(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 20221098946 6.3 (22)申请日 2022.08.17 (71)申请人 湖南新大陆生物技 术有限公司 地址 410000 湖南省长 沙市长沙高新开发 区谷苑路229号湖南麓谷国际医疗器 械产业园B4栋7层701号房 (72)发明人 陈云　罗水华　林芳　陈文　 (74)专利代理 机构 广东卓林知识产权代理事务 所(普通合伙) 44625 专利代理师 岳帅 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) G01N 30/06(2006.01) G01N 30/34(2006.01) G01N 30/86(2006.01)G01N 30/88(2006.01) (54)发明名称 一种脂溶性维生素的检测试剂盒及检测方 法 (57)摘要 本发明提供的一种脂溶性维生素的检测试 剂盒， 包括： 标准品、 内标溶液、 液相色谱洗脱液、 蛋白沉淀剂、 复溶剂和耗材； 标准品用于配置标 准浓度的脂溶性维生素溶液， 脂溶性维生素为维 生素A、 25 ‑羟基维生素D2、 25 ‑羟基维生素D3、 维 生素E、 维生素K 1和维生素K2； 标准品的外表面标 记有用于配置的浓度和需加入复溶剂的体积， 标 准品内含有与标示浓度匹配的定量的脂溶性维 生素的冻干粉， 加入标示体积的复溶剂后即可配 置为标示浓度的脂溶性维生素溶液； 标准品至少 有六个， 标示浓度从低到高； 复溶剂为不含待测 脂溶性维生素的空白人血清基质。 本发明提供的 一种脂溶性维生素的检测试剂盒， 能够降低检测 误差， 实现对维生素A、 D2、 D3、 E、 K1、 K2的同时检 测。 权利要求书1页 说明书4页 附图1页 CN 115372511 A 2022.11.22 CN 115372511 A 1.一种脂溶性维生素的检测试剂盒， 其特征在于， 包括： 标准品、 内标溶液、 液相色谱洗 脱液、 蛋白沉淀剂、 复溶剂和耗材； 所述标准品用于配置标准浓度的脂溶性维生素溶液， 所述脂溶性维生素为维生素A、 25‑羟基维生素D2、 25 ‑羟基维生素D3、 维生素E、 维生素 K1和维生素 K2； 所述标准品的外表面标记有用于配置的浓度和需加入 复溶剂的体积， 所述标准品内含 有与标示浓度匹配的定量的脂溶性维生素的冻干粉， 加入标示体积的复溶剂后即可配置为 标示浓度的脂溶性维生素 溶液； 所述标准品至少有六个， 标示浓度从低到高； 所述复溶剂为 不含待测脂溶性维生素的空白人 血清基质。 2.根据权利要求1所述的一种脂溶性维生素的检测试剂 盒， 其特征在于， 所述液相色谱 洗脱液包括流动相A和流动相B， 流动相A为标准浓度的甲酸水溶液， 流动相B为标准浓度的 甲酸甲醇溶 液。 3.根据权利要求1所述的一种脂溶性维生素的检测试剂 盒， 其特征在于， 所述内标溶液 由含有VA1‑d6、 VD3‑d6、 VD2‑d6、 VK1‑d4和VE‑d6的同位素内标 溶液组成。 4.根据权利要求1所述的一种脂溶性维生素的检测试剂 盒， 其特征在于， 所述蛋白沉淀 剂为乙腈和异丙醇的混合液， 所述乙腈和异丙醇的体积比为1:1。 5.一种脂溶性维生素的检测方法， 其特征在于， 采用如权利要求1 ‑3任一项所述的检测 试剂盒进行检测， 分别向每个标准品中加入标示体积的复溶剂， 从而配置成标示浓度的脂溶性维生素溶 液； 分别向上述配置的每 份脂溶性维生素 溶液中加入等 量的内标 溶液和蛋白沉淀剂； 随机抽取至少3个标准品使用液质联用仪检测， 并拟合每一种脂溶性维生素所对应的 标准曲线方程； 使用液质联用仪以及得到的标准曲线方程检测剩余标准品中脂溶性维生素的浓度， 判 断检测结果是否在预设的范围内， 如果是， 对待测样品中的脂溶性维生素进行检测。 6.根据权利要求5所述的一种脂溶性维生素的检测方法， 其特征在于， 标准品和待测样 品中加入的内标 溶液的量相同。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115372511 A 2一种脂溶性维生素的检测试剂盒及检测方 法 技术领域 [0001]本发明属于维生素检测领域， 特别涉及一种脂溶性维生素的检测试剂盒及检测方 法。 背景技术 [0002]维生素(vitamin)是人和动 物为维持正常的生理功能而必需从食物中获得的一类 有机物质， 在人体生长和代谢过程中发挥着极其重要的作用。 机体缺 乏维生素将引起代谢 障碍， 并发生各种疾病， 这类疾病统称为维生素缺 乏症。 目前， 根据溶解性可将维生素分为 脂溶性维生素和水溶性维生素两大类， 水溶性维生素包括B族维生素和维生素C等； 脂溶性 维生素是一种含有环结构和长 脂肪族烃链的一组维生素， 包括维生素A、 D、 E和K等。 [0003]维生素A具有调节表皮及角质层新陈代谢的功效， 可以抗衰老， 去皱纹， 能减少皮 脂溢出而使皮肤有弹性， 同时淡化斑点， 柔润肌肤； 有助于 保护表皮、 黏膜不受细菌侵害， 预 防皮肤癌， 预防夜盲症、 视力衰退， 治疗眼疾， 还 可以促进骨骼 生长， 帮助 牙齿生长、 再生， 有 效预防肥 胖， 保持女性 苗条的身材， 可有助于防治 脱发。 [0004]25‑羟基维生素D2、 D3为固醇类衍生物， 具抗佝偻病作用， 又称 抗佝偻病维生素。 维 生素D可维持血清钙磷浓度的稳定， 血钙浓度低时， 诱导甲状旁腺素分泌， 将其释放至肾及 骨细胞。 维生素D促进怀孕及哺乳期 输送钙到子体1位羧基化酶除受血清中钙磷浓度及 膳食 中钙磷供给量的影响外， 还受激素的影响， 停经后的妇女VD3浓度减低， 易有骨质软化等症 状。 VD3对小肠作用为诱导合成cabp.1， 与小肠细胞的受体形成复合体进入细胞核染色体 上， 促使cabp的信使mRNA的合 成， 此mRNA在胞浆内转录为cabp。 骨的矿物化作用的机理尚未 阐明， 在现阶段中只了解到维生素D促进钙磷的吸收， 又可将钙磷从骨中动员出来， 使血浆 钙、 磷达到正常值， 促使骨的矿物化， 并不断更新。 [0005]维生素E能促进生殖。 它能促进性激素分泌， 使男子精子活力和数量增加； 使女子 雌性激素浓度增高， 提高生育能力， 预防流产。 维生素E缺乏时会出现睾丸萎缩和上皮细胞 变性， 孕育异常， 在临床上常用维生素E治疗先兆流产和习惯性 流产。 [0006]维生素K1是叶绿基甲萘 醌， 主要用于因缺乏维生素K出现的出血症状。 维生素K1的 主要作用为促进血凝， 促进肝脏中凝血酶原的合成， 增加胃肠道的蠕动及分泌功能， 还具有 缓解支气管痉挛， 止痛的作用。 维生素K1主要用于凝血酶过低症、 维生素K1缺乏症、 新生儿 自然出血症、 防止慢性腹泻导 致的出血、 水杨酸钠导 致的低凝血酶原血症。 [0007]目前， 脂溶性维生素检测常用的方法为液相色谱法， 但是液相色谱法由于检出限 有限， 主要用于维生素含量较高的样品测定， 一般只能进行单组份或含量较高的几个组分 的同时测定。 目前的液相色谱 ‑质谱法只能对一种或两种维生素做定性定量分析， 由于血 浆/血清成分复杂， 且维生素含量较低， 在进行定量分析时， 杂质严重影响检测结果的准确 性， 因此， 为了降低检测时的基质效应， 使用者都是对不同的维生素逐个检测分析， 存在检 测成本高、 操作复杂、 耗费时间长和 检测需要的血量多等缺陷。 因此急需一种简单快捷、 灵 敏度高、 准确性 好的方法实现对维生素A、 D、 E、 K1的同时检测。说　明　书 1/4 页 3 CN 115372511 A 3