(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211268360.0 (22)申请日 2022.10.17 (71)申请人 上海中医药大学附属龙华医院 地址 200032 上海市徐汇区宛平南路725号 (72)发明人 唐德志　王拥军　施杞　金镇雄　 (74)专利代理 机构 上海思真远达专利代理事务 所(特殊普通 合伙) 31481 专利代理师 李梅 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) G01N 30/06(2006.01) G01N 30/14(2006.01) G01N 30/54(2006.01) G01N 30/72(2006.01) (54)发明名称 一种复方健脾补肾制剂HPLC指纹图谱的构 建方法及标准指纹图谱 (57)摘要 本发明涉及医药技术领域， 具体涉及一种复 方健脾补肾制剂HPLC指纹图谱的构建方法及标 准指纹图谱， 本发明所提供的构建方法是以制备 的复方健脾补肾制剂为样本， 将样本制备成溶 液， 再利用超高效液相色谱仪和高分辨串联质 谱， 获取指纹图谱， 健脾补肾方药物以党参和骨 碎补为君药， 以刺五加和仙灵脾为臣药， 以丹参 为佐药， 以独活为使药， 具有健脾补肾， 强筋健 骨， 活血化瘀的功效， 主治脾肾气虚、 脾肾阳虚导 致的肌少症、 骨折后肌肉萎缩等肌肉， 骨相关疾 病的功效， 具有良好的安全性， 与市面上应用的 化合物相比， 具有原料易得， 制作工艺简单。 权利要求书1页 说明书5页 附图2页 CN 115436529 A 2022.12.06 CN 115436529 A 1.一种复方健脾补肾制剂HPLC指纹图谱的构建方法， 其特征在于， 所述的构建方法是 以制备的复方健脾补肾制剂为样本， 将样本制备成溶液， 再利用超高效液相色谱仪和高分 辨串联质谱， 获取指纹图谱， 其中： 所述的复方健脾补肾制剂， 包括以下质量份数的原料： 党参11 ‑13份、 骨碎补8 ‑10份、 刺 五加11‑13份、 仙灵脾8 ‑10份、 丹参1 1‑13份、 独活8 ‑10份； 所述的复方健脾补肾制剂的制备 方法， 包括以下步骤： (1)分别称取党参、 骨碎补、 刺五加、 仙 灵脾、 丹参和独活， 置于浸泡池内浸泡， 再煎煮3 次， 合并煎煮液； (2)将煎煮液 过滤、 灭菌后， 自然冷却， 制得复方健脾补肾制剂。 2.根据权利要求1所述的一种 复方健脾补肾制剂HPLC指纹图谱的构建方法， 其特征在 于， 所述的将 样本制备成溶 液的过程 为： 取适量样品溶 液于2mL离心管中； 然后离心， 取 上清液， 获得样本溶 液。 3.根据权利要求2所述的一种 复方健脾补肾制剂HPLC指纹图谱的构建方法， 其特征在 于， 所述的离心转速为120 00r/min， 离心时间为5mi n。 4.根据权利要求1所述的一种 复方健脾补肾制剂HPLC指纹图谱的构建方法， 其特征在 于， 所述的超高效液相色谱仪的色谱条件为： 色谱柱： Waters T3， 柱高 2.1mm， 内径100mm， 粒度1.6 μm， 柱温： 30℃， 等度洗脱， 流速： 0.3ml/min， 进样量： 5 μl， 检测波 长： 190‑400nm， 流动相比例： A相乙腈， B相0.1％甲酸水 溶液。 5.根据权利要求1所述的一种 复方健脾补肾制剂HPLC指纹图谱的构建方法， 其特征在 于， 所述的复方健脾补肾制剂， 包括以下质量份数的原料： 党参12份、 骨碎补9份、 刺五加12 份、 仙灵脾9份、 丹参12份、 独活9份。 6.根据权利要求1所述的一种 复方健脾补肾制剂HPLC指纹图谱的构建方法， 其特征在 于， 在步骤(1)中， 所述的浸泡时间为1h 。 7.根据权利要求1所述的一种 复方健脾补肾制剂HPLC指纹图谱的构建方法， 其特征在 于， 在步骤(1)中， 所述的煎煮3次每次的时间均为1h， 煎煮温度均为120℃。 8.一种标准指纹图谱， 其特征在于， 使用了根据权利要求1 ‑7任一项所述的一种复方健 脾补肾制剂HPLC指纹图谱的构建方法所构建的。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115436529 A 2一种复方健脾补肾制剂HPL C指纹图谱的构建 方法及标准指纹 图谱 技术领域 [0001]本发明涉及医药技术领域， 具体涉及一种复方健脾补肾制剂HPLC指纹图谱的构建 方法及标准指纹图谱。 背景技术 [0002]中医学及现代医学均认识到肌肉与骨骼在生理、 病理上存在着密切联系。 《难经 · 二十四难》 记载： “少阴者， 冬脉也， 伏行而温于骨髓 。 故骨髓不温， 即肉不着骨， 骨肉不相亲， 即肉濡而却 …发无润泽； 无润泽者， 骨先死。 ”肌肉作人体最主要的动力组织器官， 产生收缩 力， 对骨骼产生力 学(应力)刺激， 被骨组织中的骨细胞陷窝 ‑骨小管(力学感受器)所监测， 当产生的应力刺激降低时， 骨小 管感受到现有骨量大于外力作用的需要， 则启动骨重 建， 使 骨吸收大于骨形成， 导致骨量下降。 随着年龄的增长， 男性和女性骨骼肌力量均下降， 男性 趋势较女性更为明显， 同时伴随着骨折风险的增加。 青年阶段的长期适量运动， 可促进骨骼 肌的微循环， 增强营养物质的代谢， 一方面有利于肌力的增强和协调性的平衡， 一方面可提 高骨骼的质和 量， 从而降低年老后脆性骨折的发生率。 跌倒是导致老年人发生骨质疏松性 骨折的危险因素， 在日常活动如体位改变、 行走、 平衡变化， 及环 境、 生理、 室内外活动、 雪地 或非雪地中旅行、 滑倒等均可引发跌倒而致骨折； 老年人出现跌倒的自身诱因包括： 年龄、 活动能力、 平衡、 抓力、 慢性疾病、 可诱 发跌倒的药物等， 其中肌肉力量(特别是下肢)是评估 和防治老年人跌倒风险的一个重要因素。 老年人肌肉强度、 水平越低， 其跌倒的风险越高。 [0003]由此可见， 肌肉与骨的密切关系在骨质疏松症和骨质疏松性骨折防治中的重要 性。 中医学则从 “脾主肌肉 ”、“肾主骨”、“先、 后天之本 ”等论治骨科疾患， 《张聿青医案》 曰： “脾胃之腐化， 尤赖肾中这一点真阳蒸变， 炉薪不熄， 釜爨方成。 ”《傅青主女科 ·妊娠》 曰： “脾为后天， 肾为先天， 脾非先天之气不能化， 肾非后天之气不能生。 ”《医门棒喝 》 ：“脾胃之 能生化者， 实由肾中元阳之鼓舞， 而元阳以固密为贵， 其所以能固密者， 又赖脾胃生化阴精 以涵育耳。 ”因此， 脾肾之间为先天温养后天、 后天补养先天的辨证关系。 同时， 肾虚是骨质 疏松症的根本、 脾虚是主要环节、 血瘀是促进因素， 因此， 施杞教授在配伍组方时以补肾为 主， 辅以健脾、 活血。 [0004]目前， 针对老年骨折后出现肌肉萎缩、 及肌少症的治疗， 仅限血管紧张素转换酶 (ACE)抑制剂、 血管紧张素受体阻滞剂、 β 受体阻滞剂和醛固酮拮抗剂、 睾酮、 生长激素、 生长 释放肽， 以及一般物理疗法。 但仍需要 大规模试验来确认上诉方法的有效性和安全性， 且上 诉方法被认为是有限的。 [0005]综上所述， 研发一种复方健脾补肾制剂HPLC指纹图谱的构建方法及标准指纹图 谱， 是医药技 术领域中急需解决的关键问题。 发明内容 [0006]针对现有技术所存在的上述缺点， 本 发明在于提供一种复方健脾补肾制剂HP LC指说　明　书 1/5 页 3 CN 115436529 A 3