(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211220802.4 (22)申请日 2022.10.08 (71)申请人 广东一方制药有限公司 地址 528244 广东省佛山市南海区里 水镇 旗峰工业 开发区 (72)发明人 程钰洁　王寿富　洪婉敏　姚晓璇　 邓怡芳　钟志奎　杨赞　刘燎原　 沈斌斌　 (74)专利代理 机构 华进联合专利商标代理有限 公司 44224 专利代理师 杜寒宇 (51)Int.Cl. G01N 30/02(2006.01) G01N 30/06(2006.01) G01N 30/72(2006.01)G01N 30/86(2006.01) (54)发明名称 车前科中药药材或制剂的指纹图谱的构建 方法、 检测方法和鉴别方法 (57)摘要 本发明涉及中药检测技术领域， 特别是涉及 车前科中药药材或制剂的指纹图谱的构建方法、 检测方法和鉴别方法。 所述指纹图谱的构建方 法， 包括以下步骤： 取车前科中药药材或车前科 中药制剂， 加提取溶剂进行提取处理， 收集提取 液， 制备供试品溶液； 取所述供试品溶液进行超 高效液相色谱测定。 本发明所构建的指纹图谱可 以对车前草药材、 车前草制剂、 车前子药材、 车前 子制剂进行检测， 判断各自的质量， 还可 以区分 车前草制剂和车前子制剂， 从内在质量上实现二 者的专属性鉴别， 弥补原材料外观及显微特征缺 失而造成鉴别不 准确的缺陷。 权利要求书3页 说明书16页 附图7页 CN 115541756 A 2022.12.30 CN 115541756 A 1.一种车 前科中药药材或制剂的指纹图谱的构建方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： 取车前科中药药材或车前科中药制剂， 加提取溶剂进行提取处理， 收集提取液， 制备供 试品溶液， 所述车前科中药药材为车前草中药药材或车前子中药药材； 所述车前科中药制 剂为车前草中药配方颗粒、 车 前子中药配方颗粒、 车 前草中药提取物或车 前子中药提取物； 取所述供试品溶液进行超高效液相色谱测定； 所述超高效液相色谱的色谱条件 包括： 流动相包括流动相A和流动相B， 所述流动相A包括乙腈， 所述流动相B包括磷酸水溶液， 梯度洗脱； 所述梯度洗脱包括以下程序： 0min～1min， 所述流动相A的体积分数保持7％， 所述 流动相B的体积分数保持93％； 1min～5min， 所述流动相A的体积分数由7％升高至12％， 所述流动相B的体积分数由 93％降低至8 8％； 5min～13min， 所述流动相A的体积 分数由12％升高至15％， 所述流动相B的体积 分数由 88％降低至85％； 13min～20min， 所述流动相A的体积分数保持15％， 所述 流动相B的体积分数保持85％； 20min～33min， 所述流动相A的体积分数由15％升高至25％， 所述流动相B的体积分数 由85％降低至75％； 33min～35min， 所述流动相A的体积分数由25％升高至62％， 所述流动相B的体积分数 由75％降低至 38％； 35min～40min， 所述流动相A的体积分数由62％升高至65％， 所述流动相B的体积分数 由38％降低至 35％； 40min～43min， 所述流动相A的体积分数由65％升高至80％， 所述流动相B的体积分数 由35％降低至20％； 43min～44min， 所述流动相A的体积分数由80％降低至7％， 所述流动相B的体积 分数由 20％升高至93％； 44min～55min， 所述流动相A的体积分数保持7％， 所述 流动相B的体积分数保持93％。 2.根据权利要求1所述的车前科中药药材或制 剂的指纹图谱的构建方法， 其特征在于， 所述超高效液相色谱的色谱条件 还包括以下 条件中的至少一个： 0min～8.5min， 检测波长为240nm～250nm； 8.5min～40min， 检测波长为325nm～335nm； 40min～55min， 检测波长为240nm～ 250nm； 柱温为28℃～32℃； 流速为0.25mL/mi n～0.35mL/min； 进样量为1 μL～2 μL； 以十八烷基硅烷键合硅胶为 填充剂； 所述磷酸水 溶液中磷酸的体积分数为0.0 5％～0.2％。 3.根据权利要求1或2所述的车前科中药药材或制 剂的指纹图谱的构建方法， 其特征在 于， 还包括以下 特征中的至少一项： 对所述车 前科中药药材进行提取处 理的方法为加热回流； 对所述车 前科中药制剂进行提取处 理的方法为超声提取；权　利　要　求　书 1/3 页 2 CN 115541756 A 2每1g所述车 前草中药 药材对应加入3 0mL～70mL的所述 提取溶剂； 每1g所述车 前子中药 药材对应加入20mL～3 0mL的所述 提取溶剂； 每0.2g所述车 前科中药制剂对应加入20mL～3 0mL的所述 提取溶剂； 所述提取溶剂为甲醇水 溶液。 4.根据权利要求3所述的车前科中药药材或制 剂的指纹图谱的构建方法， 其特征在于， 还包括以下 特征中的至少一项： 所述甲醇水 溶液中甲醇的体积分数为 40％～80％； 所述加热回流的温度为70℃～ 90℃， 加热回流的时间为 40min～150min； 所述超声提取的时间为20mi n～40min。 5.一种车 前科中药药材或制剂的检测方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： 取待测车前科中药药材或待测车前科中药制剂， 加提取溶剂进行提取处理， 收集提取 液， 制备待测样品溶液， 所述待测车前科中药药材为待测车前草中药药材或待测车前子中 药药材， 所述待测车前科中药制剂为待测车前草中药配方颗粒、 待测车前子中药配方颗粒、 待测车前草中药提取物或待测车 前子中药提取物； 按照权利要求1～4任一项所述的色谱条件对所述待测样品溶液进行超高效液相色谱 测定， 将所得色谱图与权利要求 1～4任一项所述的车前科中药药材或车前科中药制剂的指 纹图谱对应， 判断所述待测车 前科中药药材或待测车 前科中药制剂是否合格。 6.根据权利要求5所述的车前科中药药材或制 剂的检测方法， 其特征在于， 还包括以下 特征中的至少一项： 对所述待测车 前科中药药材进行提取处 理的方法为加热回流； 对所述待测车 前科中药制剂进行提取处 理的方法为超声提取； 每1g所述待测车 前草中药 药材对应加入3 0mL～70mL的所述 提取溶剂； 每1g所述待测车 前子中药 药材对应加入20mL～3 0mL的所述 提取溶剂； 每0.2g所述待测车 前科中药制剂对应加入20mL～3 0mL的所述 提取溶剂； 所述提取溶剂为甲醇水 溶液。 7.根据权利要求5或6所述的车前科中药药材或制剂的检测方法， 其特征在于， 还包括 以下特征中的至少一项： 所述甲醇水 溶液中甲醇的体积分数为 40％～80％； 所述加热回流的温度为70℃～ 90℃， 加热回流的时间为 40min～150min； 所述超声提取的时间为20mi n～40min。 8.一种车 前草中药制剂和车 前子中药制剂的鉴别方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： 取待测车 前科中药制剂， 加提取 溶剂进行提取处 理， 收集提取液， 制备待测样品溶 液； 按照权利要求1～4任一项所述的色谱条件对所述待测样品溶液进行超高效液相色谱 测定， 将所得色谱图与权利要求1～4任一项所述的车前科中药制剂的指纹图谱对应， 确定 所述待测车 前科中药制剂的种类。 9.根据权利要求8所述的车前草中药制 剂和车前子中药制 剂的鉴别方法， 其特征在于， 还包括以下 特征中的至少一项： 对所述待测车 前科中药制剂进行提取处 理的方法为超声提取； 每0.2g所述待测车 前科中药制剂对应加入20mL～3 0mL的所述 提取溶剂；权　利　要　求　书 2/3 页 3 CN 115541756 A 3