(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210866670.6 (22)申请日 2022.07.22 (71)申请人 浙江省疾病预防控制中心 地址 310051 浙江省杭州市滨江区滨 盛路 3399号 (72)发明人 胡争艳　吴平谷　俞莎　王军淋　 蔡增轩　应英　王立媛　王天娇　 汤鋆　 (74)专利代理 机构 北京高沃 律师事务所 1 1569 专利代理师 易昂 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) G01N 30/06(2006.01) G01N 30/14(2006.01) G01N 30/72(2006.01)G01N 30/86(2006.01) (54)发明名称 一种茶叶和/或咖啡中丙烯 酰胺和甲基咪唑 类化合物的同时检测方法 (57)摘要 本发明属于分析检测技术领域， 具体涉及一 种茶叶和/或咖啡中丙烯酰胺和甲基咪唑类化合 物的同时检测方法。 本发明将茶叶和/或咖啡样 品粉碎后， 通过碱性溶液提取， 乙腈/乙酸乙酯混 合溶液进行液液萃取， 采用QuEChERS方法净化， ChromCore  Biphenyl色谱柱分离后进行LC ‑MS/ MS分析， 实现了茶叶及咖啡样品中丙烯酰胺、 1 ‑ 甲基咪唑、 2 ‑甲基咪唑和4 ‑甲基咪唑的同时快速 检测。 茶叶和咖啡的制作均包含热加工过程， 容 易产生丙烯 酰胺和甲基咪唑类化合物， 且茶叶和 咖啡基质比较复杂， 测试时干扰物质多， 因此， 本 发明建立茶叶和/或咖啡中丙烯酰胺和3种甲基 咪唑类化合物的同时检测方法， 具有重大的现实 意义。 权利要求书1页 说明书12页 附图3页 CN 115015443 A 2022.09.06 CN 115015443 A 1.一种茶叶和/或咖 啡中丙烯酰胺和甲基咪唑类化合物的同时检测方法， 其特征在于， 包括以下步骤： 将茶叶和/或咖啡样品粉碎， 得到样品粉末； 将所述样品粉末依次进行提取、 萃取、 净化和浓 缩， 得到供 试品溶液； 将所述供试品溶液进行液相色谱 ‑质谱分析， 根据预定的标准曲线和得到的供试品的 质谱图， 分别得到所述丙烯酰胺和甲基咪唑类化合物的含量； 所述甲基咪唑类化合物包括 1‑甲基咪唑、 2 ‑甲基咪唑和4 ‑甲基咪唑； 所述液相色谱 ‑质谱分析的液相色谱条件包括： 色谱柱为联苯基色谱柱； 流动相A为甲 酸水溶液， 所述甲酸水溶液中甲酸的体积分数为0.1～0.3％， 流动相B为甲醇， 梯度洗脱； 柱 温为25～3 5℃， 进样量 为1～10 μL， 流速为0.2 ～0.6mL/mi n； 所述液相色谱 ‑质谱分析的质谱条件包括： 离子源为电喷雾离子源； 离子源温度： 150 ℃； 毛细管电压： 2.5kV； 脱溶剂温度： 500℃； 扫描 方式： 正离子扫描； 检测方式： 多反应监测； 雾化气、 气帘气和辅助加热气均为氮气； 碰撞气： 氩气。 2.根据权利要求1所述的同时检测方法， 其特征在于， 所述提取的提取液包括碱性溶 液。 3.根据权利要求2所述的同时检测方法， 其特征在于， 所述碱性溶液包括氢氧化钠溶液 和/或氢氧化钾溶 液， 所述碱性溶 液的浓度为0.01～0.1mo l/L。 4.根据权利要求1～3任一项所述的同时检测方法， 其特征在于， 所述提取液的体积与 样品粉末的质量的比值 为3～10mL： 0.4～0.6g。 5.根据权利要求1所述的同时检测方法， 其特征在于， 所述萃取的萃取剂包括乙腈和乙 酸乙酯的混合溶 液。 6.根据权利要求5所述的同时检测方法， 其特征在于， 所述乙腈和乙酸乙酯的混合溶液 中乙腈和乙酸乙酯的体积比为1： 1～ 9。 7.根据权利要求1所述的同时检测方法， 其特征在于， 所述萃取使用的萃取剂与提取使 用的提取 液的体积比为5～ 25： 3～10 。 8.根据权利要求1或5所述的同时检测方法， 其特征在于， 所述萃取的过程还包括加入 无水硫酸镁和氯化钠。 9.根据权利要求1所述的同时检测方法， 其特征在于， 所述净化使用的净化材料包括： N‑丙基乙二胺吸附剂、 无水硫酸镁和C18吸附剂， 所述N ‑丙基乙二胺吸附剂、 无水硫酸镁、 C18吸附剂与样品粉末的质量比为0.0 5～0.3： 0.3～1.5： 0.0 5～0.3： 0.4～0.6 。 10.根据权利要求1所述的同时检测方法， 其特征在于， 所述联苯基色谱柱包括 ChromCoreBiphenyl， 规格为3 μm， 3.0 ×150mm。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115015443 A 2一种茶叶和/或咖啡中丙烯酰胺和甲 基咪唑类化合物的同时 检测方法 技术领域 [0001]本发明属于分析检测技术领域， 具体涉及一种茶叶和/或咖啡中丙烯酰胺和甲基 咪唑类化 合物的同时检测方法。 背景技术 [0002]食品的热加工过程中， 发生的主要化学变化美拉德反应产生的一系列特有的风味 物质构成了相关食品特有风味的基础， 但是伴随着食品热加工过程中成香成色反应的进 行， 会产生一些伴生危害物， 如丙烯酰胺、 甲基咪唑类化合物等， 是当前食品安全领域的研 究热点。 其中， 丙烯酸胺属于2A级致癌物， 目前已经证实对动物有生殖毒性、 致癌性和神经 毒性等。 甲基咪唑类副产物主要包括4 ‑甲基咪唑(4 ‑MEI)、 2‑甲基咪唑(2 ‑MEI)和1‑甲基咪 唑(1‑MEI)， 是一类极易溶于水的化合物， 其中， 4 ‑MEI和2‑MEI具有致癌性， 属于2B级致癌 物。 由于食品种类多样， 基质复杂， 目前已报道的研究大多 无法实现丙烯酰胺和甲基咪唑类 化合物的同时检测， 因此若需要测定样品中丙烯酰胺和3种甲基咪唑类化合物的含量需分 别进行样品前处 理后再分别测定 。 [0003]茶叶、 咖啡和可可为世界三大无酒精饮料， 其中在我国饮用较多的为茶叶和咖啡 两种饮料， 其制作均包含热加工过程， 且其样品基质复杂， 对于其中丙烯酰胺、 甲基咪唑类 化合物的检测均较为复杂， 前 处理过程耗时耗力。 目前的检测方法， 均无法实现茶叶和咖啡 中丙烯酰胺、 1 ‑甲基咪唑、 2 ‑甲基咪唑和4 ‑甲基咪唑的同时检测。 发明内容 [0004]有鉴于此， 本发明的目的在于提供一种茶叶和/或咖啡中丙烯酰胺和甲基咪唑类 化合物的同时检测方法。 采用本发明的方法对茶叶和/或咖啡进 行处理， 能够实现样品中丙 烯酰胺、 1‑甲基咪唑、 2 ‑甲基咪唑和4 ‑甲基咪唑的同时检测， 避免了目前实验中将丙烯酰胺 与甲基咪唑类化 合物分开检测的繁琐实验步骤， 提高了检测效率。 [0005]为了实现上述发明目的， 本发明提供以下技 术方案： [0006]本发明提供了一种茶叶和/或咖啡中丙烯酰胺和甲基咪唑类化合物的同时检测方 法， 包括以下步骤： [0007]将茶叶和/或咖啡样品粉碎， 得到样品粉末； [0008]将所述样品粉末依次进行提取、 萃取、 净化和浓 缩， 得到供 试品溶液； [0009]将所述供试品溶液进行液相色谱 ‑质谱分析， 根据预定 的标准曲线和得到 的供试 品的质谱图， 分别得到所述丙烯酰胺和甲基咪唑类化合物的含量； 所述甲基咪唑类化合物 包括1‑甲基咪唑、 2 ‑甲基咪唑和4 ‑甲基咪唑； [0010]所述液相色谱 ‑质谱分析的液相色谱条件包括： 色谱柱为联苯基色谱柱； 流动相A 为甲酸水溶液， 所述甲酸水溶液中甲酸的体积分数为0.1～0.3％， 流动相B为甲醇， 梯度洗 脱； 柱温为25～3 5℃， 进样量 为1～10 μL， 流速为0.2 ～0.6mL/mi n；说　明　书 1/12 页 3 CN 115015443 A 3