(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210688600.6 (22)申请日 2022.06.17 (66)本国优先权数据 202110681413.0 2021.0 6.18 CN (71)申请人 青岛卓云海智医疗科技有限公司 地址 266199 山东省青岛市李沧区九水东 路266号10号楼 申请人 山东大学 (72)发明人 马金龙　陈子江　吕跃　刘洪彬　 路钢　 (74)专利代理 机构 北京展翅星 辰知识产权代理 有限公司 1 1693 专利代理师 魏威 (51)Int.Cl. C12Q 1/6883(2018.01)C12Q 1/6851(2018.01) C12Q 1/6837(2018.01) C12N 15/11(2006.01) C12M 1/34(2006.01) C12M 1/00(2006.01) (54)发明名称 卵巢激活的分子标记物及其在基因芯片和 药物筛选的应用 (57)摘要 本发明提供了卵巢激活的分子标记物组合， 以及其在制备用于研究卵巢激活或检测卵巢激 活异常相关疾病的试剂盒或基因芯片中的用途。 本发明还提供了所述分子标记物组合或所述试 剂盒或基因芯片在用于筛选治疗卵巢激活异常 相关疾病的药物中的方法。 本发 明还提供了姜黄 素用于改善哺乳动物包括人类的卵巢损伤相关 疾病的方法， 以及提供了姜黄素对离体卵巢或卵 巢组织进行体 外培养的方法和培 养基。 权利要求书1页 说明书16页 附图10页 CN 115491412 A 2022.12.20 CN 115491412 A 1.用于研究卵巢激活或检测卵巢激活异常相关疾病(例如为卵巢早衰)的试剂盒或装 置， 其中包括测量以下基因的组合的试剂： Kdr、 Casp3、 Pten、 Bcl2L1、 Foxo1和Foxo3 。 2.权利要求1所述的试剂盒或装置， 其中所述基因的组合还包括以下基因中的一个或 多个： Gpr149、 Ms4A1、 Bmp15、 Pcyt1B、 Cyp19A1、 Lepr、 Prlr、 Gdf9、 Zp1、 Rspo2、 Eef2K、 Zp3和 Foxc1， 优选的， 其中所述基因的组合还 包括以下基因中的一个或多个： 3.权利要求1或2所述的试剂盒或装置， 其中还包括以下基因的组合作为内参基因： Actb、 B2m和18 S。 4.权利要求1所述的试剂盒或装置， 其中测量基因的试剂为通过检测所述基因的mRNA 的存在或其数量的试剂， 例如为通过RT ‑PCR检测样品中编码所述基因的mRNA的存在或其数 量的试剂。 5.权利要求1所述的试剂盒或装置， 其为研究卵巢激活或检测卵巢激活异常相关疾病 的基因芯片或实时荧 光定量PCR试剂盒。 6.以下基因的组合在用于制备研究卵巢激活或检测卵巢激活异常相关疾病的试剂盒 或装置中的应用： Kdr、 Casp3、 Pten、 Bcl2L1、 Foxo1和Foxo3 。 7.权利要求6所述的应用， 其中所述基因的组合还包括以下基因中的一个或多个： Gpr149、 Ms4A1、 Bmp15、 Pcyt1B、 Cyp19 A1、 Lepr、 Prlr、 Gdf9、 Zp1、 Rspo2、 Eef2K、 Zp3和Foxc1， 优选的， 其中所述基因的组合还 包括以下基因中的一个或多个： 8.权利要求6或7所述的应用， 其中还包括以下基因的组合作为内参基因： Actb、 B2m和 18S。 9.权利要求1 ‑5中任一项所述的试剂盒或装置或权利要求6 ‑8中任一项中定义的基因 的组合在用于 筛选治疗卵巢激活异常相关疾病的药物中的应用。 10.权利要求9所述的应用， 其中所述卵巢激活异常相关疾病为卵巢 早衰(POI)。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115491412 A 2卵巢激活的分子标记物及其在基因芯片和药物筛选的应用 [0001]本申请要求2021年6月18日提交的、 申请号为202110681413.0、 发明名称为 “卵巢 激活的分子标记物及其在基因芯片和药物筛选的应用 ”的中国专利申请的优先权， 其全部 内容通过引用结合在本申请中。 技术领域 [0002]本发明涉及分子生物学和疾病基因研究和诊断领域。 具体的， 本发明涉及在卵巢 激活的基因表达分析的研究中的基因组合， 以及其在基因芯片制备和治疗卵巢激活相关的 疾病的药物筛 选中的应用。 背景技术 [0003]在哺乳动物的卵巢中， 原始卵泡是最基本 的单位， 构成卵巢储备。 在正常情况下， 大部分原始卵泡处于静止状态， 只有少数原始卵泡在特定时间被激活。 在某些病理条件下， 这种平衡被破坏， 原始卵泡的激活迅速加速， 导致卵巢早衰(premature  ovarian   insufficiency， POI)等疾病 。 近年来， 一些基因和通路已被证明在原始卵泡的激活中发挥 重要作用。 其中一些， 如GDF ‑9、 Grem1/2、 胰岛素和BMP4/SMAD信号通路等， 促进原始卵泡的 激活。 而其它的， 如Lhx8、 Pten和Tsc1/mTORC1信号通路等， 则抑制原始卵泡的激活。 对原始 卵泡激活的控制的研究在临床上 具有重要意 义。 [0004]POI是一种异质性疾病， 影响约1％的育龄妇女， 其主要病因包括遗传因素、 感染、 自身免疫因素和医源性原因。 原始卵泡池构成卵巢储备， 因此研究原始卵泡激活机制有助 于找到维持卵巢储备的方法。 许多POI病例的原因是由于原始卵泡过度激活导致卵巢储备 过早耗尽， 这可能是遗传因素的结果， 例如Pten基因的缺 失。 此外， 许多POI病例是由医源性 原因引起的， 例如当卵巢暴露于化疗药物时， 这些都会导致原始卵泡加速激活， 导致卵巢储 备过早枯竭， 这通常被称为 疲倦(burn out)效应。 [0005]本领域已经采用分子生物学的方法来诊断或检测各种卵巢损伤带来的疾病， 包括 采用分析基因表达的高通量芯片或用于较少量分子目标的PCR或非P CR方法的试剂盒， 例如 Taqman探针法试剂盒等。 然而， 卵巢激活异常导致的疾病例如卵巢早衰等的筛选、 检测方法 及检测程序还存在很多需要解决的问题。 因此本领域还需要一种更快速和有效的诊断或检 测卵巢激活异常导致的疾病例如卵巢早衰等的方法和试剂盒或芯片。 另外， 在基因表达研 究中的各种方法， 包括测序法、 qRT ‑PCR和microarray(基因芯片)中， 均需要使用内参基因。 内参基因通常在所有样本和实验条件下都能稳定地表达， 而且具有与研究对象相似的属 性， 例如RNA稳定性和大小等， 由此表达量可以与研究对象进行比较。 内参基因在很大程度 上能够影 响测序法、 qRT ‑PCR和microarray(基因芯片)的准确性。 越来越多的证据发现原来 被认为是能够稳定表达的内参基因实际上在不同生理或病理条件下的表达是有变化的。 采 用不恰当的看家基因可能会导 致数据曲解引起基因表达的低估或高估。 [0006]本领域仍然需要对卵巢激活异常导致卵巢损伤的机制或卵巢激活异常对正常机 理引起的危害有 更多的研究和了解， 由此提供诊断与卵巢激活异常相关疾病或治疗卵巢激说　明　书 1/16 页 3 CN 115491412 A 3