(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210956566.6 (22)申请日 2022.08.10 (71)申请人 广东方舟检测技 术有限公司 地址 516000 广东省惠州市仲恺高新区6号 小区外-7号地块(仅限办公) (72)发明人 秦永　黄路　 (74)专利代理 机构 北京众合诚成知识产权代理 有限公司 1 1246 专利代理师 侯程新 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) G01N 30/06(2006.01) (54)发明名称 一种肉制品氯霉素含量的检测方法 (57)摘要 本发明公开了一种肉制品氯霉素含量的检 测方法， 其属于氯霉素检测技术的技术领域， 本 发明优化了气相色谱法的前处理过程， 并提高了 该种方法的检测 效果， 节省了检测时间， 并最终 确定以水为加标溶剂、 C18为净化萃取柱、 以5mL 甲醇、 5mL氯仿、 5mL甲醇、 5mL水为萃取柱活化方 法、 2×2mL甲醇为洗脱剂、 烘箱为衍生环境、 70℃ 为衍生温度、 2 5min为衍生时间。 本发明解决了现 有技术中肉制 品氯霉素检测方法所存在的检测 效率低的技 术问题。 权利要求书1页 说明书7页 附图1页 CN 115356412 A 2022.11.18 CN 115356412 A 1.一种肉制品氯霉素含量的检测方法， 其特 征在于， 其包括如下步骤： S1： 分别将5.00g的肉糜样品与以5mL4%氯化钠及20mL乙酸乙酯配成的提取液一并加入 到100mL离心管中， 再将肉糜样品与提取液充分混合2min后， 用离心机对离心管进 行离心处 理； 然后， 再吸取离心管的上层溶 液加入到 50mL的梨型瓶中； S2： 接着， 再以10mL的乙酸 乙酯重复步骤S1的提取过程； 接着， 将梨型瓶置于45℃下水 浴旋转蒸发至干； 然后， 再用1mL的乙酸乙酯洗涤梨型瓶； 再将梨型瓶中的液体倒入10mL离 心管中， 接着， 再用4mL的4% 氯化钠溶液洗涤梨型瓶， 也一并将梨型瓶中的液体倒入离心管 中； 然后， 再将离心管置 于氮吹仪下维持5 0℃的温度， 直至将乙酸乙酯层吹干； S3： 继续向步骤S2中的提取液中加入4mL正己烷后， 再使离心机以6000r/min的速度对 离心管离心处 理5min； 然后， 再 弃掉正己烷相， 并重复此 过程一次； S4： 继续称取C18填装到6mL固相萃取柱中， 然后， 用甲醇、 三氯甲烷、 甲醇以及水各5mL进 行活化， 提取液每秒一滴过柱； 接着， 再用5mL的水淋洗C18柱， 真空吹干C18小柱后， 微氮吹干 柱内水分； 再用2mL甲醇 分两次洗脱C18柱， 将洗脱液收集于10mL的离心管中； S5： 接着， 将洗脱液在干式氮吹仪50℃下吹干； 然后， 再加入RegisBSTFA+TMCS,99: 1100uL； 漩涡30s后在70℃烘箱内密封衍生25min； 微氮吹至近干， 加 入1mL正己烷溶解衍生 物， 漩涡混合3 0s， 待测； S6： 最后， 将待测液体使用气相色谱法进行检测。 2.根据权利要求1所述的一种肉制品氯霉素含量的检测方法， 其特征在于： 在上述步骤 S1中， 离心机对离心管以6 000r/min的速度处 理5min。 3.根据权利要求1所述的一种肉制品氯霉素含量的检测方法， 其特征在于： 在步骤S3 中， 往提取液中加入4mL的正己烷后， 先漩涡混合30s， 再使用离心机对离心管进行离心处 理。 4.根据权利要求1所述的一种肉制品氯霉素含量的检测方法， 其特征在于： 在步骤S4 中， 提取液滴过柱后， 再用2mL的水洗涤离心管并将管内的液体加入到固相萃取柱中。 5.根据权利要求1所述的一种肉制品氯霉素含量的检测方法， 其特征在于： 在步骤S6 中， 气相色谱法检测的条件为： 进样量： 1uL； 分流方式： 不分流； 载气： 9 9.999%纯度的氮气。 6.根据权利要求5所述的一种肉制品氯霉素含量的检测方法， 其特征在于： 气相色谱法 的进样口温度设置为25 0℃； 检测器温度设置为3 00℃。 7.根据权利要求6所述的一种肉制品氯霉素含量的检测方法， 其特征在于： 柱阶段升温 程序设置为150℃保持1min， 并以25℃/min升温至270℃保持12min； 其柱流量设置为1mL/ min。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115356412 A 2一种肉制品氯霉素含量的检测方 法 技术领域 [0001]本发明涉及氯霉素检测技术的技术领域， 特别是涉及一种肉制品氯霉素含量的检 测方法。 背景技术 [0002]氯霉素(CAP)是一种广谱抗生素， 其可以抑制大多数的厌氧拟杆菌、 革兰氏阴、 阳 性细菌和衣原体等， 因而， CAP具有良好的抗菌能力。 由于CAP在临床上对 人和动物的细菌性 疾病均具有很好的治疗效果， 而且， 其还同时具有价格低廉、 药效稳定和良好的抗菌性等优 点。 所以， CAP在较长的时间中常用于畜牧业的饲料添加剂。 但不久即发现CAP中带有硝基， 从而导致其具有一定的毒性。 个别病人因为使用氯霉素导致其人体骨骼的造血功能受损而 患上再生障碍性贫血， 因此， 该 因素限制了CAP在临床上的继续使用。 同时， 又发现其可以残 留在动物性食品中， 以对人体造成一定的伤害。 所以， 许多国家 规定在食品动物饲养中禁止 使用CAP， 并要求对 出售的家禽的肉制品进 行CAP含量的检测。 在许多国家的相关规定中， 氯 霉素的残 留量要求控制在0~10ng/g内。 美国和芬兰规定氯霉素不得检出， 欧共体规定其应 低于10ng/g， 而我国则规定为2ng/g。 基于此， 中国专利CN111458438A公开了一种家禽氯霉 素含量的检测方法， 其通过对肉制品均浆后的提取、 净化、 衍生化的前处理操作， 并在衍生 化处理的过程中更改衍生试剂和催 化剂， 向第二具塞离心管内依次加入正己烷 120‑150 μL、 硅烷化试剂120 ‑150 μL， 并进 行均质处理； 将均质处理结束后的第二具塞离心管放入干燥箱 内反应， 反应结束后对第二具塞离心管内的液体进行氮气吹干处理； 以减轻气相色谱法在 检测之前对检测液的预处 理步骤对检测人员的安全造成威胁。 [0003]然而， 上述所公开的一种家禽氯霉素含量的检测方法还存在检出限低、 灵敏度低、 稳定性差以及回收率低的技术问题。 具体的， 在上述所公开的一种家禽氯霉素含量的检测 方法其主要应用了正己烷； 所述正己烷一种低毒的无色液体， 而硅烷化试剂又称硅烷保护 剂， 检测人员做好防护措施， 带好口罩穿好防护服即可有效的对上述材料 的副作用起到规 避作用， 因此， 减轻了气相色谱法在检测之前需对检测液进行预处理步骤而对检测人员的 安全造成威胁的不良情况。 此外， 上述的检测方法中还使用了铝珠浴， 其也能减少微生物对 材料的污染。 但是， 上述所公开的检测方法在实际的应用中， 还存在检出限低的、 灵敏度低、 稳定性差以及回收率低的缺陷， 在大规模的批量筛选中容易出现假阳性或假阴性的缺陷， 其定量效果 不好， 从而导 致了其检测效率低的情况。 发明内容 [0004]基于此， 有必要针对现有技术中肉制品氯霉素检测方法所存在的检测效率低的技 术问题， 提供一种肉制品氯霉素含量的检测方法。 [0005]一种肉制品氯霉素含量的检测方法， 其包括如下步骤： S1： 分别将5.00g的肉糜样品与以5mL4%氯化钠及20mL乙酸乙酯配 成的提取液一并 加入到100 mL离心管中， 再将肉糜样品与提取液充分混合2min后， 用离心机对离心管进行离说　明　书 1/7 页 3 CN 115356412 A 3