(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211243992.1 (22)申请日 2022.10.11 (71)申请人 山西振东制药股份有限公司 地址 047100 山西省长治市长治县光明南 路振东科技园 (72)发明人 申晓婷　王红芳　张辉　宋艳艳　 姚凯　 (74)专利代理 机构 北京超凡宏宇专利代理事务 所(特殊普通 合伙) 11463 专利代理师 王焕 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) G01N 30/34(2006.01) G01N 30/60(2006.01) (54)发明名称 表雄酮-17- 腙有关物质的检测方法和应用 (57)摘要 本发明涉及化学药物分析方法技术领域， 尤 其是涉及一种表雄酮 ‑17‑腙有关物质的检测方 法和应用。 表雄酮 ‑17‑腙有关物质的检测方法， 包括如下步骤： 采用高效液相色谱对 供试品溶液 进行检测； 所述高效液相色谱的检测条件包括： 检测波长为2 05～215n m； 以水作为流动相A， 乙腈 作为流动相B， 进行一定的梯度洗脱。 本发明的高 效液相色谱检测条件， 可以实现一次性高效的分 离出上述两种有关物质， 建立表雄酮 ‑17‑腙有关 物质研究方法； 并且该方法专属性强， 耐用性好， 灵敏度高。 权利要求书2页 说明书18页 附图5页 CN 115480015 A 2022.12.16 CN 115480015 A 1.表雄酮 ‑17‑腙有关物质的检测方法， 其特 征在于， 包括如下步骤： 采用高效液相色谱 对供试品溶液进行检测； 所述高效液相色谱的检测条件 包括： 检测波长为20 5～215nm； 以水作为 流动相A， 乙腈作为 流动相B， 进行梯度洗脱； 所述梯度洗脱的过程包括： 0～10min， 流动相A和流动相B的体积比为(58～62)﹕(38～ 42)； 10～20min内， 流动相A和流动相B的体积比由(58～ 62)﹕(38～42)变至(18～22)﹕(78～ 82)； 20～35min， 流动相A和流动相B的体积比为(18～22)﹕(78～82)； 35～ 36min内， 流动相A 和流动相B的体积比由(18～22)﹕(78～82)变至(58～ 62)﹕(38～42)； 36～45min， 流动相A和 流动相B的体积比为(58～62)﹕(38～42)。 2.根据权利要求1所述的表雄酮 ‑17‑腙有关物质的检测方法， 其特征在于， 所述梯度洗 脱的过程包括： 0～10min， 流动相A和流动相B的体积比为60﹕ 40； 10～20min内， 流动相A和流 动相B的体积比由60﹕40变至20﹕80； 20～35min， 流动相A和流动相B的体积比为20﹕80； 35～ 36min内， 流动相A和流动相B的体积比由20﹕80变至60﹕ 40； 36～45min， 流动相A和流动相B的 体积比为6 0﹕ 40。 3.根据权利要求1所述的表雄酮 ‑17‑腙有关物质的检测方法， 其特征在于， 所述有关物 质包括Ⅰ和Ⅱ， 其结构式分别如下： 4.根据权利要求1所述的表雄酮 ‑17‑腙有关物质的检测方法， 其特征在于， 所述高效液 相色谱的色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱。 5.根据权利要求1所述的表雄酮 ‑17‑腙有关物质的检测方法， 其特征在于， 所述检测的 柱温为35～45℃； 优选的， 所述检测的柱温为38～42℃； 更优选的， 所述检测的柱温为 40℃。 6.根据权利要求1所述的表雄酮 ‑17‑腙有关物质的检测方法， 其特征在于， 所述梯度洗 脱的流速为0.8～1.2mL/mi n； 优选的， 所述梯度洗脱的流速为0.9 ～1.1mL/mi n； 更优选的， 所述梯度洗脱的流速为1.0mL/mi n。 7.根据权利要求1所述的表雄酮 ‑17‑腙有关物质的检测方法， 其特征在于， 所述检测波 长为208～ 212nm； 优选的， 所述检测波长为210nm。 8.根据权利要求1所述的表雄酮 ‑17‑腙有关物质的检测方法， 其特征在于， 所述供试品 溶液的制备包括： 采用甲醇溶解供 试品； 优选的， 所述供 试品包括含表雄酮 ‑17‑腙的中间体。 9.根据权利 要求1‑7任一项所述的表雄酮 ‑17‑腙有关物质的检测方法， 其特征在于， 所权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115480015 A 2述检测条件 包括： 检测波长为210nm； 所述梯度洗脱的过程包括： 0～10min， 流动相A和流动相B的体积比为60﹕40； 10～20min 内， 流动相A和流动相B的体积比由60﹕40变至20﹕80； 20～35min， 流动相 A和流动相B的体积 比为20﹕80； 35～ 36min内， 流动相A和流动相B的体积比由20﹕80变至60﹕ 40； 36～45min， 流动 相A和流动相B的体积比为6 0﹕ 40； 所述梯度洗脱的流速为1.0mL/mi n； 色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱， 柱温为 40℃； 优选的， 还包括： 采用自身对照法对所述供试品中的表雄酮 ‑17‑腙和/或有关物质的含 量进行计算。 10.权利要求1～9任一项所述的表雄酮 ‑17‑腙有关物质的检测方法在表雄酮 ‑17‑腙的 质量控制中的应用。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115480015 A 3