ICS 65.020.01 DB23 B 64 黑 龙 江 省 地 方 标 准 DB23/T 2340—2019 东北接骨木组培快繁技术规程 2019-04-03 发布 黑龙江省市场监督管理局 2019-05-02 实施 发布 DB23/T 2340—2019 前 言 本标准依据 GB/T 1.1-2009 的编写规则起草。 本标准由黑龙江省森林工业总局提出。 本标准起草单位：黑龙江省林业科学研究所、黑龙江省林业科学院、东北农业大学。 本标准主要起草人：马盈、李红艳、兰士波、张玲、王丹、舒钰、王钰婷、王艳红、李天 芳、李思雯、张玉富。 2 DB23/T 2340—2019 东北接骨木组培快繁技术规程 1 范围 本标准规定了东北接骨木[Sambucus mandshurica Kitag.]组培快繁技术的培养基制备、外植体选择 与处理、诱导分化与增殖培养、生根培养、炼苗及移栽和技术档案。 本标准适用于东北接骨木组织培养生产。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 LY/T 1882 林木组织培养育苗技术规程 3 3.1 培养基制备 培养基 不定芽分化诱导培养基：1/2MS+6-BA 4.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L+琼脂6.0 g/L+蔗糖30 g/L，pH5.8。 增殖培养基：MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L+琼脂6.0 g/L+蔗糖30 g/L，pH5.8。 生根培养基培养：MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L+琼脂6.0 g/L+蔗糖30 g/L，pH5.8。 3.2 培养基灭菌 瓶装培养基需在 10 h 内完成灭菌，采用高压蒸汽灭菌锅灭菌，在压力 0.105 MPa、温度 121 ℃条件 下灭菌 20 min～25 min。 3.3 培养基保存 灭菌后的培养基放入接种室，常温条件下7d内使用，2 ℃～4 ℃条件下14 d内使用。培养基应保存 于洁净环境中，注意避光和防尘。 4 4.1 外植体选择与处理 外植体的选择 选择生长健壮、无病虫害的植株作为采样母株，剪取母树当年嫩枝茎段作为外植体，外植体大小在 2 cm～4 cm之间。 4.2 外植体灭菌 先将外植体用洗涤剂作表面清洗，清除表面的尘土，再将外植体用流水冲洗30 min后，放入消毒瓶 中。把装有外植体的消毒瓶用75%的酒精棉擦拭后放入超净工作台，在超净工作台上打开装有外植体的 消毒瓶，倒入75 %酒精并摇晃消毒瓶，浸泡消毒30 s，倒去酒精，用无菌水冲洗外植体3次～5次；然后 用0.1 % HgCl2浸泡5 min，无菌水冲洗4次～5次，并浸泡30 min，再用无菌滤纸吸干外植体表面的水分。 4.3 外植体切割 将表面消毒后的外植体切割，两端各剪去2 mm，保持茎段长度1.5 cm～2.5 cm，接种至诱导分化培 养基中。 1 DB23/T 2340—2019 5 诱导分化与增殖培养 5.1 诱导分化培养 先将培养瓶的封口膜轻轻取下，放在一边，将培养瓶口倾斜在酒精灯外焰上旋转灼烧消毒。将枪式 镊子在酒精灯上灼烧消毒并冷却后，将切割好的外植体放入不定芽分化诱导培养基中，每个培养瓶放3 个外植体，接种后盖上封口膜，并标注日期。培养室的温度控制在25 ℃±3 ℃，相对空气湿度控制在70 %～80 %，光照强度为1500lx～2000lx，光照时间为12 h/d。培养20 d～25 d。 5.2 增殖培养 外植体经诱导分化培养生成愈伤组织及不定芽，将其转接至增殖培养基中，继代培养30 d～35 d， 培养条件同5.1。 6 生根培养 选取培养瓶中长度1.5 cm～3.0 cm生长健壮的不定芽接种至生根培养基中，培养20 d～30 d，培养 条件同5.1。 7 炼苗及移栽 7.1 炼苗 7.1.1 炼苗标准 当组培苗基部长出3条以上，长度达1.0 cm～3.0 cm的根系，即可进行炼苗处理。 7.1.2 炼苗方法 将组培苗转移到日光温室中，自然散射光下炼苗，温度控制在20 ℃～25 ℃，空气相对湿度在70 %～ 80 %，每天中午在培养瓶周围喷洒雾水。3 d后揭去封口膜，2 d～4 d后即可移栽。 7.2 移栽 取出组培苗，用清水洗去苗基部的培养基，移栽至装有细沙、蛭石和珍珠岩（混合比例为1：1：1） 的混合基质的育苗盘中。育苗盘规格为35 cm×50 cm，育苗盘四壁高度不应低于7 cm，育苗基质放入育 苗容器并浇透水后，厚度不应小于5 cm，水渗干后再覆上一层土。 温室应保持70 %～80 %的空气湿度，温度应在18 ℃～25 ℃，根据土壤湿度给予植株适度的浇水处 理，育苗管理按照LY/T 1882进行。 8 技术档案 应建立东北接骨木种苗组培快繁技术档案，内容包括：材料来源、外植体类型、培养基类型、植物 生长调节剂类型浓度、诱导率、污染率、增殖系数、生根率以及移栽成活率。 2