(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211201469.2 (22)申请日 2022.09.29 (71)申请人 广西中医药大学百年乐制药有限公 司 地址 530023 广西壮 族自治区南宁市青秀 区东葛路6 0号 (72)发明人 罗宇东　覃洁萍　梁梓敏　郭海姣　 谭安蔷　庞晓云　陈晓艺　 (74)专利代理 机构 北京东方盛凡知识产权代理 有限公司 1 1562 专利代理师 张国麒 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) G01N 30/06(2006.01) G01N 30/30(2006.01)G01N 30/32(2006.01) G01N 30/34(2006.01) G01N 30/74(2006.01) (54)发明名称 芒果止咳片指纹图谱的建立及组分含量测 定方法 (57)摘要 本发明公开了一种芒果止咳片指纹图谱的 建立及组分含量测定方法， 涉及分析检测技术领 域。 本发明采用多波长切换检测技术， 利用高效 液相色谱法测定了11批样品的HPLC图谱及其7种 主要成分的含量， 建立了芒果止咳片的指纹图谱 共有模式， 本发 明所建立的指纹图谱 方法特征性 强， 含量测定方法准确可靠， 重复性好， 为芒果止 咳片的质量控制提供方法和依据。 权利要求书2页 说明书15页 附图5页 CN 115420834 A 2022.12.02 CN 115420834 A 1.一种芒果止咳片 指纹图谱的建立方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： S1.配制供试品溶液： 去除芒果止咳片的薄膜包衣， 研磨， 称定研磨后的粉末0.4g， 加入 10mL水， 振摇使粉末溶解， 置于分液漏斗， 加 入乙酸乙酯45ml， 振摇萃取10min， 萃取2次， 静 置分层， 合并2次乙酸乙酯萃取液， 水浴挥干， 残渣加甲醇溶解， 移至5mL容量瓶， 加甲醇定 容， 摇匀， 13 000r.min‑1离心10mi n， 取上清液即为所述供 试品溶液； S2.高效液相色谱检测： 对所述供试品溶液进行高效液相色谱检测， 得到所述芒果止咳 片指纹图谱； 色谱条件为： 色谱柱： Phen omenex Gemini C18柱； 以0.1％磷酸水 溶液为流动相A， 乙腈 为流动相B， 进行梯度洗脱； 洗脱流程为： 0 →10min， 5→7％B； 10→20min， 7→11％B； 20 →25min， 11 →13％B； 25 → 40min， 13 →16％B； 40→50min， 16 →20％B； 50→60min， 20 →25％B； 60→70min， 25 →35％B； 70→75min， 35％B； 流速1.0mL/mi n； 柱温30℃； 进样量 为5 μL； 检测波长为： 0 →9min， 272nm； 9 →34min， 216nm； 34 →53min， 258nm； 5 3→75min， 216nm。 2.一种芒果止咳片 指纹图谱 共有模式的建立方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： S1.配制供试品溶液： 去除芒果止咳片的薄膜包衣， 研磨， 称定研磨后的粉末0.4g， 加入 10mL水， 振摇使粉末溶解， 置于分液漏斗， 加 入乙酸乙酯45ml， 振摇萃取10min， 萃取2次， 静 置分层， 合并2次乙酸乙酯萃取液， 水浴挥干， 残渣加甲醇溶解， 移至5mL容量瓶， 加甲醇定 容， 摇匀， 13 000r.min‑1离心10mi n， 取上清液即为所述供 试品溶液； S2.取不同批次芒果止咳片， 重复S1步骤得到不同批次供 试品溶液； S3.将不同批次供试品溶液进行高效液相色谱检测， 得到不同批次芒果止咳片指纹图 谱； 色谱条件为： 色谱柱： Phen omenex Gemini C18柱； 以0.1％磷酸水 溶液为流动相A， 乙腈 为流动相B， 进行梯度洗脱； 洗脱流程为： 0 →10min， 5→7％B； 10→20min， 7→11％B； 20 →25min， 11 →13％B； 25 → 40min， 13 →16％B； 40→50min， 16 →20％B； 50→60min， 20 →25％B； 60→70min， 25 →35％B； 70→75min， 35％B； 流速1.0mL/mi n； 柱温30℃； 进样量 为5 μL； 检测波长为： 0 →9min， 272nm； 9 →34min， 216nm； 34 →53min， 258nm； 5 3→75min， 216nm。 S4.将得到的不同批次的芒果止咳片指纹图谱数据导入 《中药指纹图谱相似度评价软 件》 分析， 采用中位数法， 时间窗口0.10， 进 行多点校正， 得到所述芒果止咳片指纹图谱共有 模式。 3.一种芒果止咳片中组分含量的测定方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： S1.制备混合对照品溶液： 分别取没食子酸、 原儿茶酸、 马来酸氯苯那敏、 芒果苷、 高芒 果苷、 金丝桃苷、 异 槲皮苷对照品适量， 精密称 定， 加体积分数为70％的甲醇水溶液溶解， 制 成含没食子酸、 原儿茶酸、 马来酸氯苯那敏、 芒果苷、 高芒果苷、 金丝桃苷、 异槲皮苷质量浓 度分别为1830 μg/mL、 101.0 μg/mL、 431.4 μg/mL、 2613 μg/mL、 362.3 μg/mL、 155.4 μg/mL、 74.80权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115420834 A 2μg/mL的混合对照品溶 液； S2.配制供试品溶液： 去除芒果止咳片的糖衣， 研磨， 精密称定研磨后的粉末0.3g， 精密 加入体积分数为70％的甲醇水溶液25mL， 超声40min， 滤过， 残渣精密加入体积分数为70％ 的甲醇水溶液25mL， 超声40min， 滤过， 合并滤液， 水浴挥干， 残渣加体积分数为70％的甲醇 水溶液溶解， 定容至10mL 容量瓶， 摇匀， 离心10mi n， 取上清液即得 所述制供 试品溶液； S3.绘制标准曲线： 分别精密吸取S1制备的混合对照品溶液0.125mL、 0.5mL、 1.0mL、 2.0mL、 4.0mL分别置于5mL容量瓶中， 体积分数为70％的甲醇水溶液稀释 至刻度， 摇匀即得7 个系列浓度的混合对照品溶液， 以5μL的进样量进行高相液相色谱分析， 绘制得到没食子 酸、 原儿茶酸、 马来 酸氯苯那敏、 芒果苷、 高芒果苷、 金丝桃苷和异槲皮苷的标准曲线； S4.对配制的供试品溶液进行高效液相色谱分析， 将得到的组分峰面积带入绘制的标 准曲线中， 得到组分含量； 步骤S3和S4中， 高相液相色谱分析的色谱条件为： 色谱柱： Phen omenex Gemini C18柱； 以0.1％磷酸水 溶液为流动相A， 乙腈 为流动相B， 进行梯度洗脱； 洗脱流程为： 0 →10min， 5→7％B； 10→20min， 7→11％B； 20 →25min， 11 →13％B； 25 → 40min， 13 →16％B； 40→50min， 16 →20％B； 50→60min， 20 →25％B； 60→70min， 25 →35％B； 70→75min， 35％B； 流速1.0mL/mi n； 柱温30℃； 进样量 为5 μL； 检测波长为258nm。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115420834 A 3