:1:1。 [0011]进一步地， 所述上清液加水和正己烷充分混合萃取中需充分震摇2～3min静止分 层后吸取正己烷上清液。 [0012]进一步地， 所述正己烷萃取液进行SPE净化 处理， SPE固相萃取柱为硅胶柱， 淋洗条说　明　书 1/5 页 3 CN 115308338 A 3