(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210680720.1 (22)申请日 2022.06.16 (71)申请人 四川农业大 学 地址 625014 四川省雅 安市雨城区新康路 46号 (72)发明人 张利　尚玉坤　廖进秋　杨瑞武　 姜媛媛　邓雪雪　王龙　柴松岳　 张云松　林丽　 (74)专利代理 机构 成都高远知识产权代理事务 所(普通合伙) 51222 专利代理师 张娟　全学荣 (51)Int.Cl. C12Q 1/6895(2018.01) C12N 15/11(2006.01) C12N 15/29(2006.01)C12Q 1/6851(2018.01) (54)发明名称 一种丹参 花药的内参基因及其用途 (57)摘要 本发明公开了一种丹参花药的内参基因， 所 述内参基因为Sm073914基因和/或Sm083165基 因。 本发明以Sm073914和/或Sm083165基因作为 丹参花药qRT ‑PCR的内参基因对目标基因的表 达 水平进行归一化， 解决了丹参花药qRT ‑PCR没有 内参基因的现状 。 权利要求书1页 说明书10页 序列表7页 附图3页 CN 115109865 A 2022.09.27 CN 115109865 A 1.一种丹参花药的内参基因， 其特征在于： 所述内参基因为Sm073914基因和/或 Sm083165基因。 2.根据权利 要求1所述丹参花药的内参基因， 其特征在于： 所述S m073914基因的核苷酸 序列如SEQ  ID NO.1所示； 所述Sm08316 5基因的核苷酸序列如SEQ  ID NO.2所示。 3.一种扩增权利 要求1所述内参基因的引物， 其特征在于： 所述S m073914基因的引物包 括核苷酸序列如SEQ  ID NO.3所示的正向引物和核苷酸序列如SEQ  ID NO.4所示的反向引 物； 所述Sm083165基因的引物包括核苷酸序列如SEQ  ID NO.5所示的正向引物和核苷酸序 列如SEQ ID NO.6所示的反向引物。 4.Sm073914基因和/或Sm08316 5基因作为内参基因在丹参 花药基因检测中的用途。 5.根据权利要求4所述用途， 其特征在于： 所述Sm073914基因的核苷酸序列如SEQ  ID  NO.1所示； 所述Sm08316 5基因的核苷酸序列如SEQ  ID NO.2所示。 6.根据权利要求5所述用途， 其特征在于： 所述基因检测是检测丹参花药基因转录表达 水平。 7.根据权利要求6所述用途， 其特征在于： 所述基因检测是实时荧光定量检测丹参花药 基因转录表达水平。 8.根据权利要求6或7所述用途， 其特征在于： 所述基因检测使用的引物包括核苷酸序 列如SEQ ID NO.3所示的正向引物和核苷酸序列如SEQ  ID NO.4所示的反向引物。 9.根据权利要求8所述用途， 其特征在于： 所述基因检测使用的引物还包括核苷酸序列 如SEQ ID NO.5所示的正向引物和核苷酸序列如SEQ  ID NO.6所示的反向引物。 10.根据权利要求4～9所述用途， 其特征在于： 所述丹参花药为四川丹参和/或山东丹 参。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115109865 A 2一种丹参花药的内参 基因及其用途 技术领域 [0001]本发明具体涉及一种丹参 花药的内参基因及其用途。 背景技术 [0002]丹参(Salvia  miltiorrhiza  Bunge)隶属于唇形科(Lamiaceae)鼠尾草属 (Salvia)多年生草本植物。 主要分布在四川、 山东、 河南、 陕西等地， 是常见大宗中药材。 《中 华人民共和国药典》 2020年版中规定， 药材丹参为唇形科鼠尾草属丹参的干燥根及根茎， 其 主要成分为脂溶性的丹参酮类以及水溶性的酚酸类化合物。 丹参具有改善血液循环、 保护 心血管、 保护神经和抗癌等药理作用， 不仅在中药开 发和利用方面具有重要的价值， 而且也 可用于食品、 饲料及天然产物提取， 以获得其独特的功效。 因此， 对丹参花药发育调控机制 的研究， 需要 进一步挖掘参与发育的功能基因， 并研究基因的表达模式和生物学功能。 [0003]实时荧光定量PCR(qRT ‑PCR)是对目标基因表达定量应用最广泛的分子生物学方 法， 具有精确度高、 灵敏性强、 特异性强和重复性好等特点， 也常用于植物学、 医学、 微生物 学等众多领域的研究。 但是qRT ‑PCR对目标基因表达量准确分析的前提是筛选出稳定表达 的内参基因。 理想的内参基因应该不受生长阶段、 组织器官及实验处理条件的影响。 然而， 内参基因在不同植物以及不同实验条件下并不是恒定的， 而且内参基因在不同植物、 不同 的组织中并不具有通用性。 此外， 关于丹参花药内参基因的研究还较为匮乏， 虽然用于丹参 的内参基因已有报道， 然而经过实验验证并不适用于花药。 因此， 现有的内参基因并不能作 为丹参花药qRT‑PCR的内参基因。 [0004]目前， 针对适宜用于丹参花药qRT ‑PCR研究的内参基因还未见报道， 为研究丹参花 药功能基因表达特性， 得到表达稳定可靠的丹参 花药的内参基因是目前迫切需要的。 发明内容 [0005]为解决上述问题， 本发明提供了一种丹参花药的内参基因， 所述内参基因为 Sm073914基因和/或Sm08316 5基因。 [0006]进一步地， 所述Sm073914基因的核苷酸序列如SEQ  ID NO.1所示； 所述Sm083165基 因的核苷酸序列如SEQ  ID NO.2所示。 [0007]本发明还提供了一种扩增前述内参基因的引物， 所述Sm073914基因的引物包括核 苷酸序列如SEQ  ID NO.3所示的正向引物和核苷酸序列如SEQ  ID NO.4所示的反向引物； [0008]所述Sm083165基因的引物包括核苷酸序列如SEQ  ID NO.5所示的正向引物和核苷 酸序列如SEQ  ID NO.6所示的反向引物。 [0009]本发明最后提供了一种Sm073914基因和/ 或Sm083165基因作为内参基因在丹参花 药基因检测中的用途。 [0010]进一步地， 所述Sm073914基因的核苷酸序列如SEQ  ID NO.1所示； 所述Sm083165基 因的核苷酸序列如SEQ  ID NO.2所示。 [0011]进一步地， 所述基因检测是检测丹参 花药基因转录表达水平。说　明　书 1/10 页 3 CN 115109865 A 3