(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211170446.X (22)申请日 2022.09.23 (71)申请人 江苏省中 医院 地址 210029 江苏省南京市汉中路15 5号 (72)发明人 邹恺平　刘炜　倪文澎　刘顺　 (74)专利代理 机构 上海申沪专利代理有限公司 31483 专利代理师 赖俊平 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) G01N 30/06(2006.01) G01N 30/14(2006.01) G01N 30/34(2006.01) G01N 30/74(2006.01) (54)发明名称 一种治疗病毒性上呼吸道感染的中药复方 制剂的质量检测方法 (57)摘要 本发明公开了一种治疗病毒性上呼吸道感 染的中药复方制剂的质量检测方法， 该方法包括 指纹图谱检测方法和含量测定方法； 指纹图谱检 测方法包括： 步骤1、 供试品溶液的制备； 步骤2、 混合对照品溶液的制备； 步骤3、 分别精密吸取供 试品与对照品溶液注入液相色谱图仪， 记录色谱 图； 步骤4、 将抗感合剂的指纹图谱仪器导出， 并 导入“中药色谱指纹图谱相似度评价系统2012 版”软件中， 建立指纹图谱， 并根据混合对照品溶 液色谱图的保留时间标注指纹图谱中峰的化学 成分。 本发明建立的抗感合剂指纹图谱， 能全面、 客观地评价中药复方制剂的质量。 并且该方法具 有稳定性好、 准确度高、 重复性好、 精密度高等优 点。 权利要求书3页 说明书8页 附图2页 CN 115452996 A 2022.12.09 CN 115452996 A 1.一种治疗病毒性上呼吸道感染的中药复方制剂的质量检测方法， 其特征在于， 它包 括以下步骤： 步骤1： 供 试品溶液的制备 取不同批次的中药复方制剂， 置容量瓶中， 加入适量50％甲醇， 超声， 放至室温后用 50％甲醇定容至刻度， 摇匀， 过0.2 2 μm滤膜， 即得； 步骤2： 混合对照品溶 液的制备 分别取绿原酸、 芦丁、 槲皮素、 升麻素苷、 异阿魏酸、 甘草酸、 木犀草素、 阿魏酸、 连翘苷、 木犀草苷、 甘草苷、 连翘酯苷A、 新绿原酸、 异绿原酸A、 咖啡酸和马钱苷对照品适量， 置容量 瓶中， 加入适量50％甲醇， 超声， 放至 室温后用50％甲醇定容至刻度， 摇匀， 制备成混合对照 品溶液， 0.22 μm滤膜滤 过， 即得； 步骤3、 色谱图测定 分别吸取步骤1的供试品溶液和步骤2的混合对照品溶液， 注入HPLC得到供试品溶液的 色谱图和混合对照品溶 液的色谱图； 步骤4、 指纹图谱的建立 将步骤3中获得的供试品溶液的指纹图谱导出， 并导入 “中药色谱指纹图谱相似度评价 系统2012版 ”软件中， 设置S1为参照图谱， 采用平均数法， 时间窗宽度为0.1， 经过多点校正 后自动匹配， 生成对照图谱R， 该图谱作为本中药复方制剂的标准指纹图谱， 计算各共有峰 的相对保留时间和相对峰面积； 并根据混合对照品溶液色谱图的保留时间标注对照指纹图 谱中峰的化学成分。 2.根据权利要求1所述的一种治疗病 毒性上呼吸道感染的中药复方制 剂的质量检测方 法， 其特征在于， 还 包括含量测定方法， 具体包括以下步骤： 步骤1： 取不同批次的中药复方制剂， 置容量瓶中， 加入适量50％甲醇， 超声， 放至室温 后用50％甲醇定容至刻度， 摇匀， 过0.2 2 μm滤膜， 即得； 步骤2： 混合对照品溶 液的制备 分别取绿原酸、 连翘酯苷A和甘草酸对照品适量， 置容量瓶中， 加入50％甲醇， 超声溶 解， 放至室温后用50％甲醇定容至刻度， 制成绿原酸、 连翘酯苷A和甘草酸的混合对照品溶 液， 0.22 μm滤膜滤 过， 即得； 步骤3： 标准曲线的建立 取步骤2混合对照品溶液， 加50％甲醇依次稀释得到5个不同浓度的混合对照品溶液， 然后注入HPLC， 以峰面积为纵坐标， 浓度为横坐标建立标准曲线方程； 步骤4： 取步骤1的供试品溶液注入HPLC， 将色谱图的峰面积代入步骤3的标准曲线方 程， 计算供 试品中对应的有效成分含量。 3.根据权利要求1或2所述的一种治疗病毒性上呼吸道感染的中药复方制剂的质量检 测方法， 其特 征在于， 步骤1、 供试品溶液的中药复方制剂的制备方法为： 按重量份数取金银花150g、 连翘 150g、 薄荷50g、 桔梗30g、 苦杏仁60g、 拳参150g、 板蓝根150g、 绵马贯众60g、 升麻60g、 荆芥 50g、 川芎3 0g和甘草3 0g， 加适量水浸泡后， 煎煮提取1～3次， 合并提取 液， 减压浓 缩， 即得。 4.根据权利要求1所述的一种治疗病 毒性上呼吸道感染的中药复方制 剂的质量检测方 法， 其特征在于， 步骤2混合对照品溶液的制备方法为： 分别取绿原 酸、 芦丁、 槲皮素、 升麻素权　利　要　求　书 1/3 页 2 CN 115452996 A 2苷、 异阿魏酸、 甘 草酸、 木犀草素、 阿魏酸、 连翘苷、 木犀草苷、 甘 草苷、 连翘酯苷A、 新绿原 酸、 异绿原酸A、 咖啡酸和马钱苷对照品适量， 置容量瓶中， 加入适量50％甲醇， 超声， 放至室温 后用50％甲醇定容至刻度， 摇匀后分别取1mL置25mL容量瓶中， 加50％甲醇定容至刻度， 制 成每1mL含绿原酸35.64μg、 芦丁91.76μg、 槲皮素92.12μg、 升麻素苷51.56μg、 异阿魏酸 72.32μg、 甘草酸17.6μg、 木犀草素44.96μg、 阿魏酸66.40μg、 连翘苷70.40μg、 木犀草苷 59.72 μg、 甘草苷62.76 μg、 连翘酯苷A  52.32 μg、 新绿原酸46.08 μg、 异绿原酸A  47.48 μg、 咖 啡酸45.24 μg、 马钱苷5 6.19 μg的混合对照品溶 液， 0.22 μm滤膜滤 过， 即得。 5.根据权利要求2所述的一种治疗病 毒性上呼吸道感染的中药复方制 剂的质量检测方 法， 其特征在于， 步骤2： 混合对照品溶液的制备方法为： 分别取绿原 酸、 连翘酯苷A和甘 草酸 对照品适量， 置10mL容量瓶中， 加入50％甲醇， 超声20min， 放至室温后用50％甲醇定容至刻 度， 分别制成每1mL含绿原酸0.891mg、 连翘酯苷A1.308mg和甘草酸0.44mg的对照品溶液， 0.22 μm滤膜滤 过， 即得。 6.根据权利要求1或2所述的一种治疗病毒性上呼吸道感染的中药复方制剂的质量检 测方法， 其特征在于， HPLC测定时的色谱条件为： 色谱柱： Agilent  Proshell  120 SB‑aq色 谱柱， 规格为4.6mm ×100mm， 2.7 μm； 流动相： 0.2％磷酸水溶液为A相， 乙腈为B相， 梯度洗脱； 柱温： 30℃； 流速： 1.0mL ·min‑1， 检测波长： 245nm； 进样体积： 10 μL。 7.根据权利要求6所述的一种治疗病 毒性上呼吸道感染的中药复方制 剂的质量检测方 法， 其特征在于， 梯度洗脱条件为： 8.根据权利要求1所述的一种治疗病 毒性上呼吸道感染的中药复方制 剂的质量检测方权　利　要　求　书 2/3 页 3 CN 115452996 A 3