(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211022030.3 (22)申请日 2022.08.24 (71)申请人 上海和黄药业有限公司 地址 201401 上海市奉贤区肖业路38 8号 (72)发明人 孔瑶　詹常森　姜鹏　温方方　 (74)专利代理 机构 上海光华专利事务所(普通 合伙) 31219 专利代理师 许亦琳　余明伟 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) G01N 30/04(2006.01) G01N 30/06(2006.01) (54)发明名称 一种耳聋左慈丸混合粉中多种成分含量的 测定方法 (57)摘要 本发明提供一种耳聋左慈丸混合粉中多种 成分含量的测定方法， 包括： 将耳聋左慈丸加入 溶剂溶解后超声提取、 摇匀、 静置、 过滤， 取续滤 液获得的供试品溶液采用高效液相色谱法进行 检测， 确定 供试品溶液中8种指标 成分： 5‑羟甲基 糠醛、 莫诺苷、 马钱苷、 芍药苷、 1,2,3,4,6 ‑O‑五 没食子酰葡萄糖、 苯甲酸、 苯甲酰芍药苷、 丹皮酚 的含量。 本发 明提供的一种耳聋左慈丸混合粉中 多种成分含量的测定方法， 重复性良好、 精密度 良好、 准确度高、 稳定性好， 可真实反映耳聋左慈 丸混合粉中多种指标成分的质量差异， 完善耳聋 左慈丸混合粉的质量控制体系。 权利要求书2页 说明书11页 附图1页 CN 115389663 A 2022.11.25 CN 115389663 A 1.一种耳聋左慈丸混合粉中多种成分含量的测定方法， 包括： 将耳聋左慈丸混合粉加 入溶剂溶解后超声提取、 摇匀、 静置、 过滤， 取续滤液获得的供试品溶液采用高效液相色谱 法进行检测， 确定供试品溶液中8种指标成分： 5 ‑羟甲基糠醛、 莫诺苷、 马钱苷、 芍药苷、 1,2, 3,4,6‑O‑五没食子酰葡萄糖、 苯甲酸、 苯甲酰芍药苷、 丹皮酚的含量。 2.根据权利要求1所述的一种耳聋左慈丸混合粉中多种成分含量的测定方法， 其特征 在于， 所述耳聋左慈丸混合粉在制备 供试品溶液前要进行60Co‑γ射线辐照。 3.根据权利要求1所述的一种耳聋左慈丸混合粉中多种成分含量的测定方法， 其特征 在于， 所述耳聋左慈丸混合粉加入的质量与溶剂加入的体积之比为1:15 ‑25， g/mL； 和/或， 所述溶剂为70 ‑90％甲醇。 4.根据权利要求1所述的一种耳聋左慈丸混合粉中多种成分含量的测定方法， 其特征 在于， 所述超声提取的时间为30 ‑60分钟； 和 /或， 所述超声提取后要进去冷却， 精密称重后 用溶剂补足 失重； 和/或， 所述过 滤为取上清液过滤膜， 放弃初滤 液后， 取续滤 液。 5.根据权利要求1所述的一种耳聋左慈丸混合粉中多种成分含量的测定方法， 其特征 在于， 所述采用高效液相色谱法进行检测， 包括以下步骤： 1)配制对照品溶液： 将5 ‑羟甲基糠醛、 莫诺苷、 马钱苷、 芍药苷、 1,2,3,4,6 ‑O‑五没食子 酰葡萄糖、 苯甲酸、 苯甲酰芍药苷、 丹皮酚的对照品， 加入溶剂溶解并定容， 配成对照品溶 液； 2)样品检测： 采用高效液相色谱法分别检测供试品溶液和步骤1)中的对照品溶液， 比 较保留时间进行定性， 采用外标法进行定量， 确定供试品溶液中5 ‑羟甲基糠醛、 莫诺苷、 马 钱苷、 芍药苷、 1,2,3,4,6 ‑O‑五没食子酰葡萄糖、 苯甲酸、 苯甲酰芍药苷、 丹皮酚的含量。 6.根据权利要求5所述的一种耳聋左慈丸混合粉中多种成分含量的测定方法， 其特征 在于， 步骤1)中， 所述对照品溶液中5 ‑羟甲基糠醛的含量范围为0.202 ‑4.032 μg/ml， 莫诺苷 的含量范围为0.090 ‑1.800 μg/ml， 马钱苷的含量范围为0.103 ‑2.056 μg/ml， 芍药苷的含量 范围为0.12 6‑2.521 μg/ml， 1,2,3,4,6 ‑O‑五没食子酰葡萄糖的含 量范围为0.121 ‑2.424 μg/ ml， 苯甲酸的含量范围为0.018 ‑0.368 μg/ml， 苯甲酰芍药苷的含量范围为0.038 ‑0.756 μg/ ml， 丹皮酚的含量范围为0.164 ‑3.281 μg/ml。 7.根据权利要求5所述的一种耳聋左慈丸混合粉中多种成分含量的测定方法， 其特征 在于， 步骤2)中， 所述高效液相色谱法 的检测条件为： 检测 器为二极管阵列检测 器； 色谱柱 为ODS色谱柱； 检测波长为230 ‑250nm； 流动相为乙腈 ‑0.05‑0.15％磷酸水溶液， 其中， A相为 乙腈， B相为0.0 5‑0.15％磷酸水 溶液； 分析时间为90mi n； 梯度洗脱。 8.根据权利要求5所述的一种耳聋左慈丸混合粉中多种成分含量的测定方法， 其特征 在于， 步骤2)中， 所述高效液相色谱法的检测条件还包括有： 柱温为25 ‑30℃； 流速为0.5 ‑ 1.5mL/mi n； 进样量 为5‑15 μL。 9.根据权利要求7所述的一种耳聋左慈丸混合粉中多种成分含量的测定方法， 其特征 在于， 所述梯度洗脱的具体程序为： 0～12min， A相： B相体积比为5： 95 ‑9： 91； 12～31min， A相： B相体积比为9： 91 ‑19： 81； 31～35min， A相： B相体积比为19： 81 ‑19： 81； 35～50min， A相： B相体积比为19： 81 ‑27： 73；权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115389663 A 250～70min， A相： B相体积比为27： 73 ‑69： 31； 70～80mi n， A相： B相体积比为69： 31 ‑81： 19； 80～90min， A相： B相体积比为81： 19 ‑95： 5。 10.根据权利要求1 ‑9任一所述的一种耳聋左慈丸混合粉中多种成分含量的测定方法 在耳聋左慈丸混合粉的质量检测中的用途。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115389663 A 3