(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211545178.5 (22)申请日 2022.12.05 (71)申请人 山东绿叶制药有限公司 地址 264670 山 东省烟台市高新区创业路 15号 (72)发明人 薛云丽　刘同见　曲宏亮　孙启泉　 于雪　苑菲菲　张立　郭俊　 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) G01N 30/06(2006.01) G01N 30/30(2006.01) G01N 30/32(2006.01) G01N 30/34(2006.01) G01N 30/72(2006.01) (54)发明名称 一种检测羟考酮纳洛酮缓释片中杂质含量 的方法 (57)摘要 本发明提供了一种检测羟考酮纳洛酮缓释 片中7,8‑二脱氢纳洛酮杂质含量的方法， 所述方 法采用超高效液相色谱与质谱 联用技术， 采用乙 酸铵水溶液 ‑乙腈作为流动相， 色谱柱为Waters   Acquity CSH C18。 该方法专属性好、 准确度高、 灵敏度高， 可以有效监控羟考酮纳洛酮缓释片的 质量。 权利要求书1页 说明书15页 附图4页 CN 115541779 A 2022.12.30 CN 115541779 A 1.一种检测羟考酮纳洛酮 缓释片中7,8 ‑二脱氢纳洛酮含量的方法， 采用超高效液相色 谱与质谱联用技术， 其中， 超高效液相色谱采用乙酸铵水溶液 ‑乙腈作为流动相， 色谱柱为 Waters Acquity CSH C18。 2.根据权利要求1所述的方法， 其中， 流动相A为乙酸铵水溶液； 流动相B为乙腈， 采用梯 度洗脱程序为： 初始梯度： 流动相A： 流动相B为98 :2； 0min至4min， 流动相A： 流动相B由98 :2渐变为75:25； 4.0min至6.5min， 流动相A： 流动相B由75:25渐 变为30:70； 6.5min至8.0mi n， 流动相A： 流动相B维持3 0:70比例； 8.0min至8.1mi n， 流动相A： 流动相B由3 0:70渐变为98:2； 8.1min至12.0mi n， 流动相A： 流动相B维持98 :2； 共计运行12.0mi n。 3.根据权利要求1或2任一所述的方法， 其 中， 流动相流速为0.45 ‑0.55 mL/min， 色谱柱 的柱温为 45‑55 ℃。 4.根据权利要求1或2任一所述的方法， 其中， 质谱条件包括： 电喷雾离子化离子源； 离 子喷射电压： 5500V； 温度550℃； 源内气体1压力： 55Psi； 源内气体2压力： 55Psi； 气帘气体压 力： 40Psi； 去簇电压： 85V， 95V； 碰撞能量： 20eV， 32eV； 扫描方式： 多重反应监测。 5.根据权利要求4所述的方法， 其中， 定量离子为326.1/308.2  m/z； 定性离子为326.1/ 266.6 m/z。 6.根据权利要求1或2任一所述的方法， 其中， 羟考酮纳洛酮 缓释片包含羟考酮 或其盐、 纳洛酮或其盐、 和药物上可接受的辅料； 药学上可接受的辅料为聚乙酸乙烯酯 /聚乙烯吡 咯 烷酮混合物、 微晶纤维素、 羟丙基甲基纤维素、 二氧化硅和硬脂酸镁中的一种或多种。 7.根据权利要求6所述的方法， 其中， 羟考酮纳洛酮缓释片包含盐酸羟考酮、 盐酸纳洛 酮或其水合物； 所述盐酸纳洛酮水合物为盐酸纳洛酮二水合物或二盐酸纳洛酮水合物。 8.根据权利要求7所述的方法， 其中， 所述羟考酮纳洛酮 缓释片中药学上可接受 的辅料 的重量含量 为70‑96%。 9.根据权利要求1或2任一所述的方法， 包括如下步骤： （1） 制备多个含有不同7,8 ‑二脱氢纳洛酮浓度的标准曲线溶液， 分别注入超高效液相 色谱‑质谱仪， 测定后， 以定量离子的峰面积为 纵坐标， 与其对应的浓度为横坐标， 绘制标准 工作曲线； （2） 将含有羟考酮纳洛酮缓释片的供试品溶液注入超高效液相色谱 ‑质谱仪， 所得定量 离子的峰面积带入标准曲线， 计算7,8 ‑二脱氢纳洛酮的含量。 10.根据权利要求9所述的方法， 包括以下 溶液的配制： （1） 空白辅料 溶液： 取羟考酮纳洛酮缓释片对应的辅料， 加入40%甲醇水 溶解， 即得； （2） 标准曲线溶液： 取7,8 ‑二脱氢纳洛酮标准品和空白辅料溶液， 用40%甲醇水溶液稀 释至不同浓度， 即得； （3） 供试品溶液： 取羟考酮纳洛酮缓释片， 加入40%甲醇水溶液， 使缓释片完全崩解， 即 得； 其中， 标准曲线溶 液和供试品溶液中各辅料浓度相同。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115541779 A 2一种检测羟考酮纳洛 酮缓释片中杂质含量的方 法 技术领域 [0001]本发明涉及羟考酮纳洛酮缓释片杂质含量的检测方法， 具体涉及采用液质联用方 法检测羟考酮纳洛酮缓释片中7,8 ‑二脱氢纳洛酮含量的方法。 背景技术 [0002]羟考酮是一种由生物碱蒂巴因中提取的半合成阿片类药物， 其结构类似可待因， 通过激动中枢神经系统的阿片 μ及κ 受体而产生镇痛、 镇静作用， 用于缓解持续的中度到重 度疼痛。 羟考酮的镇痛效能和时间与吗啡类似， 但生物利用度是吗啡生物利用度的3～ 4倍， 其主要原因为羟考酮在分子结构上－CH3取代吗啡分子结构的－OH， 降低患者口服药物首 过效应， 提升脂溶性， 因此羟考酮透过血－脑脊液屏障及跨膜效果均高于吗啡3倍。 盐酸羟 考酮缓释片属于口服阿片类镇痛剂， 1996年在美国上市出售， 该药物 集控释和即释于一体， 患者服用后， 38%药物能够快速得到释放， 1h内起到镇痛作用， 且药效持久， 可持续12h 。 [0003]阿片类药物通过占领脑和脊椎内的阿片受体来减少疼痛， 同时也结合肠道内的周 围阿片受体， 干扰并延缓胃肠道运动性的肌肉收缩能力， 并且还增加肠道水分的吸收、 干燥 肠道内容物， 进一步阻碍食物在消 化道内的运输， 从而造成便秘。 因此， 服用阿片类药物的 患者往往需要同时服用阿片类药物拮抗剂， 如 纳洛酮。 [0004]纳洛酮本身无内在活性， 但能竞争性拮抗各类阿片受体， 对μ受体有很强的亲和 力。 静脉给药时， 纳洛酮可逆转阿片类药物导致的呼吸抑制； 口服时， 纳洛酮生物利用度非 常低， 仅作用于 胃肠道的周围阿片受体， 可防止阿片类药物与这些受体结合起到治疗便秘 的作用， 同时还不会影响阿片类药物的镇痛效果。 羟考酮纳洛酮缓释制剂已在欧美上市， 其 缓解疼痛效果与单一羟考酮缓释制剂相近， 但可显著降低阿片类药物引起的便 秘。 [0005]基因毒性杂质在较低含量就有可能引起DNA  的损伤进而可能引发癌变， 对患者的 用药安全产生严重危害， 所以药物中基因毒性杂质的控制和监测成为药物开 发和生产的一 个关键问题。 7,8 ‑二脱氢纳洛酮 （7,8 ‑Didehydronaloxone） 为纳洛酮的基因毒性杂质。 欧洲 药典要求控制其含量在75p pm以下。 [0006]7,8‑二脱氢纳洛酮 欧洲药典公开了采用HP LC方法检测纳 洛酮原料药中7,8 ‑二脱氢纳 洛酮的含量。 但 是目前尚无报道制剂中， 尤其是羟考酮纳洛酮缓释片中7,8 ‑二脱氢纳洛酮含量检测方法。 由于羟考酮纳洛酮缓释片中含有多种活性 成分和多种辅料， 并且7,8 ‑二脱氢纳洛酮杂质含 量很低， 常规方法难以准确地检测该复方缓释制剂中7,8 ‑二脱氢纳洛酮的含量。说　明　书 1/15 页 3 CN 115541779 A 3