(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210623483.5 (22)申请日 2022.06.02 (71)申请人 上海仁度生物科技股份有限公司 地址 201201 上海市浦东 新区张江高科技 园区东区瑞庆路528号15幢乙号 (72)发明人 居金良　金浩　赵玉军　毛雅辰　 张家铨　石宝岭　 (74)专利代理 机构 上海汉声知识产权代理有限 公司 3123 6 专利代理师 胡晶 (51)Int.Cl. C12Q 1/6848(2018.01) C12M 1/34(2006.01) C12M 1/24(2006.01) C12M 1/00(2006.01) (54)发明名称 一种核酸检测方法 (57)摘要 本发明公开了一种核酸检测方法， 公开了在 自动化核酸检测系统中反应容器内隔离加液的 方法， 该方法包含了石蜡加热装置使石蜡保持在 液态， 通过自动化加样枪将液态石蜡注入被恒温 加热的反应容器并保持液态状， 石蜡为轻质油性 密度小， 浮在核酸反应液的上层， 再直接加入其 它组分的反应液体通过重力渗透穿过石蜡隔离 层和容器内核酸反应液混合， 有效防止反应过程 气溶胶的扩散， 并通过使用黑色石蜡阻止外界光 进入暗室干扰光学数据检测， 在检测完成后常温 时石蜡保持在固体状态可封住反应容器口阻止 反应容器内液体溢出。 权利要求书1页 说明书4页 附图3页 CN 114958979 A 2022.08.30 CN 114958979 A 1.一种核酸检测方法， 其特 征在于， 包括： 在核酸提取纯化后， 将固体 ‑液体的相变温度低于核酸反应温度的石蜡加入反应容器 中， 以实现反应容器内的核酸液体与外部环境的隔离， 防止核酸液体溢出或蒸发； 所述石蜡 为低密度轻物质； 在进行核酸恒温扩增反应时， 所述石蜡可被反应添加液从上向下穿透而过， 实现反应 添加液与核酸液体混合反应的同时， 封堵反应容器， 防止反应液扩散出反应容器而造成的 污染。 2.如权利要求1所述的核酸检测方法， 其特征在于， 所述石蜡的固体 ‑液体的相变温度 范围为35～40℃， 保证在正常环境温度时为固体， 在反应温度时为液体。 3.如权利要求1所述的核酸检测方法， 其特 征在于， 用于自动化核酸检测系统； 在进行核酸检测前， 将所述石蜡独立封装于适用于直接加热的容器， 并将所述容器放 置于自动化核酸检测系统中的加热位置， 进 行预融化， 以便在核酸提取纯化后， 通过自动化 核酸检测系统的自动化移液器将液态石蜡加入反应容器。 4.如权利要求1所述的核酸检测方法， 其特征在于， 所述石蜡为黑色， 在进行荧光数据 采集时， 无需将反应容器另置 于暗室中， 就可 形成防止 外界光干扰的封闭环境。 5.如权利要求1所述的核酸检测方法， 其特征在于， 还包括： 在进行荧光数据采集时， 将 黑色的低密度轻质石蜡加入反应容器， 以形成防止外界光干扰的封闭环境， 无需将反应容 器另置于暗室中。 6.如权利要求1或5所述的核酸检测方法， 其特征在于， 还包括： 在光学数据测量结束 后， 将固体 ‑液体的相变温度高于核酸反应温度的石蜡加入反应容器中， 以固态石蜡封堵反 应容器， 以防止 丢弃反应容器时的液体流出。 7.如权利要求6所述的核酸检测方法， 其特征在于， 所述固体 ‑液体的相变温度高于核 酸反应温度的石蜡的相变温度范围为5 0～80℃。 8.如权利要求6所述的核酸检测方法， 其特征在于， 将不同颜色、 不同固体 ‑液体相变温 度的石蜡区分放置在不同的加热区域， 按照核酸检测实验流程， 在不同阶段选取相应的石 蜡， 添加至反应容器。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114958979 A 2一种核酸检测方 法 技术领域 [0001]本发明属于化学和生物实验的技术领域， 尤其涉及一种核酸检测方法， 应用于自 动化核酸检测系统， 或人工核酸检测。 背景技术 [0002]在化学和生物实验过程中， 需要采取隔离反应容器中的液体溢出或蒸发的气溶胶 扩散的措施， 防止因溢出和扩散产生对环境、 人体、 交叉 的污染。 根据反应体系的预设整个 实验过程中反应容器需要在不同的时间段加入不同组分的液体， 这样就会出现 隔离、 打开、 再隔离容器的操作过程， 目前反应容器的隔离常用的方法有下列几种： [0003]第一种方法是对反应容器加盖或封膜， 主要应用于人工实验操作， 在实验过程中 手工加盖或封膜， 手工开盖或撕膜。 [0004]第二种方法是利用液态的轻质矿物油上浮在反应液体上方隔绝反应容器内的反 应液体， 主要应用于自动化设备， 通过自动化设备的移液部件对反应容器加或抽矿物油， 可 以省略加盖或封膜、 开盖或撕膜的动作。 [0005]第三种方法是通过一种低密度的化学组合物其在反应中为液体、 在反应终止后通 过化学变化或 温度变化成为固体上浮在反应液体上 方隔绝反应容器内的反应液体。 [0006]同时， 在核酸扩增检测过程中， 光学数据的测定是在封闭的暗室中进行， 防止外界 光的干扰， 这就需要人工转入光学测量模块或由专用的机械手转入光学测量模块的暗室 中。 并且聚合酶链式反应(简称PCR)各 阶段最高温达约94℃， 核酸扩增液会沸腾翻滚， 液体 矿物油或高温时为液体 状的低密度的化学组合物无法有效隔离， 造成飞溅和蒸发。 [0007]目前在核酸的自动化检测过程的实际应用中， 采用上述的一种或几种组合方法对 反应容器进行隔离， 但自动化仪器很难自动完成加盖或封膜操作， 如果容器加盖或封膜需 要由自动化仪器完成， 需要为 这一个步骤， 增 加比较复杂的机 械结构， 会增大成本 。 [0008]在现有的核酸自动化检测系统中存在以下问题和缺 点： [0009]1.大多数自动化核酸检测设备需要人工参与加盖或封膜， 开盖或撕膜， 自动化程 度不高； [0010]2.自动化核酸检测设备增加加盖或封膜， 开盖或撕膜的自动化结构， 会大幅增加 制造成本和故障率； [0011]3.自动化核酸检测设备需增加将反应管转移到暗室的特制机械手， 以及暗室开闭 伸缩等机 械结构和电路控制， 同样增 加了设备的制造成本和故障率。 发明内容 [0012]本发明的目的是提供一种核酸检测方法， 提供一种通过低密度轻质、 在特定温度 下可实现固态 ‑液态相变转换的石蜡隔离反应容器内的核酸液体， 应用于恒温(低于60℃) 扩增反应方法的核酸自动化检测过程， 在自动化核酸检测过程中可以通过现有的加液系统 对反应管加液态石蜡实现核酸液体的隔离 。说　明　书 1/4 页 3 CN 114958979 A 3