(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210623198.3 (22)申请日 2022.06.01 (71)申请人 深圳华因康基因科技有限公司 地址 518000 广东省深圳市南 山区粤海街 道高新区社区高新南环路46号留学生 创业大厦二期19层1901 (72)发明人 盛司潼　张晓英　黄思强　 (74)专利代理 机构 北京远智汇知识产权代理有 限公司 1 1659 专利代理师 徐浩 (51)Int.Cl. C12Q 1/6886(2018.01) C12Q 1/6858(2018.01) C12Q 1/6806(2018.01) C40B 50/06(2006.01)C12Q 1/6869(2018.01) C12N 15/11(2006.01) C12M 1/34(2006.01) C12M 1/00(2006.01) (54)发明名称 一种用于检测BRAF基因的引物、 试剂盒及检 测方法 (57)摘要 本发明公开了一种用于检测BRAF基因的引 物、 试剂盒及检测方法。 所述引物用于扩增BRAF 基因目标区域， 所述引物中至少有一个引物上含 有可断裂位点和/或可切除序列， 所述可断裂位 点包括核糖核苷酸， 所述可切除序列包括RNA序 列和/或限制性内切酶识别序列。 本发明巧妙设 计用于检测BRAF基因的引物， 在对BRAF基因中的 目标区域进行扩增后， 将可断裂位点或可切除序 列带入扩增产物中， 使 得扩增产物在后续的切割 和连接能够在同一个反应体系中进行， 简化了 BRAF基因突变 检测的步骤， 提高了 检测效率。 权利要求书2页 说明书11页 序列表2页 附图2页 CN 115011692 A 2022.09.06 CN 115011692 A 1.一种用于检测BRAF基因的引物， 其特 征在于， 所述引物用于扩增BRAF基因目标区域； 所述引物中至少有一个引物上含有可断裂位 点和/或可切除序列； 所述可断裂位 点包括核糖核苷酸； 所述可切除序列包括RNA序列和/或限制性内切酶识别序列。 2.根据权利要求1所述的用于检测BRAF基因的引物， 其特征在于， 所述引物的核酸序列 包括SEQ ID NO.1和SEQ  ID NO.2所示的序列。 3.权利要求1或2所述的用于检测BRAF基因的引物在制备检测BRAF基因的产品中的应 用。 4.一种检测BRAF基因突变的试剂盒， 其特征在于， 所述试剂盒包括权利要求1或2所述 的用于检测BRAF基因的引物； 优选地， 所述试剂盒还 包括断裂剂、 第一接 头、 第二接 头、 连接酶和连接酶 缓冲液； 优选地， 所述断裂剂用于对所述用于检测BRAF基因的引物的扩增产物中的可断裂位点 和/或可切除序列进行切割， 形成第一粘性末端； 优选地， 所述第一接 头含有与所述第一粘性末端完全互补配对的第二粘性末端； 优选地， 所述第二接 头的一端为单碱基突出末端； 优选地， 所述单碱基突出末端为T， 其 位于3’端。 5.根据权利要求4所述的检测BRAF基因突变的试剂 盒， 其特征在于， 所述第一接头为双 链核酸分子； 优选地， 所述第二粘性末端所在链的5 ’末端含生物素 标记； 优选地， 所述第二接头为双链核酸分子， 所述单碱基突出末端所在链 的5’末端含生物 素标记； 优选地， 所述第一接 头的核酸序列包括SEQ  ID NO.5和SEQ  ID NO.6所示的序列； 优选地， 所述第二接 头的核酸序列包括SEQ  ID NO:7和SEQ  ID NO.8所示的序列； 优选地， 所述断裂剂包括RNase  H、 USER酶 或限制性内切酶。 6.一种以非疾病诊断治疗目的 的BRAF基因突变 检测方法， 其特 征在于， 所述方法包括： 利用权利要求 4或5所述的检测BRAF基因突变的试剂盒对样本进行检测。 7.根据权利要求6所述的以非疾病诊断治疗目的的BRAF基因突变检测方法， 其特征在 于， 所述方法包括以下步骤： (1)利用所述用于检测BRAF基因的引物， 对待测序样本中的目标区域进行扩增， 得到扩 增产物； (2)将扩增产物与断裂剂、 第一接头、 第二接头、 连接酶和连接酶缓冲液混合， 进行切割 和连接反应， 得文库分子； (3)扩增文库分子， 得到扩增产物； (4)对扩增产物进行测序， 得目标区域的序列信息 。 8.根据权利要求6或7所述的以非疾病 诊断治疗目的的BRAF基因突变检测方法， 其特征 在于， 所述断裂剂包括RNase  H、 USER酶 或限制性内切酶； 优选地， 所述目标区域 为BRAF基因的Exo n16。 9.一种以非疾病诊断治疗目的的BRAF基因突变检测装置， 其特征在于， 所述装置利用 权利要求 4或5所述的检测BRAF基因突变的试剂盒对样本进行检测；权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115011692 A 2优选地， 所述装置包括目标区域扩增单元、 文库构建单元、 文库扩增单元和文库测序 单 元； 所述目标区域扩增单 元用于执 行包括： 利用所述用于检测BRAF基因的引物， 对待测序样本中的目标区域进行扩增， 得到扩增 产物； 所述文库构建单 元用于执 行包括： 将扩增产物与断裂剂、 第一接头、 第二接头、 连接酶和连接酶缓冲液混合， 进行切割和 连接反应， 得文库分子； 所述文库扩增单 元用于执 行包括： 扩增文库分子， 得到扩增产物； 所述文库测序单 元用于执 行包括： 对扩增产物进行测序， 得目标区域的序列信息 。 10.根据权利要求9所述的以非疾病 诊断治疗目的的BRAF基因突变检测装置， 其特征在 于， 所述断裂剂包括RNase  H、 USER酶 或限制性内切酶； 优选地， 所述目标区域 为BRAF基因的Exo n16。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115011692 A 3